Транскрипция мячи: Фонетический разбор слова и звуко-буквеннный анализ

Полезные ссылки в машиночитаемом формате.

Ключ архивных ресурсов (ARK)

Международная структура взаимодействия изображений (IIIF)

Форматы метаданных

Изображений

URL

Статистика

Мунши, Садаф.Транскрипция: Пересказ черно-белого клубка ниток, текст, 29 мая 2010 г .; (https://digital.library.unt.edu/ark:/67531/metadc967377/: по состоянию на 6 ноября 2021 г.), Библиотеки Университета Северного Техаса, Цифровая библиотека UNT, https://digital.library.unt.edu; кредитование ЕНТ Колледж информации.

Счет продажи для Хлои от З. Б. Оукса до Элиаса Н. Болла

Уровень 1 — НАЧИНАЮЩИЙ

Содержание: все набрано
Язык: английский
Формат: письма, дневники, листовки, брошюры, одностраничные документы
Экспертиза в предметной области / специальные навыки: не требуются

Уровень 2

Содержание: в основном напечатано, написано от руки в печатном виде или иным образом очень четко написано / читаемо
Язык: английский
Формат: памятные вещи, реклама, подписи к изображениям, телеграммы, дневники, письма, заметки
Экспертиза в предметной области / специальные навыки: не требуется

Уровень 3 — ПРОМЕЖУТОЧНЫЙ

Содержание: печатные и рукописные материалы курсивом или печатным шрифтом
Язык: английский
Формат: вырезки из газет, альбомы для вырезок, письма / дневники / заметки, которые могут включать аннотации или заметки на полях
Экспертиза в предметной области / специальные навыки: может быть полезен опыт чтения скорописного письма

Уровень 4

Содержание: рукописные материалы, в основном написанные курсивом или несколько трудные для чтения (преимущественно XIX и XX веков), аудиозаписи, которые относительно легко читать. услышать / расшифровать и научные материалы
Язык: английский и / или другие языки, в которых используется латинский шрифт, но может потребоваться использование диакритических знаков (французский, испанский, немецкий, итальянский и т. Д.).)
Формат: аудиозаписи, письма, дневники, заметки и другие письменные материалы, проекты с шаблонными полями и специальными инструкциями
Экспертиза в предметной области / специальные навыки: могут быть полезны некоторые знания неанглоязычных языков латинского алфавита / алфавита и диакритических знаков, а также опыт чтения скорописного почерка. Общие знания или знакомство с научной терминологией.

Уровень 5 — РАСШИРЕННЫЙ

Содержимое: рукописные материалы, написанные курсивом (19 века или ранее) или на языке нелатинской письменности, аудиозаписи, которые трудно слышать или написаны не на английском языке, специальные материалы / проекты такие как нумизматические проекты и записные книжки Project Phaedra
Язык: иностранные языки, использующие нелатинские символы (китайский, японский, арабский, греческий / кириллица, индейские языки и языки коренных народов и т. Д.) и английский
Формат: аудиозаписи, колоночные данные / таблицы, рукописи, письма, дневники, заметки, валютные ведомости, монеты
Знание предметной области / специальные навыки: для определенных проектов может потребоваться знание определенного языка и доступ к клавиатуре с символами на этом языке. Могут быть полезны навыки чтения скорописного почерка и знакомство с почерком 19 века (или ранее) и условными обозначениями / сокращениями, а также знание научной терминологии, данных астрофизики или лингвистики.

Феноменология в сестринских исследованиях: методология, интервью и расшифровка

Схема проведения феноменологического исследования с советами для начинающих медсестер-исследователей о том, как использовать этот подход

Автор

Паула Боллс, PGCE, бакалавр наук, RN, — координатор практики и обучения в Доверительном фонде NHS больниц Норфолка и Норвичского университета.

Balls, P. (2009) Феноменология в исследованиях сестринского дела: методология, интервью и расшифровка. Время ухода за больными ; 105: 31, ранняя онлайн-публикация.

Хотя медсестры могут относиться к феноменологическому подходу, потому что они видят в нем разделяющие ценности сестринского дела, одного этого может быть недостаточно для начала проведения такого рода исследований.

Используя примеры из моего собственного исследовательского опыта, эта статья направлена ​​на изучение того, что привлекает медсестер к этому методу и почему медсестры думают, что они могут быть хорошими в этом методе. Он также предлагает практические советы о том, как провести хорошее интервью, как и что расшифровать и как использовать цитаты для поддержки исследования.

Ключевые слова: Феноменология, исследование, интервью, транскрипция

• Эта статья прошла двойное слепое рецензирование

Загрузите PDF-файл для печати этой статьи

Феноменология поддерживает пересмотр принятого как должное переживания и, исследуя его качества, позволяет нам идентифицировать его сущность.

Следовательно, цель феноменологического исследования — не в описании большой теории или разработке модели, а в точном описании «прожитого» опыта человека по отношению к тому, что изучается.Это можно раскрыть, например, задав вопрос: «Каково это, когда тебе говорят, что у тебя рак?» Или: «Что вы испытали, когда вас выписали домой после инфаркта миокарда?»

Информация (данные) для анализа собирается в основном посредством интервью, историй или наблюдений с соответствующими людьми, у которых был такой опыт, то есть участниками исследования.

Интервью будут записаны, и после того, как данные будут собраны от нескольких человек, может быть проведена интерпретация (анализ данных).Это может быть сделано с использованием ряда подходов с целью выявления значимой информации и ее категоризации по набору тем после того, как все тексты будут проанализированы (Byrne, 2001). Эти темы будут общими для нескольких участников.

Медсестры часто обращаются к феноменологическому подходу, потому что он ценит индивидуальный опыт, и они могут чувствовать, что уже обладают некоторыми необходимыми навыками, такими как собеседование. Однако тип навыков собеседования, которыми они обладают, может не подходить для этого метода.

Используя примеры из моего собственного исследовательского опыта, эта статья направлена ​​на изучение того, что привлекает медсестер к этому методу и почему медсестры думают, что они могут быть хорошими в этом методе.

Для медсестер, которые плохо знакомы с этим типом исследований, в нем даются практические советы о том, как провести хорошее собеседование, как и что записывать и как использовать цитаты для поддержки исследования.

Феноменология привлекает все большее количество медсестер-исследователей; возможно потому, что, как и медсестры, он учитывает человека в целом и ценит его опыт.

Сестринское дело заботится о том, чтобы понимать людей, быть восприимчивыми и сочувствовать им. Он признает ценность личного опыта людей и поддерживает их в осуществлении контроля над своим собственным здоровьем (Oiler, 1982).

Медсестер учат уважать людей, слушать их и верить им. Они также могут относиться к методам, используемым для получения данных. Медсестер учат быть хорошими слушателями, сочувствовать и устанавливать взаимопонимание, часто в короткие сроки. Все это ценные навыки в феноменологии, и медсестры могут посчитать их достаточными, чтобы позволить им провести хорошее собеседование в рамках этого типа исследования.

Однако феноменологическое исследование не так однозначно, и сначала нужно решить, какой из двух основных подходов следует использовать. Это:

• Описательная феноменология;
• Интерпретативная феноменология.

Многие авторы соглашаются с тем, что если исследователям с самого начала не ясно, какой подход они используют, чтобы собирать данные, соответствующие этому методу, ценность этого исследования значительно снижается (Annells, 2007; Dowling, 2004; Crist and Tanner, 2003 г.).

Описательная феноменология, которую приписывают Гуссерлю (1963; оригинальная работа 1913), пыталась сделать феноменологию строгой наукой в ​​рамках традиций своего времени и использовала концепцию заключения в скобки для сохранения объективности. Брекетинг включает в себя отбрасывание того, что исследователь уже знает об исследуемом опыте, и приближение к данным без каких-либо предубеждений об этом явлении (Dowling, 2004; Lopez and Willis, 2004).

Впоследствии феноменологи, такие как Хайдеггер (1962), модифицировали и основали теории Гуссерля и развили традицию интерпретации (также известную как традиция герменевтики).

В принципе, интерпретирующие феноменологи считают, что невозможно избавиться от предубеждений и подходить к чему-либо совершенно пустым или нейтральным образом. Вместо этого они считают, что мы используем наш собственный опыт для интерпретации опыта других.

Мы также можем использовать наш опыт, чтобы направлять наши исследовательские вопросы.

Как исследователи, мы интерпретируем то, в чем мы сами существуем; поэтому у нас нет отстраненной точки зрения (Koch, 1995).

От медсестер, проводящих исследования с использованием описательной феноменологии, можно ожидать обсуждения того, как они ограничивают свои предубеждения и обеспечивают нейтральный подход к теме.Это может даже означать отказ от поиска литературы перед проведением исследования, чтобы избежать загрязнения интервью или влияния на него.

С другой стороны, тем, кто проводит интерпретативное феноменологическое исследование, необходимо будет показать, как их собственный опыт повлиял на выбор темы исследования, вопросов и их интерпретаций. Они могут даже записать в приложении к работе то, что они ожидают раскрыть.

Короче говоря, медсестры должны убедиться, что они знакомы с различными типами феноменологии и используют язык, соответствующий выбранному подходу.Они не должны ссылаться на скобки, если используют интерпретативную феноменологию, и не должны объяснять, как они находятся в герменевтическом круге, если используют описательную феноменологию.

Были некоторые споры о том, соответствуют ли медсестринские исследования, предполагающие использование феноменологии, стандартным методам и действительно ли результаты освещают человеческий опыт.

Некоторые авторы рассматривали, есть ли у медсестер особый способ использования феноменологии, который работает для профессии, «феноменология медсестер» (Annells, 2007; Crotty, 1996).Пока это обсуждается, я не предлагаю медсестрам изобретать свою собственную феноменологию, особенно если исследование проводится для академической награды. Медсестры-исследователи должны следовать советам, приведенным во вставке 1.

Вставка 1. Консультации перед запуском

Перед началом работы медсестры-исследователи должны:

• Убедитесь, что феноменология — правильный метод, рассмотрите другие методы и будьте уверены в целях. Например, будут ли результаты освещать или объяснять человеческий опыт и его значение, или они будут описывать его?
• Убедитесь, что у них есть время на собеседование и повторное собеседование, чтобы действительно глубже понять что-то;
• Четко укажите, какой феноменологический подход они используют — обычно описательный или интерпретативный;
• Убедитесь, что они используют язык, соответствующий этому подходу, и выберите метод анализа данных, который также будет согласованным;
• Отметьте любые способы, которыми они не могли следовать этому подходу в качестве ограничения исследования, например, меньшее количество или более короткие интервью.

Как обсуждалось ранее, существует несколько способов сбора данных для феноменологического исследования, включая рассказывание историй, магнитофонную запись, документальный анализ и фокус-группы. Наиболее распространенным методом является неструктурированное или полуструктурированное интервью (Wimpenny and Gass, 2000; Colaizzi, 1978).

Роль исследователя описывается как фасилитатор, помогающий респондентам свободно говорить. Поэтому единственными вопросами интервью должны быть те, которые требуют разъяснений, иллюстраций или дальнейшего исследования (Parahoo, 2006).

Хотя неструктурированное интервью может быть золотым стандартом в феноменологических исследованиях, медсестры не должны удивляться, если комитет по этике будет настаивать на представлении графика собеседований как части заявки.

Подготовив расписание — или, по крайней мере, имея вводный вопрос — исследователи должны учесть некоторые практические моменты.

Тихое и спокойное место для интервью — идеальное место. Однако для медсестер, у которых есть личный кабинет, это не обязательно лучшее место.Важно свести к минимуму любую разницу в силе между исследователем и участниками интервью. Медсестрам также рекомендуется продвигать свою роль исследователя, а не свою роль в организации, которая может быть выше, чем у опрашиваемого.

Более приемлемо проводить интервью в нейтральном месте, где участники расслаблены, или в знакомом им месте.

Где бы исследователи ни выбрали, они должны убедиться, что они повесили на двери табличку с сообщением о том, что собеседование продолжается, отключить все телефоны и приложить все усилия, чтобы не беспокоить их.

Также необходимо учитывать оборудование, используемое для записи. Магнитофон со встроенным микрофоном обычно не подходит, так как его нужно размещать слишком близко к участникам, чтобы можно было спокойно разговаривать, и он может улавливать слишком много внешних шумов.

Лучшим вариантом является диктофон с отворотом или выносным микрофоном, где сам диктофон можно разместить на полу в менее заметном месте. Хотя они могут быть относительно недорогими, стоит попросить коллег и представителей исследовательских областей, аудиовизуальных отделов или учебных центров одолжить их.

Какое бы оборудование ни использовалось, исследователи должны постараться сделать процесс записи максимально ненавязчивым. Всегда проводите проверку звука перед началом записи и, хотя это кажется очевидным, убедитесь, что магнитофон включен.

Хотя это не идеально, может потребоваться попросить участников высказаться. Я брал интервью у одного человека, который, когда она говорила что-нибудь существенное, понижал голос, и, позже, во время транскрипции, я пропустил некоторые части того, что она сказала.

Навыки собеседования

Некоторые авторы предложили провести с добровольцем подробное интервью на нейтральную тему перед первым добросовестным исследовательским интервью, которое также записывается (Green and Thorogood, 2004; Streubert-Speziale and Carpenter, 2003).Я, безусловно, поддержу это как ценную практику, которая стоит потраченного времени.

Выбор добровольца или коллеги, которому можно доверять честно, даст ценные отзывы о работе без ущерба для проводимого исследования. Это также поможет исследователям развить навыки интервьюирования и транскрипции, а также позволит провести реалистичное тестирование оборудования, чтобы любые проблемы можно было выявить до начала сбора данных.

Хотя медсестры используют навыки собеседования в своей практике, они могут быть неподходящими для такого рода исследований.

Медсестры могут чувствовать себя хорошими слушателями, но когда мы действительно исследуем, освещаем и мягко исследуем чей-то опыт? Как сказал Колаицци (1978): «Исследователь должен понимать, что его участник — это больше, чем просто источник данных … он должен слушать всем своим существом и всей своей личностью».

Чрезмерное нетерпение и стремление решить проблему могут помешать хорошему собеседованию, когда нужно расслабиться и тихо побудить участника продолжить и рассказать о прошлом опыте.

Первоначальный вопрос в этом типе исследования обычно бывает открытым, например: «Можете ли вы описать, на что это похоже…» или: «Расскажите мне о…». Мы надеемся, что из этого вступления будет предоставлено достаточно информации, которая позволит интервью, чтобы плавно переходить от темы к теме, в то время как мы, как интервьюеры, играем ограниченную роль в формировании ответов.

Однако это не всегда так. Некоторые участники могли сказать все, что хотели сказать, в первые пять минут, поэтому рекомендуется задать несколько вопросов или подсказок в качестве подкрепления, чтобы побудить к разговору.

Кроме того, медсестры могли выбрать тему исследования, интересную им, но никому другому, а это значит, что никто не может особо по ней сказать. После первого или второго собеседования рекомендуется сделать паузу и поразмышлять, чтобы собрать достаточно данных. Это деморализует попытки продолжать интервью, прихрамывая, и при этом стараясь не смотреть на часы. Остановка и размышление на этом этапе может заставить исследователей изменить фокус интервью, что может помочь в получении более полезных данных для последующего анализа.

Точно так же можно провести замечательное интервью, но затем окажется, что оно не охватывает те вопросы, которые хотел исследователь, а где-то сбился с пути и не был возвращен в фокус.

Я обнаружил, что когда вопрос исследования записан на листе бумаги передо мной, и я время от времени просматриваю его во время собеседования, чтобы убедиться, что собранные данные актуальны, помогает мне не сбиться с пути. Может потребоваться аккуратное возвращение интервью к исследуемой теме.

В конце интервью важно поблагодарить участников и объяснить необходимость дальнейших интервью. Исследователи также могут предложить им краткое изложение результатов, чтобы поблагодарить их за участие. Также рекомендуется обеспечить участникам копию подписанной формы согласия.

Для начинающих исследователей, если опытный исследователь предлагает позволить им послушать интервью, которое они провели, или будет присутствовать на пилотном собеседовании и дать обратную связь, это может быть ценным опытом обучения.Хотя это может вызвать смущение у начинающего исследователя, позже оно принесет дивиденды. Многие авторы согласны с тем, что привлечение более опытного феноменологического исследователя может помочь в развитии навыков интервьюирования (Streubert-Speziale and Carpenter, 2003; Drauker, 1999).

В моем исследовании навыки интервьюирования со временем улучшались с помощью размышлений и использования исследовательского дневника (журнала, в котором можно записывать свои собственные мысли).

Советы по навыкам проведения собеседований см. Во вставке 2.

Вставка 2. Консультации по навыкам проведения собеседований

Медсестры-исследователи должны:

• Используйте правильное оборудование, желательно не записывающее устройство со встроенным микрофоном;
• Проведите пилотное интервью с доверенным коллегой для получения обратной связи;
• Найдите тихое место, где их никто не побеспокоит и где участники будут чувствовать себя комфортно;
• Помните, что они должны слушать, а не говорить или решать проблемы;
• Попробуйте выбрать тему, о которой можно много сказать и которая интересна другим, чтобы собрать достаточно данных;
• Убедитесь, что собеседование идет по плану, регулярно напоминая себе о вопросе интервью и типе запрашиваемых данных.

Услышав и расшифровав собственный голос, можно выявить недостатки в технике интервью, которые исследователи предпочли бы не фиксировать на бумаге. Тем не менее, для целостности исследования важно, чтобы произносимое слово было правильно набрано со всеми его недостатками.

Один из первых шагов к тому, чтобы стать исследователем, можно определить как развитие «острого самосознания» своих личных ценностей, взглядов и любых предубеждений (Field and Morse, 1992).

Дневник исследований может помочь в этом, и я использовал журнал, чтобы размышлять о моих собственных навыках интервьюирования, моем мнении об интервью, включая установление взаимопонимания, и о том, повлияло ли мое собственное восприятие на их ход и содержание.

Я не делал никаких заметок во время самого интервью, так как это могло помешать установлению хорошего взаимопонимания, но снова использовал свой дневник, чтобы отметить невербальные аспекты, такие как озабоченность процессом записи на пленку, нервозность и другие впечатления, которые могут не будет очевидным в более поздней расшифровке стенограммы.

Каждое интервью должно быть записано как можно скорее после его проведения. Важно не недооценивать, сколько времени может занять транскрипция. Написание каждого 40-минутного интервью может занять до трех часов, не считая его повторного чтения и обеспечения точности.

Транскрипцию в феноменологии нельзя делегировать кому-то другому. Сами исследователи должны записывать интервью, тем самым живя с данными, знакомясь с ними и погружаясь в них.

Процесс транскрипции может показаться простым, но он редко бывает таким простым. Как вы показываете паузы в разговоре? А как насчет отрывков, которых вы не слышите? Как вы пишете такие выражения, как «эээ», «да» и другие — или вы вообще пытаетесь их написать?

Слушая мои стенограммы, часто звучит так, будто я задал несколько вопросов вместе, хотя на самом деле первый вопрос вызвал невербальный вопрос, и поэтому я задал второй вопрос, чтобы уточнить.

Санделовски (1994) признал трудности, присущие транскрипции, когда могут быть сохранены только определенные особенности взаимодействия, и предупредил нас о возможности искажения. Она написала несколько текстов по транскрипции и анализу данных, которые необходимо прочитать перед тем, как приступить к этому аспекту исследования.

Для целей моего собственного исследования я выбрал подход, согласно которому, если я объясню в своей рецензии, что я расшифровал и почему, это должно быть приемлемо.Таким образом, несмотря на то, что собеседование было верным и включало все содержание, даже если оно не было грамматическим, выражения, указывающие на внимательность или колебания участников, не включались. Иногда использовался смех, чтобы стенограмма лучше отражала дух интервью.

Я очень просто напечатал свои интервью в виде таблицы с двумя столбцами: один для того, кто говорил, а другой — для того, что было сказано. Санделовски (1995) также описал метод «проверки» интервью, процесс, которому я следовал, при котором стенограмма снова читается вместе с исходной аудиозаписью.

Во время этого процесса проверки я выделил все моменты, которые показались мне важными, и добавил третий столбец к транскрипции, чтобы записать число на моем счетчике ленты. Я также проверил свой исследовательский дневник на предмет каких-либо существенных невербальных особенностей или впечатлений, которые у меня были во время интервью. См. Совет по транскрипции во вставке 3.

Вставка 3. Транскрипция

Медсестры-исследователи должны:

• Расшифровывайте то, что они слышат, даже если это звучит неправильно, показывает исследователей в плохом свете или затрудняет пунктуацию;
• Используйте дневник исследования для записи невербальных аспектов интервью, включая впечатления и свои собственные навыки собеседования;
• Напечатайте сами стенограммы и не недооценивайте, сколько времени это займет;
• Решите, как они будут поступать с непонятными частями стенограммы и невербальными аспектами или выражениями, которые трудно написать, и объясните это в описании.

В этой статье не рассматривается процесс анализа данных, который может быть выполнен с использованием множества различных методов. Выбранный вариант должен соответствовать типу феноменологического подхода — интерпретационному или описательному — и исследователи должны обосновать свой выбор.

Здесь достаточно сказать, что какой бы метод ни был выбран, он предполагает разбиение опыта участников на темы, используя их собственные слова.В феноменологии они представлены, часто в относительно расширенных цитатах, чтобы проиллюстрировать темы.

До тех пор, пока я не проводил такого рода исследования, я никогда не осознавал, насколько личная целостность требуется от феноменологических исследователей, особенно в представлении результатов.

Теоретически исследователи могут быть чрезвычайно избирательны в том, что они хотят цитировать, и пропуск определенных разделов стенограммы может изменить смысл участников. Следовательно, у них есть возможность манипулировать данными своих исследований, чтобы отразить любую основную повестку дня, которую они могут иметь, и, в некоторой степени, выбрать требуемые результаты.

Принято считать, что единственный законный источник феноменологических данных — это индивид, который жил в исследуемой реальности. Таким образом, стенограмма становится средством, с помощью которого мы делимся или заимствуем этот опыт посредством его описания. Исследователи обязаны оставаться верными словам и значениям участников и представлять их опыт.

Слова отдельных участников очень сильны и могут быть очень эмоциональными.Одна хорошая цитата может заменить несколько строк пояснительного текста и часто не требует дополнительных пояснений.

В феноменологии используется несколько строк непрерывного текста, которые должны быть представлены с идентификатором участника в скобках в конце, обычно буквой или числом. Таким образом, можно составить словесную картину различных участников и их индивидуального опыта.

Приписывать ложное значение посредством выбора цитат — это плохая отдача для участников, которые посвятили проекту свое время и приверженность.Как зарегистрированные медицинские работники, медсестры обязаны действовать добросовестно (NMC, 2008), и это должно распространяться на их исследовательскую деятельность.

Качество феноменологического исследования оценивается по его прозрачности и возможности аудита. Поэтому описание каждого этапа процесса, а также объяснение и обоснование действий, предпринятых исследователем, имеют важное значение, особенно если исследование проводится для получения академической награды.

Джаспер (1994) сказал, что вопрос об обобщении (способности применять исследования к другим условиям) неуместен в феноменологии, потому что цель не состоит в том, чтобы создать теорию общего применения.Однако, если исследователи предоставляют достаточно подробностей об условиях, участниках и процессе исследования, исследование не только может быть подвергнуто аудиту, но также может означать, что его можно повторить в других условиях.

Один из способов продемонстрировать, что результаты точно отражают опыт участников, — это организовать второе интервью после составления резюме результатов и соответствующих цитат и поделиться ими с участниками.

В некоторых исследованиях это называется проверкой членов, хотя этот термин не всегда ассоциируется с феноменологией.

Если участники могут осознать свой собственный опыт в результатах и, возможно, увидеть, как используются их собственные слова, это придает достоверность результатам.

Медсестрам не следует полагать, что феноменологические исследования — это простой вариант или что они уже обладают необходимыми навыками для их проведения. Понимание различных подходов в феноменологии необходимо для управления и информирования исследовательского процесса на каждом этапе.

Начинающим исследователям следует обращаться за советом и поддержкой, но их не должны отпугивать язык или сложность феноменологии, а также процесс интервьюирования и транскрипции.

Проведение исследования следует рассматривать как процесс обучения, и навыки будут развиваться со временем и с опытом. У большинства медсестер есть уравновешенная практичность и рефлексивный подход, который в сочетании с хорошим чувством юмора и способностью признавать ошибки поможет им развить исследовательские навыки и знания, которые принесут пользу пациентам, коллегам и более широкое сообщество медсестер.

Аннеллс, М. (2007) Что общего у качественных медсестринских исследований в наши дни? Журнал клинического сестринского дела; 16: 2, 223–224.

Бирн М. (2001) Герменевтика как методология текстового анализа. AORN; 73: 5 , 968–970.

Colaizzi, P. (1978) Психологическое исследование с точки зрения феноменолога. В: Валле Р., Кинг М. (ред.) Экзистенциальные феноменологические альтернативы психологии . Нью-Йорк, Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета.

Крист, Дж. Д., Таннер, А. (2003) Интерпретация / анализ в герменевтической интерпретирующей феноменологии. Медсестринское дело; 52: 3, 202–205.

Crotty, M. (1996) Феноменология и исследования в области сестринского дела. Южный Мельбурн: Черчилль Ливингстон.

Даулинг, М. (2004) Герменевтика: исследование. Медсестра-исследователь; 11: 4, 30–41.

Drauker, C.B. (1999) Критика герменевтических исследований Хайдеггера. Журнал усовершенствованного медсестринского дела; 30, 36–73.

Филд П.А., Морс Дж. (1992) Медсестринское дело — применение качественных подходов . Лондон: Чепмен-холл.

Грин, Дж., Торогуд, Н. (2004) Качественные методы исследований в области здравоохранения. Лондон: Sage Publications.

Хайдеггер, М. (1962) Бытие и время . Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Харпер и Роу.

Husserl, E. (1963) Идеи: общее введение в чистую феноменологию .Перевод Бойса Гибсона, W.R. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Collier Books. Из немецкого оригинала 1913 года.

Koch, T. (1995) Интерпретативные подходы в исследованиях сестринского дела: влияние Гуссерля и Хайдеггера. Журнал усовершенствованного медсестринского дела ; 21: 5, 827–836.

Джаспер М. (1994) Вопросы феноменологии для исследователей сестринского дела. Журнал усовершенствованного медсестринского дела; 19: 309–314.

Лопес, К., Уиллис, Д. (2004) Описательная феноменология против интерпретирующей: их вклад в знания медсестер. Качественные медицинские исследования; 14: 5, 726–735.

NMC (2008) Кодекс: стандарты поведения, работы и этики для медсестер и акушерок . Лондон: NMC.

Ойлер, К. (1982) Феноменологический подход к исследованиям в области сестринского дела. Медсестринское дело; 31: 3, 178–181.

Parahoo, K. (2006) Медсестринское исследование: принципы, процессы и проблемы . Хэмпшир: Пэлгрейв Макмиллан.

Санделовски, М. (1995) Качественное исследование: что это такое и с чего начать. Исследования в области сестринского дела и здравоохранения ; 18: 371–375.

Санделовски М. (1994) Использование цитат в качественных исследованиях. Исследования в области сестринского дела и здравоохранения; 17: 479–82.

Streubert-Speziale, H.J., Carpenter, D.R. (2003) Качественные исследования в сестринском деле: продвижение человеческого императива. Лондон: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс.

Уимпенни, П., Gass, G. (2000) Интервью по феноменологии и обоснованной теории: есть ли разница? Журнал усовершенствованного медсестринского дела; 31: 6, 1485–1492.

Фактор транскрипции DAF-16 / FOXO функционирует как регулятор врожденного эпидермального иммунитета

Рисунок 3

BLI-3-опосредованное образование ROS играет решающую роль в ядерном накоплении DAF-16.

(A) Уровни ROS были повышены у червей дикого типа после грибковой инфекции и обработки колючими шариками.Червей подвергали воздействию D. coniospora (DC) и колючих шариков (SB) в течение 8 ч. Уровни АФК определяли с помощью DCF-DA. Индукция ROS D. coniospora и колючими шариками была отменена нокдауном bli-3 РНКи. Данные выражены в процентах от контроля (N2). Эти результаты представляют собой средние значения ± стандартное отклонение четырех экспериментов. * P < 0,05 по сравнению с контролем (N2). (B) Ядерная транслокация DAF-16 была уменьшена bli-3 РНКи. Трансгенных червей, экспрессирующих DAF-16 :: GFP, подвергнутых воздействию bli-3 РНКи, обрабатывали D.coniospora (DC) и колючие шары (SB). После 12 ч обработки наблюдали паттерн экспрессии DAF-16 :: GFP. В нижней части показана количественная оценка распределения DAF-16. n = 100–110 нематод на состояние. Эти результаты представляют собой средние значения ± стандартное отклонение четырех экспериментов. * P < 0,05 по сравнению с контролем (DC и SB). (C) Экспрессия Psod :: GFP была повышена у животных WT, подвергшихся воздействию D. coniospora или колючих шариков в течение 12 часов. bli-3 РНКи ингибирует экспрессию Psod-3 :: GFP , индуцированную D.coniospora . * P < 0,05 по сравнению с контролем (N2). (D и E) Вклад BLI-3 в грибковую инфекцию и чувствительность к физическим повреждениям. bli-3 РНКи значительно снижала выживаемость червей дикого типа, подвергшихся воздействию D. coniospora (D) и колючих клубков (E). P <0,001 относительно контроля с пустым вектором. Однако РНКи bli-3 не увеличивала чувствительность мутантов daf-16 (mu86) к уничтожению под действием D.coniospora (D) и колючие шарики (E).

doi: https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1003660.g003

Транскрипция протокола IV, V, VI

IV

в коробке F.O.B. автомобили Куинси Адамс * указанной партии второй части памятника в соответствии с принятым указанным комитетом проектом возводится из гранита Medium Quincy. Статуя из гранита Вестерли Р.И. Все надписи на штампе этого памятника должны стоить 15 центов каждая.(A) указанный памятник должен быть восемнадцати футов в высоту и следующих размеров.
* Куинси Адамс означает железнодорожную станцию ​​в Куинси, штат Массачусетс.

Нижнее основание 7’0 «X 7’0» X 1’5 «

Второе основание 5’4″ X 5’4 «X 0’11»

Третье основание 4’8 «X 4’8» X 1’10 «

Матрица 3’10» X 3’10 «X 5’0»

Крышка 4’6 «X 4’6» X 2’2 «

Статуя должна быть 6’8 дюймов в высоту

На третьем основании памятника будут вырезаны четыре эмблемы, представляющие четыре ветви буквы U.S. Service, и даты

V

вырезать на втором основании, как показано на рисунке. Четыре стороны штампа, подлежащие полировке, и четыре полированных шара диаметром семь дюймов, которые должны быть помещены на четыре угла крышки указанного памятника.

(B) Качество изготовления и материалы, использованные при выполнении и завершении памятника и статуи, должны быть первоклассными, и указанная сторона первой части соглашается завершить все работы, предусмотренные настоящим соглашением, не позднее 1 мая. 1906 г.В случае возникновения проблем с работой, задержек или неконтролируемых несчастных случаев, необходимо выделить разумный срок (sic) времени для завершения работы.

(C) Указанная сторона первой части соглашается установить памятник на его основании в Йорк-Виллидж, штат Мэн, и гарантировать его от любых повреждений при его установке на сумму в пятьдесят долларов (50 долларов США). Указанная партия

VI

первой части, однако, не принимает на себя никаких рисков или расходов при ее транспортировке из Куинси на участок, где должен быть установлен памятник.

Второй: указанная сторона второй части соглашается с полным исполнением соглашения стороны первой части, изложенного в предыдущем параграфе настоящего контракта, об утверждении и принятии указанного памятника и о выплате указанной стороне первой части. сумма в размере одной тысячи долларов (1000 долларов) наличными после завершения и установки указанного памятника, остаток должен быть выплачен 1 сентября 1906 г. или до этой даты. В подтверждение чего мы, упомянутые Фредерик Барникоат и Час. У. Уокер, Эдв. С. Маршалл, Джон Деннет, Дэниел А.Стивенс, Уолтер М. Смит, Джон Э. Стейплс, Моисей Дж. Адамс.

Транскрипция

границ | Взаимодействие между BALL и CREB-связывающим белком поддерживает ацетилирование h4K27 активных генов у Drosophila

Введение

У многоклеточных животных ковалентные модификации гистонов действуют комбинаторным образом, регулируя экспрессию генов развития (Allis and Jenuwein, 2016; Zhao and Shilatifard, 2019). Среди этих модификаций ацетилирование гистона h4 лизина 27 (h4K27ac) считается признаком активации гена, опосредованной группой триторакс (trxG), которая противодействует репрессии белками группы Polycomb (PcG) (Tie et al., 2009). Хотя эффект подавления сайленсинга h4K27ac и его катализирующего фермента CREB-связывающего белка (CBP) широко задокументирован у мух и млекопитающих, то, как этот CBP-опосредованный h4K27ac поддерживается на активно транскрибируемых генах, остается неуловимым (Tie et al., 2009; Pasini et al. ., 2010). В Drosophila присутствие только одного гомолога CBP, известного как nejire , позволяет понять его функцию. Важно отметить, что данные секвенирования иммунопреципитации хроматина (ChIP-seq) из ранее опубликованных отчетов показали присутствие CBP в большинстве активно транскрибируемых генов в клетках S2 Drosophila (Philip et al., 2015). Наша лаборатория недавно показала, что Drosophila Ballchen (BALL), известная серин-треониновая киназа, которая опосредует фосфорилирование гистона h3AT119 (Aihara et al., 2004), ассоциируется с генами-мишенями trxG, обогащенными h4K27ac (Khan et al., 2021). В этом отчете мы дополнительно проанализировали связь между BALL, h4K27ac и CBP. Мы обнаружили, что BALL не только связывается с хроматином, обогащенным h4K27ac, но также имеет более 77% сайтов связывания генома с CBP. И BALL, и CBP в первую очередь связываются с сайтами начала транскрипции (TSS) и областями размером до 1 Kb выше TSS.Четыре из пяти основных мотивов ДНК в хроматине, которые связывает CBP, также связаны с BALL. Важно отметить, что BALL биохимически взаимодействует с CBP и положительно способствует поддержанию h4K27ac с помощью CBP, поскольку истощение BALL приводит к уменьшению h4K27ac.

Результаты и обсуждение

Недавно мы сообщили, что BALL проявляет trxG-подобное поведение, способствуя поддержанию активации генов у мух (Khan et al., 2021). Поскольку было показано, что BALL совместно с Trithorax (TRX) локализуется в генах, обогащенных h4K27ac, мы исследовали, связывается ли BALL с хроматином вместе с CBP.С этой целью мы проанализировали данные ChIP-seq BALL (Khan et al., 2021) и CBP (Philip et al., 2015) из Drosophila S2 клеток. Сравнение связывания BALL и CBP с хроматином выявило их совместную занятость у 4577 генов (рисунок 1A и дополнительная таблица 1). Дальнейший анализ показал, что как BALL, так и CBP имеют общие сайты связывания в геномных областях на расстоянии до 1 Kb выше сайтов начала транскрипции (TSS), однако CBP также обнаруживается в областях, которые дальше расположены выше TSS (Рисунки 1B, C).Этот результат согласуется с сообщениями о связывании CBP в промоторных и энхансерных областях (Philip et al., 2015; Boija et al., 2017). Анализ геномного распределения CBP и BALL с точки зрения их связывания в промоторных областях, теле гена, интронах и межгенных областях также выявил сходные паттерны связывания хроматина (рис. 1D). Из 6,553 перекрывающихся сайтов связывания как для BALL, так и для CBP 5,865 в основном сгруппированы в промоторных областях (дополнительный рисунок 1 и дополнительная таблица 2).Важно отметить, что промоторы разных генов имеют различное количество пиков, т.е. некоторые промоторы имеют несколько сайтов связывания, а другие — один сайт связывания. Профиль связывания BALL близко повторяет профиль связывания CBP и h4K27ac в большинстве областей генома. Кроме того, большинство этих общих локусов также экспрессировалось в клетках S2, что было подчеркнуто анализом данных RNA-seq (Gan et al., 2010; Figure 1E). Было обнаружено, что из 4577 генов, в которых присутствуют как BALL, так и CBP, 3114 (68%) активно транскрибируются в клетках S2 (рисунок 1F и дополнительная таблица 1).Сравнение наиболее высоко оцениваемых мотивов ДНК, присутствующих в областях хроматина, где преимущественно связываются как BALL, так и CBP, выявило явное сходство (рис. 1G). В совокупности наши данные подчеркивают, что паттерн связывания BALL существенно перекрывает связывание CBP по всему геному. Эти результаты побудили нас исследовать, взаимодействуют ли BALL и CBP биохимически друг с другом. С этой целью были проведены эксперименты по коиммунопреципитации (co-IP) с использованием клеток S2, которые стабильно экспрессировали BALL, меченный FLAG.Иммунопреципитация BALL-FLAG привела к преципитации эндогенного CBP по сравнению с контролем с пустым вектором (рис. 1H). Для подтверждения этого взаимодействия был проведен реципрокный ко-IP с использованием антитела против CBP, что привело к иммунопреципитации BALL-FLAG (рис. 1I) по сравнению с имитацией IP. Эти результаты иллюстрируют неизвестное до сих пор взаимодействие между BALL и CBP, которое может объяснять их совместное присутствие в активно транскрибируемых регионах.

Рисунок 1. Полногеномная занятость BALL, CBP и их биохимическое взаимодействие в клетках Drosophila S2. (A) Диаграмма Венна, показывающая существенное перекрытие между CBP и BALL связанными генами в клетках S2. И BALL, и CBP совместно связаны в 4577 генах. (B, C) Сравнение полногеномной занятости CBP и BALL показывает огромное сходство. И CBP, и BALL предпочтительно связывают хроматин перед TSS (B) . Тепловые карты, покрывающие область ± 2 Кбайт от TSS, показывают занятость CBP и BALL по геному (C) . CBP и BALL в основном совместно занимают регионы от TSS до 1 Kb upstream. (D) Процентное распределение связывания CBP и BALL по разным признакам генома показывает сходный паттерн, когда и CBP, и BALL в основном находятся в промоторных областях. (E) Интегрированный просмотр данных ChIP-seq в браузере генома показывает перекрытие между профилями связывания хроматина BALL (верхняя панель), CBP (средняя панель) и h4K27ac (нижняя панель). Гены, совместно занятые BALL и CBP, демонстрируют активную транскрипцию, как следует из анализа РНК-секвенирования клеток S2 (нижняя панель). (F) Диаграмма Венна, изображающая гены, обогащенные CBP и BALL, перекрытые с активно транскрибируемыми генами в клетках S2.Было обнаружено, что большинство генов, которые были совместно связаны CBP и BALL, транскрипционно активны. (G) Четыре из пяти верхних коротких ДНК-связывающих мотивов в CBP-ассоциированном хроматине, полученном из базы данных MEME-ChIP, демонстрируют поразительное сходство с аналогичными мотивами в BALL-связанном хроматине. Каждый мотив представлен с его соответствующим обратным дополнительным мотивом и значением E . (H) Иммуноблоты эндогенного CBP и меченного FLAG BALL после совместной иммунопреципитации (IP) с использованием антитела против FLAG в клетках Drosophila S2, содержащих индуцибельный BALL-FLAG.По сравнению с IP из контрольных клеток с пустым вектором (EV), заметное обогащение CBP можно увидеть в IP с использованием антитела против FLAG, что также привело к обогащению FLAG-BALL. (I) Иммуноблоты эндогенного CBP и меченного FLAG BALL после совместной иммунопреципитации (IP) с использованием антитела против CBP в клетках S2 Drosophila . BALL-FLAG обогащен после IP антителом против CBP по сравнению с имитацией IP, использованной в качестве отрицательного контроля. Обогащение CBP подтверждает успешный IP.

Затем мы исследовали, влияет ли истощение BALL на уровни h4K27ac, опосредованные CBP, во всем мире.Вестерн-блоттинг клеток, в которых был сбит ball , выявил резкое снижение уровней h4K27ac по сравнению с контрольными клетками, обработанными дцРНК против LacZ (фиг. 2A). Глобальные уровни гистона h4 оставались неизменными, которые использовались в качестве нормализационного контроля для количественной оценки снижения уровней h4K27ac (дополнительный рисунок 2). Чтобы подтвердить это открытие in vivo , мы создали гомозиготные митотические клоны ball ² с использованием системы flp / FRT.Иммуноокрашивание имагинальных дисков с помощью ball ^{2 мутантных клонов} показало резкое снижение h4K27ac (рисунки 2B-E и дополнительный рисунок 3). Примечательно, что не все гомозиготные митотические клоны ball ² демонстрируют уменьшение h4K27ac, что повторяет аналогичные эффекты, наблюдаемые в мутантных клонах trx на экспрессию активно транскрибируемых генов. Это можно объяснить сложным взаимодействием различных клеточных сигнальных путей в имагинальных дисках (Klymenko and Müller, 2004).

Рисунок 2. Истощение BALL влияет на уровни h4K27ac. (A) Вестерн-блот-анализ лизатов целых клеток из клеток Drosophila S2, обработанных дцРНК, против ball , демонстрирует сниженный уровень h4K27ac. Клетки, обработанные дцРНК против LacZ , служили контролем, тогда как общие уровни гистона h4 использовали в качестве нормирующего контроля в иммуноблоттинге. Анализ относительных интенсивностей сигнала h4K27ac, нормализованных по отношению к общему уровню h4 с помощью ImageJ, показал более чем 37% снижение h4K27ac при истощении ball .Эксперимент проводили трижды, и его повторения показаны на дополнительном рисунке 2. (B – E) Имагинальные диски Haltere, содержащие митотические клоны мяча ball ² , были окрашены анти-h4K27ac (D) . Митотические клоны, отмеченные отсутствием GFP, показали резкое снижение h4K27ac. Имагинальные диски показали однородное окрашивание DAPI (B) . Митотические клоны обведены и выделены стрелками. Сбивание ex vivo мяча выполняли в трех повторностях, в то время как эксперимент с митотическим клоном проводили в двух повторностях.

Вместе эти результаты демонстрируют, что BALL положительно влияет на CBP-опосредованный h4K27ac, но молекулярная природа этого взаимодействия между BALL и CBP остается неясной. Являются ли они частью единого мультибелкового комплекса и взаимодействуют ли они напрямую друг с другом или это связано с косвенным взаимодействием, остается неясным. Поскольку BALL представляет собой гистоновую киназу, необходимо исследовать, является ли влияние, которое BALL оказывает на h4K27ac, посредством фосфорилирования соседних остатков h4 или за счет прямого фосфорилирования CBP или взаимодействующих с ним белков.Интересно, что VRK1 (родственная Vaccinia kinase 1), гомолог BALL у млекопитающих, как было установлено, фосфорилирует CREB по серину 133 (Kang et al., 2008). Известно, что это фосфорилирование усиливает взаимодействие CREB с CBP, что приводит к усилению транскрипции генов-мишеней CREB (Radhakrishnan et al., 1998). Связи VRK1, CBP и CREB могут объяснять регуляцию CBP-опосредованной активации генов с помощью BALL у мух, что требует дальнейшего исследования.

Материалы и методы

Анализ последовательности иммунопреципитации хроматина

Анализ последовательности иммунопреципитации хроматина (ChIP-seq) выполняли, как описано ранее (Khan et al., 2021). Вкратце, наборы данных секвенирования были загружены на общедоступный веб-сервер Galaxy (Jalili et al., 2020). Используя Bowtie версии 2, данные ChIP-seq были сопоставлены с геномом Drosophila (dm6) (Langmead et al., 2009). Вызов пика выполнялся с использованием MACS версии 2 с FDR ( q -value) 0,05 в качестве отсечки и расширения чтения на 200 п.н. (Zhang et al., 2008). Список аннотированных пиков был извлечен из файла пиков с помощью ChIPseeker (Yu et al., 2015). Сравнительные тепловые карты BALL и CBP были созданы с использованием deepTools, (bamCompare, computeMatrix и plotHeatmap) (Ramírez et al., 2016). Чтобы найти перекрывающиеся пики между BALL и CBP, в базе данных галактик использовались «интервалы пересечения постельных принадлежностей». MEME-ChIP — обнаружение мотивов, анализ обогащения и кластеризация в больших наборах нуклеотидных данных (Galaxy Version 4.11.2 + galaxy1) использовались для генерации вывода DREME (Discriminative Regular Expression Motif Elicitation) данных BALL и CBP ChIP-seq для de novo открытие мотива (Jalili et al., 2020). Данные ChIP-seq CBP, BALL и h4K27ac были взяты из GSE64464 (Philip et al., 2015), GSE165685 (Khan et al., 2021) и GSE81795 (Rickels et al., 2016) соответственно. Данные РНК-seq Drosophila S2 клеток (GSM480160) (Gan et al., 2010) были картированы с использованием программы TopHat Gapped-read mapper для данных RNA-seq (Galaxy Version 2.1.1). Счетчик считывания экзонов был рассчитан с использованием htseq-count для создания списка активных генов.

Создание стабильной клеточной линии BALL

Для создания стабильной клеточной линии с индуцируемой экспрессией BALL, меченного FLAG, w ¹¹¹⁸ эмбрионов использовали для получения кДНК и амплификации ball CDS.CDS ball сначала клонировали в векторе входа pENTR-D-TOPO (Thermo Fisher Scientific) с последующим субклонированием в векторе назначения pMTWHF , подарком от Paro lab (Kockmann et al., 2013), настройка реакции LR-клоназы в соответствии с протоколом производителя (Thermo Fisher Scientific). Полученная векторная карта pMT-ball-FLAG представлена ​​на дополнительном рисунке 4. Клетки Drosophila S2 трансфицировали pMT-ball-FLAG с использованием реагента для трансфекции Effectene (Qiagen), и стабильную клеточную линию получали следующим образом инструкция производителя (Qiagen).

Коиммунопреципитация

Для совместной иммунопреципитации клетки Drosophila S2, экспрессирующие FLAG-меченный BALL, дважды промывали PBS после их сбора центрифугированием при 3000 об / мин в течение 5 мин. Клетки суспендировали в 1 мл буфера для лизиса, содержащего 140 мМ NaCl, 20 мМ Трис (7,4 pH), 1 мМ ЭДТА, 0,5% NP40, 10% глицерин, 0,2 мМ Na ₂ VO ₄ , пепстатин 0,5 мкг / мл, лейпептин 0,5 мкг / мл, апротинин 0,5 мкг / мл и PMSF 1 мМ с последующей инкубацией на льду в течение 30 мин.Лизат центрифугировали при 14000 об / мин в течение 15 минут и супернатант добавляли к 40 мкл агарозных гранул M2-FLAG (Sigma-Aldrich), которые были предварительно промыты буфером для лизиса. После 1 ч инкубации шарики трижды промывали буфером для лизиса, ресуспендировали в 30 мкл буфера для загрузки Лэммли и нагревали при 95 ° C в течение 5 минут. Образцы IP загружали в готовые трис-ацетатные градиентные гели Novex с 3–8% (Thermo Fisher Scientific). Для CBP IP смесь 1: 1 белков A и G Dyna (Thermo Fisher Scientific) инкубировали с антителом против CBP в течение ночи.Готовили лизаты клеток и инкубировали в течение 1 ч при 4 ° C с комплексом гранулы-антитело. После трехкратной промывки буфером для лизиса образцы подвергали вестерн-блоттингу, как описано выше.