Разобрать по составу снеговой: Страница не найдена

Упражнение 5. Разобрать по составу. Иголочка, журавлиная, садик, выдумка, замазка, выходной, липовый, стройка, звонок, цветной, ласточка, тёмный, ночка, снеговой, примерка, северный, сладкий, поднос, тёплый, вырубка, говоришь, карандаш, избушка, беленький, сиреневый, зверёк, звёздочка, яблонька, колхозный, городок, садовый, ходовой, думать, передумать, сельский, хвостик, хитрая. Упражнение 6. Спишите, вставляя пропущенные буквы. Запишите проверочные слова. В глаголах выделите приставки и корни. 1.Ветер унёс тучу гр…зовую. 2.Утки прон…слись с криком. 3.Таня перен…сла братца через ручей. 4.П…чтальон принёс телеграмму от сестры. 5.Отн…си книгу товарищу. 6.Волны вын…сли на поверхность моря обломки корабля. 7. Дачу обн…сли новым забором. 8.Все д…роги, все тр…пинки белым снегом зан…сло. 9.Н…сется в небе стая журавлей.

Упражнение 5. Разобрать по составу. Иголочка, журавлиная, садик, выдумка, замазка, выходной, липовый, стройка, звонок, цветной, ласточка, тёмный, ночка, снеговой, примерка, северный, сладкий, поднос, тёплый, вырубка, говоришь, карандаш, избушка, беленький, сиреневый, зверёк, звёздочка, яблонька, колхозный, городок, садовый, ходовой, думать, передумать, сельский, хвостик, хитрая. Упражнение 6. Спишите, вставляя пропущенные буквы. Запишите проверочные слова. В глаголах выделите приставки и корни. 1.Ветер унёс тучу гр…зовую. 2.Утки прон…слись с криком. 3.Таня перен…сла братца через ручей. 4.П…чтальон принёс телеграмму от сестры. 5.Отн…си книгу товарищу. 6.Волны вын…сли на поверхность моря обломки корабля. 7. Дачу обн…сли новым забором. 8.Все д…роги, все тр…пинки белым снегом зан…сло. 9.Н…сется в небе стая журавлей.

Методические рекомендации по проведению урока -Контрольный диктант»Снеговик» и его анализ. | Методическая разработка по русскому языку (3 класс) на тему:

Контрольный диктант ( январь- )

3 класс  

Тема. Правописание  непроизносимых   согласных  в корне слова.

Снеговик.

Стоит чудесный зимний день. Падает лёгкий пушистый снег. Вся местность покрылась снеговой периной. Деревья одеты в белые шубки. Спит пруд под ледяной коркой.

   Выбежали ребятишки  на улицу. Они стали лепить снеговика. Глазки ему сделали из светлых льдинок. Нос и рот из морковки, а бровки из черных угольков.  Прекрасный получился снеговик ! Радостно и весело всем зимой!

Грамматические задания:

1.Разобрать   второе  предложение  по  членам  предложения .

2.Разобрать по составу слова:

  зимний, шубки.  белые, морковки, местность.

3.Найти в тексте 2 слова с безударной гласной в корне слова .

 2 слова с парной согласной.

2 слова с непроизносимой согласной  в корне слова.

Подобрать к ним проверочные слова и записать.

АНАЛИЗ   ДИКТАНТА :

1.Писали работу_____________________________________

2.Безошибочно:______________________________________

3. Допустили ошибки на: безударную гласную -______________________________

— парную согласную-_______________________________________________________

-непроизносимую согласную-_______________________________________________

Разделительный Ь-_____________________________________________________

Ьпоказатель мягкости согласных-_______________________________________

Прочие ошибки-__________________________________________________________

Типичные ошибки-_______________________________________________________

Написали работу на «5»___________»4»-_______________»3»-_________________

«2» (фамилии)-___________________________________________________________

% успеваемости-______________________________________________________

% качества-____________________________________________________________

АНАЛИЗ  ЗАДАНИЯ:

1.Писали работу-______________________________________________

2.Безошибочно-_________________________________________________

3Не справились с заданием

№1_____________________________________________________________

№2-_____________________________________________________________

№3-_______________________________________________________________

№ 4- ______________________________________________________________

Выполнили задание на «5»-___________________

«4»-_________________________________________

«3»-________________________________________

«2»-_____________________________________________

Типичные ошибки-___________________________________________________

% успеваемости — ________________________________________

% качества-_______________________________________________

Администрация города Свердловска и Свердловского района

На вебинаре рассматривали основные трудности выделения младшими школьниками значимых частей слова. Сравнили деятельностную и знаниевую парадигму, их главные ценности, содержание. Приоритетом современного образования является деятельностная парадигма. 
  После этого перешли к разбору слова. Спикер обратила внимание на правила в учебнике: что такое окончание – нашли несоответствие трактовки и фактического разбора. Т.е. способ действия напрямую зависит от понятия. 

Например:
  Окончание – это значимая часть слова, которая указывает на грамматические значения слова, например, на число. Способ: измени по числу (и/или по другим грамматическим значениям).
  Родственные слова – это слова, которые образованы от одного слова (или одно от

Проанализировав причины неверного понимания учащимися понятий, приступили к разбору слова. Разобрались в том, как же разобрать слово по составу. Для этого необходимо понять «что делать?» и «как делать?». 
   Нам был предложен эффективный алгоритм разбора по составу, а также примеры упражнений для его усвоения.

Учителя будут  использовать данную информацию для дальнейшей работы.
 

Надежда Брянцева, учитель начальных классов ГОУ ЛНР «Свердловская основная школа №4»

Урок русского языка. Тема: «Сложные слова» 3 класс | Начальная школа

Урок русского языка. Тема: «Сложные слова» 3 класс

Автор: Эльвира Риферовна Гареева

Организация: МБОУ-Гимназия с.Чекмагуш

Населенный пункт: Республика Башкортостан, с. Чекмагуш

Дидактическая цель: создать условия для формирования понятия «сложные слова» и введение его в систему знаний.

Задачи: 1) познакомить учащихся с образованием сложных слов;

2) развивать умение находить сложные слова среди других слов, развивать мыслительные операции, речь учащихся;

3) воспитывать интерес к предмету.

Ход урока.

1.Организационный момент. Психологический настрой.

Дети садятся и закрывают глаза, слушают учителя, и последнее слово каждой фразы говорят хором.
У: На уроке ваши глаза внимательно смотрят и всё…
Д: видят.
У: Уши внимательно слушают и всё…
Д: слышат.
У: Голова хорошо…
Д: думает.

— Итак, начинаем урок русского языка. Какие основные учебные умения помогут на уроке? (умение слушать, слышать, думать)

У.- Запишите число, классная работа.

Минутка чистописания.

У.- Показ, каких букв записан?

Д.- Показ букв «о» и « е».

У.- Что общего у этих букв?

Д.- Они обозначают гласные звуки.

У. – Какая из этих букв особенная? Почему?

Д. – буква «е», т. к. она может обозначать два звука{й} и {э} в начале слова, после гласных и после ь и ъ знаков.

У: Запишите, сохраняя закономерность, продолжите до конца строки.

2. Учитель: Начинаем первый этап урока – ОИРЕНТИРОВОЧНО-МОТИВАЦИОННЫЙ ЭТАП.

:- Ребята, вы готовы сделать новые открытия?

Задание 1. Прочитайте, предложите задания к тексту. Работаем в группах.

Зима. Мелькают в воздухе пушистые снежинки.

Теплым одеялом укрывает снег землю. Метели заметают лесные тропы. А детям радость. Они играют в снежки, строят снежные крепости.

………………………………………………………………………………………………………

-Отвечает 1 группа.

Уч-ся:-Прочитать выразительно.

-Разобрать предложения по частям речи и по членам предложения.

-Найти и выписать родственные слова.

-Списать текст и разобрать по составу родственные слова.

Учитель: Есть дополнения?

—Выписать однокоренные слова и разобрать их по составу.

Учитель: Задание 2. Выписать в тетрадь однокоренные слова и разобрать их по составу.

……………………………………………………………………………………………………..

УЧИТЕЛЬ: Отвечает 2 группа.

Уч-ся: Снежинки, снег, снежки, снежные

Учитель: Докажите, что эти слова однокоренные? Как образовались данные слова?

Учитель: Оцените работу группы.(за 2 задания)

Учитель:- А еще как могут образовываться новые слова?

Уч — ся:- С помощью приставки.—С помощью приставки и суффикса.

Учитель:- А вы умеете?

Уч-ся:- Да!

Учитель:-Задание 3: образуйте с корнем снег -, снеж- с помощью приставок и суффиксов новые слова

……………………………………………………………………………………………………..

Учитель: Отвечает 3 группа.

Назовите слова, образованные при помощи суффикса (снегурка, снегурочка, снеговой,снеговик, снежок, снегирь).

-при помощи приставки и суффикса (подснежник,заснеженный, подснежный, бесснежная).

Учитель: Оцените работу в группе.

Учитель:- Как вы думаете, а есть другие способы образования слов?

-А хотите узнать?

-А зачем вам это надо знать?

Учитель: Задание 4: Прочитайте, разделите слова на группы. Рассмотрите несколько вариантов. Берёзка, подснежник, снежок, походка, побег, лесостепь, переход.

Уч-ся.- Существительные мужского и женского рода.

– Существительные с окончанием «а» и с нулевым окончанием.

— Сущ-ые с приставкой и без.

Учитель: Задание 5 . Разделите слова в группы по их способу образования

берёзка побег подснежник

снежок переход походка

Ученики – А у нас одно слово никуда не попало. И у нас тоже.

У.- Какое слово оказалось лишним? Почему?

Д. Это слово лесостепь, в нём два корня.

У: Как вы думаете, как можно было бы назвать такие слова? ( предположения детей)

У.- Действительно в русском языке есть слова, которые имеют два и более корня. Такие слова называются сложными.

Целепологание.

У.- Кто может назвать тему урока?

Д.- Тема урока «Сложные слова».

У.- Чему будем учиться на уроке?

Д.- Мы будем учиться находить сложные слова, правильно их писать, познакомимся с правилом.

3 . 2 этап урока – ОПЕРАЦИОНАЛЬНО- ИСПОЛНИТЕЛЬСКИЙ ЭТАП.

Учитель: Задание 6. Исследуйте слова и постарайтесь ответить на вопрос, как образуются сложные слова?

Ледоход, паровоз, самолет, самовар, лесостепь.

ВЫВОД

У.- Какая буква соединила две основы?

Д.- Две основы соединила буква «о».

У.- Кто уже догадался как называется эта гласная?

Д.- Это соединительная гласная.

У.- Для чего нужна соединительная гласная?

Д.- Чтобы соединять две основы.

У: Где мы можем проверить наши предположения? Работа над правилом.

У.- Прочитайте правило на странице 92.

— Что ещё узнали из правила?

Д.- Узнали, что есть ещё соединительная буква, буква «е».

У.- Как образуются сложные слова?

Д.- Сложные слова образуются сложением двух основ.

У.- Какие буквы соединяют основы в сложных словах?

Д.- Это буквы «о» и « е».

ХОРОВОЕ ПРОГОВАРИВАНИЕ, ДРУГ ДРУГУ, ПРО СЕБЯ.

Оцените работу в группе.

Физминутка для глаз.(презентация)

4 . Первичное закрепление.

Задание 5 Образуйте и запишите в тетрадь сложные слова, подчеркивая соединительную гласную и разбирая слова по составу. Попробуйте нарисовать схему сложных слов.

1 группа Сад, водить Лист, падать

2 группа Тепло, ходить Сталь, варить

3 группа Лес, рубить Книга, любить

4 группа Вода, падать Пыль, сосать

5 группа Сено, валить Рыба, ловить

ПРОВЕРКА.

Учитель: Оцените работу в группе.

-Выписать в тетрадь сложные слова, разобрать их по составу.

Начался осенний листопад. Пчеловод привёл в порядок ульи. Сенокос запоздал из – за дождей. Мощный ледокол дробил льдины. Дети надолго запомнили путешествие на пароходе. Огнетушитель выплеснул струю пены.

5. РЕФЛЕКСИВНО – ОЦЕНОЧНЫЙ ЭТАП . (Рефлексия – приобретённая сознанием способность сосредоточиться на самом себе овладеть самим собой, как предметом …, способность не просто познать, а знать что знаешь.)

Проводится с опорой на таблицы.

— Выбери ответ и обоснуй.

– А вы знаете, когда нужно писать соединительную гласную О, а когда Е?

(Нет, пока не знаем.)

– А хотите узнать?

(Да.)

– Для чего вам это нужно?

(Чтобы грамотно писать.)

– Этому мы будем учиться на следующем уроке.

—

У : Кто может сказать, что его глаза внимательно смотрели и всё видели, уши всё слышали, а голова хорошо думала? Как вы оцениваете свою работу?

Дети поднимают сигнальную карточку :

Зелёная -5

Синяя -4

Желтая -3

У : Я очень рада , что вы правильно оценили свои результаты работы. Я думаю , что хорошая , дружная работа всегда должна создавать праздничное настроение. Пусть у вас на душе всегда будет праздник от вашей работы.

Откройте дневники, запишите д\з:

-упр 176

— составить кроссворд или проверочную карточку для своих одноклассников.

СПАСИБО ЗА УРОК! Я ДОВОЛЬНА ВАШЕЙ РАБОТОЙ!

Приложения:

1. file0.docx.. 26,4 КБ

Сборка и разборка экологических сетей

Аннотация

Глобальные изменения привели к серьезному кризису биоразнообразия. Виды вымирают с возрастающей скоростью, и это может вызвать дальнейшие каскады со-исчезновения. Скорость и форма этих каскадов соэкстинкции во многом зависят от структуры сетей взаимодействий между видами. Понимание сетевой структуры и ее отношения к разборке сети, таким образом, является приоритетом для биологии сохранения системного уровня.Этот процесс коллапса сети действительно может быть связан с процессом построения сети, хотя очень мало известно об обоих процессах и еще меньше об их взаимосвязи. Здесь мы рассматриваем недавние работы, которые дают некоторые предварительные ответы на эти вопросы. Во-первых, мы сосредотачиваемся на сборке сетей, уделяя особое внимание временным процессам на уровне видов, а также структурным строительным блокам сложных экологических сетей. Во-вторых, мы сосредотачиваемся на демонтаже сети в результате исчезновения видов или потери среды обитания.В заключение мы подчеркнем некоторые общие практические правила, которые могут помочь в создании всеобъемлющей основы для понимания реакции экологических сетей на глобальные изменения.

Ключевые слова: пищевые сети, мутуалистические сети, сложные сети, сетевые мотивы, соразмерение

1. Введение

Глобальные изменения — одна из основных проблем, с которыми сталкивается человечество. Десятилетия чрезмерного вылова рыбы, трансформации среды обитания, биотических вторжений, загрязнения и изменений атмосферных газов создают серьезный кризис биоразнообразия (Sala et al .2000). Хотя природа этих изменений и трагические последствия для существования жизни на Земле и предоставляемых услуг не вызывают никаких сомнений, мы все еще мало знаем о последствиях антропогенных возмущений для всего сообщества. Частично это связано с тем, что большая часть исследований глобальных изменений сосредоточена на численности популяций, сдвигах распределения и физиологии организма (Sala et al .2000), в то время как очень мало известно об изменениях таких факторов глобальных изменений. о сети взаимодействий между видами (Tylianakis et al .2008 г.). Этот недостаток информации также отражает до сих пор неизвестную взаимосвязь между сетевой структурой и динамикой. Существует потребность в экологии сохранения на системном уровне, которая требует взаимного обогащения по нескольким направлениям исследований, включая как сетевую структуру, так и динамику.

Фундаментальная начальная цель — лучше понять структуру экологической сети и то, как эти сети собираются из их основных строительных блоков. Однако, чтобы по-настоящему изучить экологические последствия изменений, мы должны изучить, как эти сети распадаются в результате действий человека или возмущений окружающей среды, прямых или косвенных.Таким образом, в исследовании пищевой сети возникают два явно независимых вопроса, которые в идеале имеют одну и ту же долгосрочную цель. Здесь мы рассматриваем недавние работы, направленные на ту или иную цель, при этом подчеркивая связь между этими двумя, казалось бы, несопоставимыми исследовательскими программами.

2. Сборка экологических сетей

(a) Динамика роста сетей

Эмпирические исследования экологических сетей были в высшей степени статичными, сети описывались либо как моментальный снимок во времени, либо как слияние во времени (Polis 1991).Это связано с тем, что в целом существует очень мало эмпирических данных о временных аспектах целых пищевых сетей. Подобная критика может быть подвергнута пространственному измерению этих сетей. Таким образом, традиционный подход в экологии заключался в косвенном выводе процесса или механизма из фиксированного паттерна. Например, экологи в последние несколько лет описали асимметричное распределение количества взаимодействий между видами (Solé & Montoya 2001; Dunne et al .2002 a ; Jordano et al .2003). Этот паттерн описывает гетерогенное сообщество, в котором большая часть видов имеет лишь несколько взаимодействий, но несколько видов связаны гораздо больше, чем ожидалось случайно. Несмотря на то, что существуют простые модели формирования сети, которые могут объяснить эти закономерности, делать вывод о процессе на основе шаблона рискованно. Однако в последнее время появилось несколько статей, описывающих временную динамику экологических сетей и ведущих нас в этом направлении.

Олесен и др. . (2008) смогли проанализировать повседневную динамику сети опыления, воспользовавшись суровой сезонностью исследовательской станции Закенберг в Гренландии.Почва покрыта снегом примерно 10 месяцев подряд, что дает прекрасную возможность наблюдать за всем процессом сборки сети с начала каждого сезона. Йенс Олесен и группа студентов ежедневно регистрировали виды и взаимодействия, позволяя охарактеризовать процесс привязанности в этой сети.

Физики предложили простую модель, которая способна генерировать эти искаженные распределения связности, так называемое предпочтительное присоединение (Simon 1955; Barabasi & Albert 1999).Грубо говоря, эта модель работает следующим образом. Представим себе начальный набор узлов и взаимодействий. Когда новый узел вводится в сеть, он взаимодействует с существующим узлом, выбранным случайным образом, пропорционально количеству взаимодействий существующего узла. Если этот процесс повторяется, небольшие начальные различия в количестве взаимодействий каждого узла усиливаются; это своего рода процесс «богатый становится богаче» (Barabasi & Albert 1999). На некоторых социологических и физических примерах этот процесс можно проверить, но раньше этого не было в экологии.

Олесен и др. . (2008) показали, что привязанность является промежуточной между предпочтительной и случайной. Важно отметить, что этот процесс совместим с асимметричным усеченным степенным распределением связности, о котором ранее сообщалось (Jordano и др. , 2003). С экологической точки зрения результаты Olesen et al . (2008) говорят нам, что экологическая сеть организована таким образом, что новые виды имеют тенденцию взаимодействовать преимущественно с уже хорошо связанными видами, потому что эти виды либо более многочисленны, либо имеют более высокую фенофазу.В этом сообществе изобилие растений объясняет только 12 процентов уровня сцепления растений, в то время как длина фенофазы объясняет от 50 до 70 процентов дисперсии.

Предыдущий полевой эксперимент дает представление о создании реальной сети опыления на уровне видов. Можно утверждать, что многие механистические модели, разработанные для объяснения структуры экологической сети, такие как каскадная модель Коэна (1989) или нишевая модель Уильямса и Мартинеса (2000), аналогичным образом обеспечивают понимание сборки пищевой сети на уровне видов.Этот аргумент основан на идее, что эти модели используют эвристические правила того, как хищники в экологическом сообществе выбирают свою добычу. Интригующий, но до сих пор непроверенный вопрос заключается в том, можно ли эмпирически измерить, являются ли те эвристические механизмы, которые могут объяснить всю структуру пищевой сети, теми же механизмами, которым подверглась сборка экосистемы, или, например, теми же механизмами, которые могли бы использоваться. инвазивными видами в сообществе.

Другой косвенный способ исследовать экземпляры сетевой сборки — это тщательные эксперименты по исключению полей.Один из этих экспериментов был проведен в озере Вторник Коэном и др. . (2003). В 1985 г. было удалено три вида планктонных рыб и введен один вид рыбоядных. Сравнение данных 1984 и 1986 годов показывает, что манипуляции привели к самым незначительным различиям в структуре пищевой сети, несмотря на то, что изменился видовой состав, как и относительная численность среди категорий видов. Этот образец очень похож на образец, встречающийся в сетях опыления.Оба Олесена и др. . (2008) и Петаниду и др. . (2008) проанализировали временную динамику двух сетей опыления за несколько лет. Интересно, что эти независимые исследования пришли к одному и тому же выводу: существует высокая текучесть у обоих видов и межгодовые взаимодействия, но общая сетевая архитектура остается довольно постоянной. Эта устойчивость сетевой архитектуры перед усилиями по выборке как во времени, так и в пространстве была также заключена в более местном исследовании, проведенном Nielsen & Bascompte (2007).

Дополнительный подход между масштабом отдельных видов и полными сетями исследует основные строительные блоки сложных сетей. Хотя этот недавний набор исследований не предоставляет информации о динамике, они представляют собой шаг в правильном направлении, исследуя относительную частоту каждого из этих структурных и динамических компонентов.

(б) Сетевые мотивы: основные строительные блоки сложных сетей

Влиятельная статья Майло и др. .(2002) впервые представили идею сетевых мотивов, которые представляют собой подграфы взаимосвязей, которые появляются значительно чаще, чем ожидалось случайно, в сложных сетях. Затем эти мотивы можно рассматривать как фундаментальные строительные блоки репрезентативных сложных сетей (). При изучении полного набора уникальных связанных подграфов для заданного числа узлов было дополнительно замечено, что некоторые классы сложных сетей демонстрируют сохраненные паттерны подграфов, которые появляются значительно больше — мотивы — и которые оказываются значительно меньше, чем ожидалось случайно (Milo и др. .2004 г.).

Различные подходы к исследованию пищевых сетей. Традиционно экологи изучали либо динамику простых трофических модулей (слева), либо статистические свойства целых пищевых сетей (справа). В последние несколько лет экологи пытались связать эти две исследовательские программы, исследуя, насколько хорошо представлены эти трофические модули во всех пищевых сетях (черная стрелка). Некоторые из этих модулей перепредставлены; они называются сетевыми мотивами и могут рассматриваться как основные строительные блоки сложных пищевых сетей.Следующим шагом в понимании сборки сети является сосредоточение внимания на мезоуровне путем изучения того, как трофические модули соотносятся друг с другом и какие компоненты стабильности пищевой сети можно объяснить стабильностью базовых блоков по сравнению со стабильностью их комбинации (серые стрелки).

В экологии существует давняя традиция изучения простых трофических модулей, таких как три-трофические пищевые цепи, всеядность или хищничество внутри гильдии (Pimm & Lawton 1977; Holt 1997; McCann et al . 1998).Экологи в значительной степени сосредоточились на этих простых трофических модулях из-за известной или временами предполагаемой экологической значимости и либо аналитической управляемости, либо экспериментальной применимости.

К сожалению, существует большой разрыв между динамическим изучением трофических модулей и статическими эмпирическими описаниями целых пищевых сетей (Bascompte & Melián 2005). Следует задаться вопросом, в какой степени эти динамические исследования актуальны для нашего понимания пищевых сетей в целом? Первым шагом в ответе на этот вопрос может быть утверждение, что это зависит от того, насколько уместен или часто встречается каждый из этих трофических модулей во всей пищевой сети (Bascompte & Melián 2005; Stouffer et al .2007). Интересно отметить, что в то время как исследования сложных сетей сначала количественно оценили мотивы, а затем исследовали динамические последствия (Prill et al , 2005), в экологии произошло обратное.

Не будет преувеличением утверждать, что отношения между трофическими модулями и сетевыми мотивами также важны для нашего понимания сборки экологических сетей. В §2 a мы рассмотрели эту сборку с точки зрения динамики, а здесь мы исследуем сборку с другой точки зрения, а именно с учетом того, из каких блоков можно собрать экологическую сеть.Это направление исследований показывает, что некоторые трофические модули чрезмерно представлены в пищевых цепочках — они действительно являются фундаментальными мотивами — в то время как другие встречаются реже, чем при соответствующих рандомизациях (Bascompte & Melián 2005; Stouffer et al .2007). Например, явная конкуренция и хищничество внутри гильдии были чрезмерно представлены в нескольких крупных пищевых сетях, в то время как частота всеядности сильно варьировалась в разных пищевых сетях (Arim & Marquet 2004; Bascompte & Melián 2005; Stouffer et al .2007).

Интересно, что было продемонстрировано, что, как и в случае с другими типами сложных сетей (Milo et al .2004), существует консервативный паттерн избыточного и недостаточного представления трофических модулей, который является общим для пищевых сетей от разнообразие типов местообитаний: эстуарий; пресная вода; морской; и наземные (Camacho et al .2007; Stouffer et al .2007). Было также продемонстрировано, что этот образец не зависит от других факторов, которые отличают различные пищевые сети, таких как количество или состав присутствующих видов.Тем не менее, хотя мы наблюдаем, что эти пищевые сети имеют схожую структуру, мы еще не понимаем исторический процесс сборки, кажущийся сложным образом, в котором эти различные части соединяются вместе, за пределами уровня, обсуждавшегося ранее в отношении механистической пищевой сети. модели.

В основном трофические модули в пищевых сетях были исследованы только как структурные компоненты, то есть игнорировались или не учитывалась сила взаимодействий. Теперь известно, что сила взаимодействия между хищниками и их жертвами может во многом определять стабильность экологических сообществ.Таким образом, последующее исследование исследований сетевых мотивов рассматривало мотивы, определяемые интенсивностью взаимодействий между видами (Bascompte et al . 2005). Чтобы оценить вероятность трофического каскада (т. Е. Косвенных изменений биомассы по более чем одному трофическому звену) после перелова акул, Bascompte et al . (2005) исследовали, насколько чрезмерно представлены сильно взаимодействующие три-трофические пищевые цепи. Эти цепи представляют собой цепи с двумя последовательными сильными взаимодействиями в пищевой цепи.Когда цепи демонстрируют такое совместное возникновение сильных взаимодействий, трофические каскады более вероятны.

Было показано, что большая карибская морская трофическая сеть показала значительно меньшее количество этих комбинаций, чем можно было бы ожидать при случайной выборке, учитывая наблюдаемые взаимодействия и силу взаимодействия. Более того, в тех немногих случаях, когда имеют место две сильные силы взаимодействия, они были статистически связаны с сильной всеядностью (Bascompte и др. , 2005). Эти структурные закономерности важны для нашего понимания последствий перелова основных хищников.Недостаточное представление сильно взаимодействующих три-трофических пищевых цепей и чрезмерное представительство сильного всеядности в тех немногих случаях, когда одновременно возникают две сильные силы взаимодействия, снижают вероятность трофических каскадов, как это наблюдается в биологически параметризованной биоэнергетической модели (Bascompte и др. .2005).

Как подробно описано, изучение сетевых мотивов может рассматриваться как актуальное при понимании не только основных строительных блоков, которые формируют сложные пищевые сети, но и стабильности этих пищевых сетей.Однако к последствиям следует относиться с осторожностью. Пока что мы можем говорить только о стабильности этих основных блоков по отдельности, несмотря на соблазн расширить эти результаты и сделать вывод о стабильности всей пищевой сети. В нашем понимании этой проблемы все еще существует большой пробел. Мы должны более подробно изучить, в какой степени стабильность всей пищевой сети может быть объяснена стабильностью ее простых компонентов (Garcia-Domingo & Saldaña 2007; Allesina & Pascual 2008).Кроме того, нам остается построить конкретное понимание на мезомасштабном уровне относительно того, как эти сетевые мотивы взаимосвязаны друг с другом (), и влияет ли способ, которым они сочетаются, на стабильность всей сборки.

(c) Сетевая модульность: структура сообщества мутуалистических сетей

Связанный поиск базовой организации сложных сетей также был выполнен в мутуалистических сетях, таких как те, которые связывают цветущие растения с их насекомыми-опылителями (Olesen et al .2007). Однако подход отличается от подхода, описанного для трофических пищевых сетей, в то время как конечная цель и последствия во многом схожи. В данном случае Олесен и др. . (2007) охарактеризовали степень модульности этих сетей. Модульная сеть организована в виде различных модулей, так что виды внутри модуля имеют тенденцию взаимодействовать между собой чаще, чем с видами из других модулей (Guimerà & Amaral 2005). Олесен и др. . (2007) нашли убедительные доказательства модульности в большинстве изученных ими крупных сетей опыления.Наблюдаемые модули представляют собой небольшие группы растений и животных. Например, некоторые из этих компартментов образованы несколькими видами двукрылых и в основном белыми цветками, тогда как другие состоят из одного вида растений и нескольких видов бабочек (Olesen et al .2007). Интересно, что эти модули можно рассматривать как фундаментальные функциональные единицы этих сетей опыления, кандидатов на коэволюционные единицы.

Отображение модулей может объяснить, как предыдущие исследования основных групп совместно эволюционирующих видов соотносятся с другой программой исследований, основанной на целых сетях.Один особенно интересный результат, относящийся к сетевой сборке, — это особый образец, с помощью которого эти модули связаны между собой. Это соединение также расскажет нам, насколько разные шаблоны совместимы в одной и той же сети. В частности, можно заметить, что эти функциональные единицы взаимодействуют через универсальные виды — которые находятся в ядре вложенной матрицы — которые склеивают модули в единую когерентную, сплоченную сеть (Olesen et al , 2007).

Интересно, что эта связная структура очень похожа на ту, что обнаруживается в пищевых сетях, когда они анализируются с использованием их распределения в сети k .Веб-сеть k определяется как подмножество видов, которые связаны по меньшей мере с k видами одной и той же веб-сети. Melián & Bascompte (2004) обнаружили существование единой, наиболее плотной паутины, имеющей наибольшее количество взаимодействий, несмотря на то, что она образована небольшим количеством видов. Связная природа этих пищевых сетей определяется тем фактом, что все другие веб-сети в сети связаны с этим наиболее плотным веб-сетью. Удаление этой наиболее плотной сети привело к фрагментации пищевой сети на 57 частей (Melián & Bascompte 2004).Таким образом, экологические сети, по-видимому, имеют четко определенный паттерн взаимодействий, когда модули или веб-сети прикреплены к ядру сети, которое действует как клей, обеспечивающий сплоченность.

Таким образом, из приведенных выше подразделов мы увидели те идеи, которые можно рассматривать как основные составляющие сборки сети и которым может следовать «сетевой инженер». Во-первых, во временном масштабе кажется, что сборка мутуалистических сетей происходит за счет предпочтительного присоединения новых видов к уже хорошо связанным видам, вероятно, опосредованным экологическими переменными, такими как длина фенофазы (Olesen et al .2008 г.). Во-вторых, со структурной точки зрения существуют четко определенные модели взаимосвязанности, которые образуют основные строительные блоки пищевых сетей (Bascompte & Melián 2005; Stouffer et al .2007). Эти блоки связаны особым образом, так что они прикреплены к центральной группе универсальных видов, которые не только взаимодействуют между собой внутри этого ядра, но также и с другими видами через сеть (Melián & Bascompte 2004; Olesen et al 2007 г.).

Каждая из этих тем связана со сборкой экологической сети и формированием этих сетей. Альтернативная концепция разборки сети напрямую связана с последствиями глобального изменения биоразнообразия. С какой скоростью эти сети разрушатся при увеличении интенсивности возмущения? Мы обратимся к недавнему исследованию разборки сети в §3.

3. Разборка экологических сетей

(a) Каскады разборки и соразмерения сети

Исследования по разборке экологических сетей в основном основаны на моделировании, в котором все большее число видов вымирает или все больше и больше среды обитания уничтожен.Эти подходы следуют влиятельной статье Альберта и др. . (2000). В этой статье авторы попытались понять, как архитектура Интернета делает его более устойчивым к сбоям сервера и атакам. Все большее количество узлов было удалено, и авторы нацелены на ту точку, в которой сеть становится фрагментированной на серию непересекающихся сетей. Это ясно продемонстрировало, что существует четко определенная взаимосвязь между структурой сети и надежностью, и за этим последовали экологи, использующие данные о пищевых сетях (Solé & Montoya 2001; Dunne et al .2002 b ). И снова мотивация заключалась в том, чтобы лучше понять взаимосвязь между сетевой структурой и динамикой. Устойчивость сети была совершенно иной, если удалить наиболее специализированные виды или нацелить на наиболее универсальные виды, что снова повторяет статью Альберта и др. . (2000). Одним из основных результатов было то, что экологические сети были довольно устойчивы к вымиранию большинства специализированных видов, но довольно хрупкими, если бы наиболее распространенные виды вымерли (Solé & Montoya 2001; Dunne et al .2002 b ). Кроме того, в то время как вторичные вымирания постепенно увеличиваются в результате случайного удаления видов, удаление наиболее связанных видов приводит к резкому увеличению вторичных вымираний после начального периода минимальных вторичных вымираний (Dunne et al .2002 b ) . Однако в обоих случаях наблюдается повышенная чувствительность при большем уровне удаления (Dunne et al . 2002 b ). Таким образом, последствия возмущений тем выше, чем интенсивность возмущения постепенно увеличивается.Таким образом, этот результат требует осторожности, поскольку мы не можем напрямую экстраполировать последствия глобальных изменений на первых этапах с последствиями на последних этапах.

Вышеупомянутая устойчивость пищевых сетей к случайным исчезновениям видов в значительной степени объясняется их неоднородной структурой (Альберт и др. , 2000; Соле и Монтойя, 2001). Тем не менее, мотивированный выводом о том, что большинство пищевых сетей не демонстрируют искаженного распределения соединений (Camacho et al .2002; Данн и др. . 2002 а ; Stouffer и др. . 2005). Данн и др. . (2002 b ) показали, что, как показывает практика, чем выше степень соединения пищевой сети, тем выше ее надежность (Dunne и др. . 2002 a ).

Можно спросить, являются ли эти образцы устойчивости или хрупкости следствием использованных простых последовательностей вымирания. Чтобы решить эту проблему, Srinivasan et al . (2007) использовали биологически реалистичный и обоснованный сценарий исчезновения в 34 пресноводных пелагических пищевых сетях.Здесь виды, широко распространенные во всех озерах, считаются более экологически устойчивыми — и поэтому с меньшей вероятностью вымрут, — чем виды, населяющие только одно или несколько таких озер. Этот порядок вымирания не только указывает на заметную устойчивость пищевых сетей, но и на значительную хрупкость по отношению к обратной последовательности.

Помимо пищевых сетей, Меммотт и др. . (2004) распространил эти модели вымирания на две сети опыления. Эти авторы показали, что архитектура этих сетей делает их все более устойчивыми к исчезновению видов.Опять же, сети были более устойчивы к случайному исчезновению видов, чем к исчезновению наиболее универсальных; однако в этом случае распад был линейным и не было обнаружено порогов внезапного коллапса.

Было высказано предположение, что отсутствие коллапса сети с исчезновением наиболее связанных видов подразумевает, что действуют другие факторы, помимо гетерогенного распределения степеней. Среди них вложенная структура этих сетей была связана с этой устойчивостью к исчезновению видов (Memmott et al .2004 г.). Однако, как отмечают авторы, эта разница между пищевыми сетями и мутуалистическими сетями может быть следствием разных методологий. В исследовании Memmott et al . (2004) ранжирование вымирания относится к видам одного и того же трофического уровня, в то время как в удаленных трофических сетях виды могут принадлежать к разным трофическим уровням (Solé & Montoya 2001; Dunne et al . 2002 a ). Когда виды удаляются в соответствии с уровнем обобщения, как для растений, так и для животных, происходит коллапс сети, аналогичный тому, который наблюдается для пищевых сетей (Memmott et al .2004 г.). Основная идея снова заключалась в том, что экологические сети устойчивы к случайному исчезновению видов, но могут быть довольно хрупкими, если универсальные виды окажутся наиболее восприимчивыми. В мутуалистических сетях эту надежность обеспечивают неоднородное распределение степеней и вложенная структура.

Структура мутуалистических сетей также обеспечивает устойчивость к потере среды обитания. Используя простую модель динамики метасообщества, которая сохранила точный паттерн взаимодействий двух реальных мутуалистических сетей, Fortuna & Bascompte (2006) показали, что метасообщество более устойчиво к потере среды обитания, чем эквивалентные модели, в которых структура сети была рандомизирована.Точно так же произошло внезапное сокращение биоразнообразия для данного уровня разрушения. Опытным путем Эшворт и др. . (2004) также привели структуру мутуалистических сетей для объяснения реакции растений на фрагментацию среды обитания. В частности, асимметричная специализация, наблюдаемая в этих сетях (специалисты взаимодействуют с универсальными специалистами), приводит к тому, что вопреки ожиданиям, как специалисты, так и универсальные виды растений разлагаются при одинаковых значениях потери среды обитания. Даже когда специалисты взаимодействуют только с одним или несколькими видами опылителей, они являются универсальными и широко распространенными, что обеспечивает постоянство специалистов по растениям почти до тех пор, пока некоторые участки заняты универсальными (Ashworth et al .2004 г.).

Существуют и другие последствия вымирания видов, выходящие за рамки каскада совместных исчезновений. Некоторые виды играют ключевую роль в сети взаимодействий, и их исчезновение может вызвать структурные изменения в оставшейся сети. Это связано с ролями видов в сети. В §2 c мы уже описали модули или основные строительные блоки мутуалистических сетей. Анализ модульности также описывает роль каждого вида в сети (Guimerà & Amaral 2005).Это обеспечивает классификацию роли видов по отношению к этой модульной организации: некоторые виды не имеют значения как внутри своего модуля, так и между модулями; другие являются центрами внутри модуля, но вообще не взаимодействуют с видами в других модулях; другие имеют небольшое количество взаимодействий и, тем не менее, способствуют соединению нескольких таких модулей; и, наконец, некоторые виды являются как концентраторами, так и соединителями внутри модуля (Guimerà & Amaral 2005). Олесен и др. . (2007) проанализировали модульность сетей опыления и обнаружили, что небольшая часть видов в этих сетях являются сетевыми концентраторами (т.е. они очень важны в своих модулях, а также для подключения разных модулей). Среди насекомых только 1% видов выполняет эту особую роль. Эти виды — исключительно перепончатокрылые и двукрылые. Таким образом, вымирание этих видов, помимо потенциального совместного исчезновения других видов, зависящих от них, может изменить структурные свойства сети в том смысле, что она станет менее сплоченной. Модули станут более изолированными, и это может повлиять на устойчивость сети к дальнейшим возмущениям (Olesen et al .2007).

(b) Разборка сети и потеря эволюционной истории

Дальнейшее следствие, выходящее за рамки размера вторичных каскадов соэкстинкции, связано со скоростью потери прошлой эволюционной истории или функциональных групп. Чтобы оценить этот эффект, необходимо интегрировать сетевую структуру и биологические атрибуты, исследуя точную идентичность вымирающих видов. Резенде и др. . (2007) впервые продемонстрировали, что существует значительный филогенетический сигнал о ролях видов в сети взаимодействий.В частности, одна треть сообществ имеет сильный филогенетический сигнал (т. Е. Тенденцию филогенетически сходных видов иметь сходные роли в сети взаимодействий) относительно количества взаимодействий на вид, в то время как половина сообществ имеет сильный сигнал относительно идентичности вида, с которым взаимодействует (Rezende et al .2007).

Результаты Rezende et al . (2007) подразумевают, что для рассмотрения механизмов, ведущих к формированию сетевых паттернов, необходимо принимать во внимание прошлую эволюционную историю видов, формирующих такие сети.Таким образом, описанный ранее динамический процесс сборки сети, по-видимому, нуждается в филогенетической основе. Возможно, это также связано с преобладанием некоторых из рассмотренных нами строительных блоков сети и с тем, имеют ли они также эволюционную основу.

Другое главное значение филогенетического сигнала в сетевых паттернах связано с природой каскадов соэкстинкции, описанных в § 3 a . В отсутствие филогенетического сигнала в сетевых паттернах эти каскады соэкстинкции будут однородно сокращаться через филогении, поскольку явно не будет какой-либо филогенетической корреляции между видами, идущими ко исчезновению.Однако из-за наблюдаемого филогенетического сигнала каскады соэкстинкции, как правило, включают филогенетически родственные виды: поскольку филогенетически родственные виды имеют тенденцию взаимодействовать с такими же другими видами, они точно так же пострадают от исчезновения своих общих ресурсов. Это приводит к необъективному сокращению эволюционного древа и более выраженной потере истории эволюции, чем предполагалось в предыдущих исследованиях. Хотя структура экологических сетей делает их более устойчивыми к исчезновению видов, филогенетический сигнал о сетевых паттернах транслируется в риск существенной утраты истории эволюции.

Короче говоря, скорость и режим разборки сети начали прогнозироваться с помощью простых имитационных моделей. Эти очень предварительные результаты говорят нам, что архитектура экологических сетей важна для понимания разборки. Кроме того, взаимодействие между сетью и филогенетической структурой важно при изучении последствий коллапса этой сети. Точно так же было бы важно наложить функциональные группы или атрибуты жизненного цикла поверх этих сетей, чтобы получить представление о том, как функция экосистемы отображается в структуре сети (Dobson et al .2006 г.).

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Растение тропических лесов Амазонки Uncaria tomentosa (кошачий коготь) и его специфические проантоцианидиновые составляющие являются мощными ингибиторами и редукторами как бляшек, так и клубков головного мозга

Открытие и идентификация

Uncaria tomentosa , также известная как «Uňa de Gato» (по-испански) или кошачий коготь (по-английски), представляет собой древесную лозу, которая медленно растет в тропических лесах Амазонки.Лозу называют «кошачьим когтем» из-за ее характерных когтеобразных шипов, которые выступают из основания ее листьев (рис. 1a, b). Лозе может потребоваться 20 лет, чтобы достичь зрелости, и она может вырасти более чем на 100 футов в длину, когда она прикрепляется и обвивается вокруг местных деревьев. Кора кошачьего когтя собирается для извлечения (рис. 1c) и продается на перуанском рынке в виде связок коры. Он в изобилии встречается в предгорьях тропических лесов Амазонки на высоте от 2000 до 8000 футов.Существует около 34 видов Uncaria , из которых Uncaria tomentosa являются наиболее распространенными видами ^33,34 .

PTI-00703 кошачий коготь: особый растительный экстракт, полученный из древесной лозы тропического леса амазонки, Uncaria tomentosa (т. Е. Кошачьего когтя). ( a , b ) Uncaria tomentosa (кошачий коготь) с характерными изогнутыми шипами, напоминающими когти, которые выступают из основания листьев. ( c ) Кора кошачьих когтей используется для экстракции, а связки коры продаются на перуанском рынке.Cognitive Clarity Inc. имеет лицензию на использование в цифровом и печатном виде изображений ( a ) из Getty Images, Чикаго, Иллинойс, США; ( b ) из Amazon-Images MBSI / Alamy Stock Photos; и ( c ) из imageBROKER / Alamy Stock Photo.

В следующем наборе исследований фракционирование под контролем анализов и сложные методы выяснения структуры выявили определенные полифенольные и проантоцианидиновые ингредиенты в кошачьем когте PTI-00703 (т.е. Uncaria tomentosa из определенного перуанского источника), которые обладают естественной способностью уменьшать и подавляют как «бляшки» бета-амилоидного белка, так и «клубки» тау-белка, два признака старения мозга и патологические признаки болезни Альцгеймера.

PTI-00703 кошачий коготь является мощным ингибитором образования фибрилл бета-амилоидного белка (Aβ) 1–40

В одном исследовании Aβ 1–40 инкубировали в отсутствие или в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 в течение 3 дней с анализом аликвот через 0, 1 и 3 дня. Флуорометрия с тиофлавином Т показала, что образование фибрилл Aβ 1-40 происходило в течение 1 дня путем увеличения количества единиц флуоресценции с почти 0 (в день 0) до 3500 единиц флуоресценции в течение 1 дня (рис. 2a). Флуоресценция тиофлавином S фибрилл Aβ 1-40 через 1 день продемонстрировала положительную зеленую флуоресценцию, наблюдаемую в флуоресцентном свете, что указывает на образование фибрилл (рис.Это было подтверждено положительным красным / зеленым двулучепреломлением после окрашивания конго красным при просмотре в поляризованном свете (не показано). Электронная микроскопия показала большое количество фибрилл Aβ 1-40 к 1 дню с диаметром фибрилл 10-20 нм (рис. 2d). С другой стороны, кошачий коготь PTI-00703 значительно ингибировал образование фибрилл Aβ 1-40, что продемонстрировано дозозависимым снижением флуорометрии тиофлавина Т через 1 и 3 дня (рис. 2a) и заметным снижением флуоресценции тиофлавина S ( Рис. 2c) и окрашивание конго красным (не показано).Электронная микроскопия дополнительно продемонстрировала, что в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 большая часть Aβ 1-40 ингибируется от образования фибрилл и образует только аморфный нефибриллярный Aβ (рис. 2d). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 заметно ингибирует образование фибрилл Aβ 1-40.

PTI-00703 Кошачий коготь является мощным ингибитором образования фибрилл Aβ 1-40. ( a ) Кошачий коготь PTI-00703 вызывал дозозависимое ингибирование образования фибрилл Aβ 1-40 по оценке флуорометрии с тиофлавином T.** p <0,05, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента, столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b ) Aβ1-40 через 1 день показывает положительную флуоресценцию тиофлавина S (указывающую на амилоидные фибриллы) под флуоресцентным светом. Шкала шкалы = 25 мкм. ( c ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл Aβ, о чем свидетельствует заметное снижение флуоресценции тиофлавина S (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.). Шкала шкалы = 25 мкм. ( d ) Электронная микроскопия через 1 день показала большое количество амилоидных фибрилл Aβ 1-40 с характерным диаметром фибрилл 10-20 нм.Шкала шкалы = 0,2 мкм. ( e ) Aβ1-40 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировал образование только аморфного нефибриллярного материала (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 мас. / Мас.). Масштабная шкала = 200 нм.

PTI-00703 кошачий коготь также разрушает / дезагрегирует предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–42 почти мгновенно

В другом исследовании дозозависимые эффекты кошачьего когтя PTI-00703 на разрушение / дезагрегацию предварительно сформированного Aβ 1–42 фибрилл. Aβ 1–42 сначала инкубировали при 37 ° C, чтобы наблюдать быстрорастворимые амилоидные фибриллы с помощью флуорометрии тиофлавина Т в день 0 (рис.3а, день 0), положительное окрашивание конго красным [(т.е. красно-зеленое двойное лучепреломление в поляризованном свете) (фиг. 3b) и положительная флуоресценция тиофлавина S (фиг. 3d). Aβ 1-42 также демонстрировал амилоидные фибриллы в день 0, как показывает электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием (рис. 3f). В присутствии кошачьего когтя PTI-00703 фибриллы Aβ 1–42 почти мгновенно (в течение нескольких минут после смешивания) дезагрегировались и / или растворялись, о чем свидетельствует заметное снижение флюорометрии тиофлавина T (рис. 3a, день 0, 1). и 3), окрашивание конго красным (рис.3в) и флуоресценции тиофлавина S (рис. 3д). Электронная микроскопия показала, что кошачий коготь PTI-00703 дезагрегировал и восстанавливал предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–42 до в основном аморфного нефибриллярного материала (рис. 3g). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 также является мощным дезагрегатором / растворителем предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и, по-видимому, делает это в течение нескольких минут после взаимодействия с фибриллами Aβ 1–42.

PTI-00703 Кошачий коготь также практически мгновенно дезагрегировал / разрушал фибриллы Aβ 1–42.( a ) Кошачий коготь PTI-00703 вызывал дозозависимое разрушение / дезагрегацию фибрилл Aβ 1–42, по оценке флуорометрии с тиофлавином T. Дозозависимое дезагрегация / разрушение фибрилл Aβ 1–42 наблюдали почти сразу (после смешивания). ** p <0,05, *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b ) Окрашивание конго красным фибрилл Aβ 1–42 к дню 0 продемонстрировало устойчивое красное / зеленое двойное лучепреломление в поляризованном свете, указывающее на амилоидные фибриллы.Шкала шкалы = 25 мкм. ( c ) Aβ1–42 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 почти полностью ослаблено окрашивание конго красным, что указывает на разрушение / дезагрегацию фибрилл Aβ 1–42 (Aβ: кошачий коготь PTI-00703 1: 1 мас. / Мас.) . Шкала шкалы = 25 мкм. ( d ) Aβ 1–42 к дню 0 также показал положительную флуоресценцию тиофлавина S под флуоресцентным светом. Шкала шкалы = 25 мкм. ( e ) PTI-00703 кошачий коготь дезагрегировал / разрушил фибриллы Aβ 1-42, что показано заметным снижением флуоресценции тиофлавина S (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 вес / вес).Шкала шкалы = 25 мкм. ( f ) Электронная микроскопия в день 0 продемонстрировала обильные амилоидные фибриллы Aβ 1–42 с характерным диаметром фибрилл 10-20 нм. Масштабная полоса = 100 нм ( г ) Фибриллы Aβ 1–42 в присутствии кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировали в основном образование аморфного нефибриллярного материала почти сразу после смешивания (Aβ: PTI-00703 кошачий коготь 1: 1 вес / вес). Масштабная шкала = 100 нм.

PTI-00703 кошачий коготь также является мощным ингибитором / разрушителем «клубков», что продемонстрировано

Домен с 4-мя повторами тау-белка человека (образованный как рекомбинантный белок в организме человека E.coli ), который перекрывается с аминокислотами Q244-E372 тау-441, был экспрессирован в E. coli (фиг. 4a, b). Он образовывал парные спиральные филаменты в присутствии гепарина, идентичные спаренным спиральным филаментам головного мозга в «клубках», как показывает электронная микроскопия (рис. 4c, d). Домен с 4 повторами тау и полноразмерный белок тау использовали для определения того, является ли кошачий коготь PTI-00703 также ингибитором / восстановителем парных спиральных филаментов белка тау. В одном анализе анализ связывания тиофлавина S определял эффекты кошачьего когтя PTI-00703 на ингибирование образования филаментов / фибрилл тау-белка.Как показано на фиг. 4e, кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование филаментов / фибрилл тау-белка с IC ₅₀ , равным 29 мкг / мл, с соотношением PTI-00703 кошачий коготь: белок тау ~ 0,2: 1. Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 может ингибировать образование тау-белка парных спиральных нитей / тау-фибрилл.

PTI-00703 Кошачий коготь также ингибировал клубки тау-белка и образование филаментов, а также уменьшал количество предварительно сформированных тау-фибрилл. ( a ) Изоформы белка тау и очищенный домен с 4-мя повторами тау.Диаграмма шести изоформ тау, выровненных с «новым» доменом с 4 повторами тау, который был сгенерирован (верхняя часть изображения). ( b ) SDS-PAGE и окрашивание серебром показали очищенный белок тау-4-повторяющегося домена с массой ~ 15 кДа (загружено 250 нг белка). ( c , d ). Электронная микроскопия показала парные спиральные нити (т.е. клубки), образованные из , агрегированного домена с 4-повторами тау-белка in vitro (10 мкМ) в присутствии гепарина. Масштабные полосы = 50 нм. ( e ) Ингибирование образования фибрилл тау-белка кошачьим когтем PTI-00703 с использованием анализа связывания тиофлавина S.n = 4. ( f ) Кошачий коготь PTI-00703 также разрушал / дезагрегировал предварительно сформированные филаменты и фибриллы тау-белка с использованием анализа связывания тиофлавина S. n = 4 ( г ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл тау-белка дозозависимым образом, как было определено с помощью КД-спектроскопии. Только белок тау (черная полоса) показал характерные спектры КД с бета-слоями с минимумом на длине волны 218 нм. Повышение концентрации кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировало дозозависимое снижение вторичного сворачивания бета-листового белка тау-белка, о чем свидетельствует дозозависимое сглаживание минимумов 218 нм.n = 3. ( час ) Кошачий коготь PTI-00703 ингибировал образование фибрилл тау-белка дозозависимым образом, как показано EM. Повышение концентрации кошачьего когтя PTI-00703 (т.е. 10 мкг / мл, 50 мкг / мл и 200 мкг / мл) продемонстрировало уменьшение и дезагрегацию филаментов и фибрилл тау-белка на преимущественно аморфный нефибриллярный материал. Масштабные полосы = 200 нм.

В другом исследовании кошачий коготь PTI-00703 также разрушил / уменьшил предварительно сформированные филаменты / фибриллы тау-белка, что было определено с помощью анализа связывания тиофлавина S.IC ₅₀ кошачьего когтя PTI-00703 в этом исследовании составляла 16 мкг / мл с соотношением белка PTI-00703 кошачий коготь: тау-белок ~ 0,11: 1 (рис. 4f). Спектроскопия кругового дихроизма (КД) дополнительно продемонстрировала, что через 24 часа тау-белок в присутствии гепарина сформировал подтверждение вторичного сворачивания β-слоя (что свидетельствует о филаментах / фибриллах тау-белка) с минимумом при 218 нм (рис. 4g, только тау-белок). . Инкубация тау-протеина + гепарина с увеличивающимися концентрациями кошачьего когтя PTI-00703 продемонстрировала дозозависимое снижение образования β-листов тау-протеина, наблюдаемое по сглаживанию кривой при 218 нм, показанной с помощью КД-спектроскопии (рис.4г). Это продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 вызывает разрушение клубочков тау-белка за счет уменьшения вторичного сворачивания β-листов клубков тау-белка.

Электронная микроскопия (рис. 4h) подтвердила данные, полученные другими методами, как описано выше. Обильные тау-филаменты / фибриллы наблюдали с помощью ЭМ в течение 3 дней инкубации при 37 ° C (фиг. 4h, контроль). В присутствии возрастающих концентраций кошачьего когтя PTI-00703 все меньше и меньше филаментов / фибрилл тау-белка образовывалось в течение 3-дневного периода совместной инкубации (рис.4 ч, 50 мкг / мл). В самой высокой испытанной концентрации кошачий коготь PTI-00703 полностью подавлял образование филаментов и фибрилл тау-белка (рис. 4h, 200 мкг / мл). Это исследование продемонстрировало, что кошачий коготь PTI-00703 также эффективен как ингибитор и разрушитель тау-клубков (то есть парных спиральных нитей). Таким образом, кошачий коготь PTI-00703 был идентифицирован как естественный ингибитор и восстановитель как фибрилл Aβ, так и филаментов / фибрилл тау-белка.

Первоначальное выделение и тестирование активных ингредиентов в кошачьем когте PTI-00703, ответственных за ингибирование и снижение активности фибрилл Aβ. активные компоненты присутствуют в кошачьем когте PTI-00703.Аликвоты из фракций 1–22 (т. Е. От 4 до 84 минут) инкубировали с предварительно сформированными фибриллами Aβ 1–40 (в течение 3 дней) (рис. 5) или фибриллами Aβ 1–42 (образующиеся мгновенно) в течение 2 часов (при соотношение вес / вес 1: 1) и протестированы на их способность восстанавливать / разбирать предварительно сформированные фибриллы Aβ с использованием флуорометрического анализа с тиофлавином Т, как описано ранее

Флуорометрический анализ с тиофлавином Т выявил водорастворимые фракции кошачьего когтя ( Uncaria tomentosa ), которые обладали активностью по уменьшению / дезагрегации фибрилл Aβ. Фракции 13–18 (52–72 минуты) содержат компоненты, которые уменьшают / растворяют предварительно сформированные фибриллы Aβ 1–40 на 60–75%.Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4.

Очистка основных компонентов, ингибирующих амилоид Aβ, в водорастворимой фракции

Для выделения PTI-777 использовали методику, изложенную в таблице 1. В этих условиях PTI-777 разделился на 11–13 основных компонентов (рис. 6а), что было выявлено с помощью УФ / видимого детектирования (диодная матрица). Эти фракции были собраны и обозначены следующим образом: фракция g (13–14 минут), фракция f (15–16 минут), фракция h (17–20 минут), фракция i (21 минута), фракция j (22–23 минуты). ), фракция k1 (24 минуты), фракция k2 (25 минут), фракция l (26-27 минут), фракция m (27-28 минут) и фракция n (28-29 минут) (рис.6а).

PTI-777 (основные ингредиенты, ингибирующие Aβ в кошачьем когте PTI-00703). ( a ) Профиль препаративной ВЭЖХ PTI-777, который продемонстрировал основные водорастворимые компоненты, ингибирующие Aβ, выделенные из Uncaria tomentosa (кошачий коготь), отмеченные (слева направо) как фракции g, f, h, i, j, k ₁ , k ₂ , l, m / n и o.( b ) Идентификацию каждой фракции с использованием различных методов, включая PTI-00703 кошачий коготь, PTI-777 и отдельные фракции PTI-777, оценивали с помощью флюорометрии с тиофлавином T. Кошачий коготь PTI-00703, PTI-777 и отдельные фракции f-n были значительными эффективными разрушителями / восстановителями фибрилл Aβ 1-42. С другой стороны, алкалоиды кошачьего когтя изоптероподин, птероподин, изоматрафилин и митрафиллин не оказали значительного влияния на дезагрегацию / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42.Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. п = 5.

Биоактивность PTI-777 и его отдельных отдельных фракций (т.е. фракций с f по o) оценивали в ряде различных in vitro. проб. Тестирование включало использование флуорометрии тиофлавина Т, тестов окрашивания конго красным и отрицательного окрашивания EM. В большинстве экспериментов отдельные выделенные фракции PTI-777 напрямую сравнивались с (PTI-00703 кошачий коготь, PTI-777 и основные оксиндольные алкалоиды, выделенные из Uncaria tomentosa и предположительно обладающие важной биологической активностью, как описано в 2 патентах США ^{36). , 37} (рис.6б).

В одной серии исследований флуорометрия тиофлавина Т сравнивала способность кошачьего когтя PTI-00703, PTI-777 (основные компоненты кошачьего когтя), отдельных фракций PTI-777 (включая фракции f, g, h, j, k, l, m и n) и алкалоиды, выделенные из Uncaria tomentosa (включая изоптероподин, птероподин, изомитрафиллин и митрафиллин), для разрушения / восстановления предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Результаты 5 различных экспериментов по флуорометрии с тиофлавином Т показали, что кошачий коготь PTI-00703 вызывал значительную (p <0.001) 53 +/- 2,5% разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 (рис. 6b). С другой стороны, отдельные фракции PTI-777, включая фракцию f (64,0 +/- 1,7% ингибирования), фракцию g (62,3 +/- 8,5% ингибирования), фракцию h (которая состояла из h2 и h3; 56,3 +/- 2,1%), фракция j (68,7 +/- 2,0%), фракция k (которая состояла из k1 и k2; 58,0 +/- 4,6% ингибирования), фракция l (68,3 +/- 2,3% ингибирования), фракция m ( 64,0 +/- 1,5% ингибирования) и фракция n (63,0 +/- 1,0% ингибирования) были одинаково достаточно эффективны в отношении значительного разрушения / уменьшения предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42.Удивительно, но оксиндольные алкалоиды (изоптероподин, птероподин, изомитрафиллин и митрафиллин) не оказали значительного влияния на разрушение / дезагрегацию предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42 (рис. 6b). Это исследование также показало, что PTI-777 (т.е. фракции от f до o) был значительно более эффективным разрушителем Aβ из 1-42 фибрилл (т.е. 87,3 +/- 3,0%), чем любая из отдельных тестируемых фракций. Эти исследования показали, что PTI-777 и его отдельные фракции (фракции f, g, h, j, k, l, m и n) были эффективными дезагрегаторами и восстановителями фибрилл Aβ 1–42.Кроме того, было очевидно, что комбинация фракций, наблюдаемая с PTI-777 (смесь ~ 11-13 основных компонентов), была даже более активной, чем любая из отдельных фракций PTI-777 по отдельности, что указывает на возможный синергетический эффект между различными Компоненты ПТИ-777. Наконец, тот факт, что изолированные алкалоиды из Uncaria tomentosa были в основном неэффективны в разрушении фибрилл Aβ 1–42, предполагает, что оксиндольные алкалоиды не ответственны за ингибирующие эффекты амилоида Aβ, оказываемые PTI-777, отдельными фракциями PTI-777. протестировано выше, или кошачий коготь PTI-00703.

В другом исследовании флюорометрия с тиофлавином Т определила дозозависимую эффективность PTI-777 (т.е. компонентов, ингибирующих амилоид Aβ, присутствующих в кошачьем когте PTI-00703) в разрушении / восстановлении предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Например, PTI-777 при соотношении масс / масс Aβ: PTI-777 1: 0,1 значительно (p <0,001) снижает количество фибрилл Aβ 1-42 на 73,2%; тогда как при соотношении Aβ: PTI-777 вес / вес / 1: 1 значительно (p <0,001) снижалось количество фибрилл Aβ 1-42 на 98,6% (фиг. 7a).

PTI-777 разрушает фибриллы Aβ 1–42.( a ) Дозозависимое разрушение / дезагрегация фибрилл Aβ 1–42 с помощью PTI-777 по оценке с помощью флюорометрии с тиофлавином T. PTI-777 значительно (p <0,001) разрушал / дезагрегировал фибриллы Aβ 1–42 дозозависимым образом. ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4. ( b ) Дозозависимое ингибирование связывания Конго красного с фибриллами Aβ 1–42 с помощью PTI-777. *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4. ( c – f ) PTI-777 вызывал заметное разрушение / дезагрегацию вторичной структуры β-слоя для фибрилл Aβ 1–42 и предотвращал образование фибрилл Aβ 1–40, как было определено с помощью спектроскопии КД.( c ) PTI-777 через 3 дня вызывал уменьшение β-слоя фибрилл Aβ 1–42 при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 (вес / вес) 0,1: 1, как показано уменьшением на кривой минимумов ~ 218 нм. ( d ) Через 7 дней совместной инкубации PTI-777 вызвал еще большее разрушение вторичной структуры β-слоя в фибриллах Aβ 1–42. ( e ) PTI-777 через 3 дня полностью предотвращал образование фибрилл Aβ 1-40, что продемонстрировано полным сглаживанием характерных минимумов β-складок, наблюдаемых только для фибрилл Aβ 1-40.( f ) Подобное ингибирование образования β-листов Aβ 1-40 наблюдали с PTI-777 через 7 дней.

Анализ связывания Конго красного продемонстрировал аналогичные результаты. Как показано на фиг. 7b, PTI-777 эффективно восстанавливает предварительно сформированные фибриллы Aβ 1-42 дозозависимым образом. Например, PTI-777 значительно (p <0,001) снижает количество фибрилл Aβ 1–42 на 54,5% при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 по массе 1: 0,1: и на 71,3% (p <0,001). при соотношении масс / масс PTI-777: Aβ 1: 1. Уменьшение окрашивания конго красным на предметных стеклах также продемонстрировало заметное уменьшение двойного лучепреломления красный / зеленый (не показано), что свидетельствует о том, что PTI-777 значительно разрушает предварительно сформированные фибриллы Aβ -42.

Спектроскопия кругового дихроизма (CD) подтвердила, что PTI-777 (то есть компоненты, ингибирующие амилоид Aβ, присутствующие в кошачьем когте PTI-00703) не только ингибирует образование фибрилл Aβ 1-40, но также нарушает / снижает вторичное сворачивание β-складок Aβ. 1–42 фибриллы. В одном исследовании 50 мкМ предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 инкубировали с PTI-777 при соотношении PTI-777: Aβ 1–42 по массе 0,1: 1. Как показано на фиг. 7c, Aβ 1–42 (красные закрашенные кружки) через 3 и 7 дней демонстрировали характерный образец протяженной вторичной структуры β-листов, как показано кривой и минимумом при ~ 218 нм.В присутствии PTI-777 (синие закрашенные кружки) как через 3 дня (фиг. 7c), так и через 7 дней (фиг. 7d) наблюдалось заметное разрушение / уменьшение предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-42. Через 7 дней было примерно 85-90% разрушение / уменьшение вторичной складки β-складчатого листа под действием PTI-777, как показано сглаживанием / сглаживанием кривой, особенно при длине волны ~ 218 нм (рис. 7d).

В другом исследовании 50 мкМ Aβ 1-40 инкубировали при 37 ° C в течение 1 недели в фосфатно-солевом буфере (pH 7,4) либо отдельно, либо в присутствии PTI-777 на PTI-777: Aβ 1– Отношение 40 мас. / Мас. 0.1: 1. PTI-777 вызывал полное снижение кривой вторичного сворачивания β-листов (т.е. минимумы при 218 нм) в течение 3 дней совместной инкубации с Aβ 1-40 (рис. 7e, синие закрашенные кружки). Подобное ингибирование образования фибрилл Aβ 1-40 с помощью PTI-777 наблюдали через 7 дней инкубации (рис. 7f, синие темные кружки).

Заметное снижение нагрузки на амилоидные бляшки головного мозга под действием PTI-777 (основные ингредиенты, ингибирующие амилоид Aβ кошачьего когтя PTI-00703) в модели болезни Альцгеймера у трансгенных мышей

В следующей серии исследований мы определили, может ли PTI-777 оказывают прямое влияние на нагрузку амилоидными бляшками головного мозга при прямом введении в кору 8-месячных двойных трансгенных мышей TASD-41 APP (i.е. Лондонские и шведские мутации под промотором Thy-1) ³⁸ . Как показано на фиг. 8а, показаны репрезентативные окрашенные серебром по Бельховски срезы гиппокампа и коры головного мозга 8-месячных трансгенных мышей, продуцирующих бляшки. Наблюдались многочисленные амилоидные бляшки (белые стрелки). После 14-дневного лечения PTI-777 наблюдалось заметное уменьшение количества амилоидных бляшек в гиппокампе и коре головного мозга, при этом оставалось лишь несколько бляшек (фиг. 8b, стрелки). Количественное определение% нагрузки амилоида Aβ и количества бляшек (на квадратный мм) показало, что инфузия PTI-777 значительно (p <0.01) снизил% нагрузку Aβ на 59% и количество бляшек (p <0,001) на 78% только после 14 дней лечения PTI-777 (фиг. 8c). Место инфузии не было видно на этих микрофотографиях, что указывает на то, что лечение PTI-777 было эффективным для всего мозга, даже относительно далеко от места инфузии.

PTI-777 заметно снижал количество амилоидных бляшек в головном мозге 8-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP после прямой инфузии в гиппокамп. (a ) Окрашивание серебром по Бельховскому показывает обильные амилоидные бляшки в гиппокампе и коре головного мозга трансгенной мыши TASD-41 APP, инфузированной физиологическим раствором в течение 14 дней.Масштабная линейка = 100 мкм. ( b ) Обработка PTI-777 (100 мкл при 8 мг / мл; 14-дневная инфузия) продемонстрировала заметное уменьшение амилоидных бляшек (стрелки) у 8-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP. Масштабная линейка = 100 мкм. ( c, d ) Заметное снижение% нагрузки бета-амилоидным белком и количества бляшек (на кв. Мм) после инфузии PTI-777. ** p <0,01; *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 4.

PTI-777 пересекает гематоэнцефалический барьер и попадает в паренхиму головного мозга в течение 2 минут после нахождения в крови

Профиль ВЭЖХ немеченого PTI-777 показан на рис.9а, который был почти идентичен профилю ВЭЖХ ³ H-PTI-777 (фиг. 9b), что указывает на то, что радиоактивная мечение тритием мало изменило структуру PTI-777. Распределение радиоактивности, измеренное во фракциях по 0,5 мл, которые были элюированы из колонки для ВЭЖХ и собраны, начиная с 16,5 минут, показано на фиг. 9c. Последний рисунок демонстрирует, что пики ВЭЖХ PTI-777 также обладают наибольшей радиоактивностью. Для определения потенциальной способности ³ H-PTI-777 преодолевать гематоэнцефалический барьер и проникать в ткань мозга самцам и самкам крыс Sprague-Dawley вводили один i.v. впрыск ³ H-PTI-777. Затем по два животных в группе умерщвляли через 2, 5, 10, 20 минут, 1, 6 и 24 часа после введения и определяли количество ³ H-PTI-777 в ткани мозга. Как показано на фиг. 9d, ~ 18000 ударов в минуту / г ткани ³ H-PTI-777 в головном мозге было обнаружено в течение 5 минут после внутривенного введения. К 1 часу это снизилось до ~ 10 100 ударов в минуту / г. Даже через 24 часа в ткани мозга все еще содержалось около 7000 ударов в минуту / грамм ³ H-PTI-777, что указывает на то, что ~ 41% начальной дозы, попавшей в паренхиму головного мозга, оставалось в ткани мозга даже в течение 24 часов. -часовой период.

³ H-PTI-777 пересек гематоэнцефалический барьер и проник в паренхиму мозга в течение 2 минут после периферического введения. 0,9 мКи ³ H-PTI-777 с удельной активностью 1,25 мКи / мг (в концентрации 1 мКи / мл) получали и использовали для исследований на животных. ( a ) На фигуре показан профиль ВЭЖХ немеченого PTI-777, который почти идентичен профилю ВЭЖХ ( b ) ³ H-PTI-777. Показаны дроби g, f, h, i, j, k и m / n.( c ) Распределение радиоактивности, измеренное во фракциях по 0,5 мл, которые элюировали из колонки ВЭЖХ и собирали, начиная с 16,5 минут. Этот график демонстрирует, что пики ВЭЖХ PTI-777 также совпадают с наибольшей радиоактивностью. ( d ) Проникновение ³ H-PTI-777 в мозг крысы с радиоактивностью, присутствующей в ткани мозга, через 2 минуты и продолжалось в течение 24-часового периода. n = 14 (7 самок и 7 самцов крыс Sprague-Dawley) ( e ). Проникновение ³ H-PTI-777 в ткань мозга мыши (мыши CD-1) в течение 2 минут после попадания в кровь.n = 16. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

В другом исследовании группам мышей CD-1 (n = 4 на группу) внутривенно вводили ³ H-PTI-777 (25000 имп / мин / мкл) и ^99m TC-альбумин (200 мкл каждого). . После методов истощения капилляров высокое соотношение мозг / сыворотка радиоактивно меченного ³ H-PTI-777 присутствовало в паренхиме и коре головного мозга с минимальными количествами в капиллярной фракции (фиг. 9e). В течение 2 минут после введения ³ H-PTI-777 (в соответствии с методами истощения капилляров) был обнаружен в паренхиме и коре головного мозга и сохранялся в ткани мозга после 5, 10 и 20 минут введения (рис.9д). Эти данные продемонстрировали, что PTI-777 может преодолевать гематоэнцефалический барьер и проникать в паренхиму головного мозга даже в течение 2 минут после того, как он находится в крови.

Заметное снижение нагрузки на бляшки головного мозга под действием PTI-777 в течение 30 дней после периферического введения

PTI-777 (25 мг / кг) или физиологический раствор вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение 30 дней 6-месячным трансгенным мышам TASD-41. После 30-дневного лечения результаты показали, что лечение PTI-777 вызывало значительный (p <0,01) 33.Снижение на 2% нагрузки амилоида Aβ и значительное (p <0,001) уменьшение количества амилоидных бляшек на 56,6% (на квадратный мм) (фиг. 10). Эти исследования демонстрируют способность основных компонентов Uncaria tomentosa (кошачий коготь) проникать в мозг и заметно снижать нагрузку на бляшки головного мозга в течение 30 дней после периферического введения.

Заметное снижение нагрузки бляшками головного мозга у трансгенных мышей TASD-41 APP после 30 дней внутрибрюшинных инъекций PTI-777.6-месячным трансгенным мышам TASD-41 APP ежедневно вводили физиологический раствор или PTI-777. В течение 30 дней PTI-777 снизил процентную долю бляшек Aβ на 33,2% (p <0,05) и количество бляшек (на квадратный мм) на 55,6% (p <0,01). ** р <0,05; *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 8 на группу.

Идентификация основных компонентов в составе кошачьего когтя PTI-00703 и PTI-777, ответственных за наблюдаемую активность ингибирования амилоида Aβ

В результате препаративной ВЭЖХ над PTI-777, описанной здесь, было получено 11-13 основных водорастворимых активных фракций, каждая из которых из которых содержали в основном одно основное соединение.Исследования состава и структуры требовали, чтобы основные индивидуальные соединения в каждой фракции были очищены до гомогенности в количестве, достаточном для ЯМР и других спектроскопических исследований (около 30-50 мг для каждого соединения). Хотя каждая из фракций PTI-777 показала значительную активность в анализах in vitro , фракции f, j, h2, h3, k1 и k2 первоначально были выделены для начальной окончательной очистки на основе их исходной чистоты, определенной с помощью аналитической ВЭЖХ. , и количество доступного материала.Эти фракции пропускали через колонку препаративной ВЭЖХ до тех пор, пока они не считались чистыми.

Фракция PTI-777 f, идентифицированная как хлорогеновая кислота

Для выделения и идентификации основного соединения во фракции PTI-777 f использовались различные методы. Использовали ВЭЖХ, масс-спектроскопию, ЯМР-спектроскопию ( ¹ H-ЯМР и ¹³ C-ЯМР), корреляционную спектроскопию (COSY) и ультрафиолетовую (УФ) спектроскопию. Как показано в дополнительном материале на рис. S1a, S1b, соединение f фракции PTI-777 было идентифицировано как хлорогеновая кислота (C ₁₆ H ₁₈ O ₉ ; MW 354.31) со структурой, показанной на рис. 11а.

Очистка и идентификация основных компонентов в PTI-777. ( a ) Структура фракции f как хлорогеновая кислота ( b ) Структура фракции j как эпикатехин. ( c ) Структура фракции h3 как эпикатехин-4β-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин B2). ( d ) Структура фракции h2 как катехин-4α-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин B4). ( e ) Структура фракции k2 как эпикатехин-4β-8-эпикатехин-4β-8-эпикатехин (известный как проантоцианидин С1).( f ) Структура фракции k1 как эпиафзелехин-4β-8-эпикатехин. См. Дополнительные результаты и рисунки для структурных исследований и исследований по идентификации.

Фракция PTI-777 j, идентифицированная как эпикатехин

Фракция j была вторым материалом, который подлежал очистке в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки соединения j PTI-777 использовали масс-спектроскопию, спектроскопию ЯМР, корреляционную спектроскопию (COSY) и УФ-спектроскопию для соединения фракции j и его пентаацетатного производного.Как показано в дополнительном материале на рис. S2a – S2w, соединение j фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин (C ₁₅ H ₁₄ O ₆ ; MW 290,27) со структурой, показанной на рис. 11b.

Фракция h3 PTI-777, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (специфический димер эпикатехина, известный как проантоцианидин B2)

Фракция h3 была третьим материалом, очищенным в количестве, достаточном для работы по структурному выяснению. После выделения и очистки соединения h3 PTI-777 были проведены ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( ¹ H ЯМР и ¹³ C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY) и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. все б / у.Основной компонент фракции h из экстракта PTI-777 также был основным компонентом в Uncaria tomentosa (кошачий коготь), ответственной за ингибирующую активность и дезагрегацию Aβ (бляшки) и тау-белка (клубок) (см. Рис. 6а). Как показано в дополнительном материале на рис. S3a – S3m, соединение h3 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин-4β-8-эпикатехин, также известный как проантоцианидин B2 (C ₃₀ H ₂₆ O ₁₂ ; MW 577) , со структурой, показанной на рис.11c.

PTI-777 фракция h2, идентифицированная как катехин-4α → 8-эпикатехин (проантоцианидин B4)

Фракция h2 была четвертым материалом, который нужно очистить в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки соединения h2 PTI-777 проводили масс-спектроскопию с электрораспылением -ve ионов с ионами-ve. Использовали ЯМР-спектроскопию ( ¹ H-ЯМР и ¹³ C-ЯМР), корреляционную спектроскопию (COSY), спектроскопию с измененным масштабированием с постоянным обратным градиентом детектирования (CIGAR) и ультрафиолетовую (УФ) спектроскопию.Как показано в дополнительном материале на рис. S4a – S4j, соединение h2 фракции PTI-777 было идентифицировано как катехин-4α-8-эпикатехин (рис. 11d), также известный как проантоцианидин B4 (C ₃₀ H ₂₆ O ₁₂ ; МВт 577).

Фракция k2 PTI-777, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин или проантоцианидин C1

Фракция k2 была пятым материалом, который нужно очистить в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры. После выделения и очистки соединения k2 PTI-777 проводили масс-спектроскопию с электрораспылением -ve ионов с ионным распылением.Использовались ЯМР-спектроскопия ( ¹ H ЯМР и ^{13 90 291 C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), спектроскопия с измененным масштабом с постоянным обратным градиентом детектирования (CIGAR) и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. Как показано в дополнительном материале на рис. S5a – S5j, соединение k2 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (рис. 11e), также известный как проантоцианидин C1 (C ₄₅ H ₃₈ O ₁₈ ; MW 866).}

Фракция k1 PTI-777, идентифицированная как эпиафзелехин-4β → 8-эпикатехин

Фракция k1 была шестым материалом, подлежащим очистке в количестве, достаточном для работы по выяснению структуры.После выделения и очистки соединения PTI-777 k1, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( ¹ H ЯМР и ¹³ C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), постоянное время, обратное определение градиента аккордеона Использовались измененная (CIGAR) спектроскопия и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия. Как показано в дополнительном материале на рис. S6a – S6j, соединение k1 фракции PTI-777 было идентифицировано как эпиафзелехин-4β → 8-эпикатехин (рис. 11f) (C ₃₀ H ₂₆ O ₁₁ ; MW 562).

Фракция 1 PTI-777, идентифицированная как эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (тетрамер эпикатехина)

Фракция l была седьмым материалом, очищенным в количестве, достаточном для структурной разъяснительная работа. После выделения и очистки соединения PTI-777 1, ВЭЖХ, масс-спектроскопия с электрораспылением -ve ионов, ЯМР-спектроскопия ( ¹ H ЯМР и ¹³ C ЯМР), корреляционная спектроскопия (COSY), постоянное время, обратное определение градиента аккордеона Использовались измененная (CIGAR) спектроскопия и ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия.Как показано в дополнительном материале на рис. S7a, соединение фракции l PTI-777 было идентифицировано эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин-4β → 8-эпикатехин (тетрамер эпикатехина) (C ₈₀ H ₅₀ O ₂₄ ; MW 1153).

PTI-00703 Проантоцианидины кошачьего когтя являются мощными дезагрегаторами / восстановителями фибрилл Aβ 1–42

В следующем исследовании флюорометрия с тиофлавином Т определила эффекты соединений h3, f, k1, k2 и митрафиллина (основного алкалоида в кошачьем когте) о разборке / дезагрегации предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42.В этом исследовании 25 мкМ предварительно фибриллированного Aβ 1–42 инкубировали при 37 ° C в течение 1 недели отдельно или в присутствии соединения h3, f, k1, k2 и митрафиллина при массовых отношениях Aβ: тестируемое соединение 1: 1. ; 1: 0,1; 1: 0,01; 1: 0,001 и 1: 0,0001. Результаты инкубации на 7 день представлены на фиг. 12a, но аналогичные результаты наблюдались уже через 3 дня (не показаны). Как показано на фиг. 12a, в то время как митрафиллин, алкалоид кошачьего когтя, не вызывал значительного разрушения фибрилл Aβ 1–42 при всех испытанных концентрациях, соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2) вызывало дозозависимое нарушение / уменьшение предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42, со значительной (p <0.001) 94% снижение при использовании при соотношении масс / масс Aβ: h3 1: 1 и значительное (p <0,01) снижение на 63% при использовании при соотношении масс / масс Aβ: h3 1: 0,1 (~ 1 : 1 молярное соотношение). Точно так же соединение f (хлорогеновая кислота), соединение k2 (тример эпикатехина; проантоцианидин C1) и соединение k1 (эпиафзелехин -4β → 8-эпикатехин) все вызвали заметное разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 при использовании при 1: Соотношение мас. / Мас. 1 (рис. 12а). Наиболее эффективным из них, протестированным для разборки / дезагрегации фибрилл Aβ 1–42, было соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2).

PTI-00703 Проантоцианидины кошачьего когтя являются мощными разрушителями фибрилл Aβ 1–42. (a ) Разрушение / разрушение фибрилл Aβ 1-42 специфическими проантоцианидинами кошачьего когтя PTI-00703. Соединение h3 (эпикатехин-4β → 8-эпикатехин; проантоцианидин B2) вызывало дозозависимое разрушение / дезагрегацию предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42. Аналогичным образом, соединение f (хлорогеновая кислота), соединение k1 (тример эпикатехина; проантоцианидин C1) и соединение k2 (эпифзеледин-4β-8-эпикатехин) все вызвали заметное разрушение / восстановление предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 при использовании при 1: Соотношение 1 вес / вес.Основной алкалоид кошачьего когтя митрафиллин оказался совершенно неэффективным. ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM. n = 5. ( b , c ) Разрушение / дезагрегация предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и 1–40 эпикатехин-4β-8-эпикатехином (т.е. проантоцианидином B2; соединение h3) по данным спектроскопии КД .

PTI-00703 проантоцианидин B2 кошачьего когтя (эпикатехин-4β-8-эпикатехин) является мощным дезагрегатором / восстановителем предварительно сформированных фибрилл Aβ 1–42 и Aβ 1–40, как показывает спектроскопия кругового дихроизма

Круговой дихроизм (CD ) спектроскопия определила эффекты тестируемых соединений по разрушению / уменьшению предварительно сформированных амилоидных фибрилл.В одном исследовании КД-спектроскопия определила эффекты чистого соединения h3 (т.е. эпикатехин-4β-8-эпикатехин) на разрушение вторичной структуры β-складчатых листов предварительно сформированных фибрилл Aβ 1-40 или Aβ 1-42. Как показано на фиг. 12b, только Aβ 1–42 в 10% буфере TFE показал типичные спектры КД амилоидного белка со значительной β-структурой, о чем свидетельствуют резкие минимумы, наблюдаемые при 218 нм. Однако в присутствии соединения h3 (например, эпикатехин-4β-8-эпикатехин; проантоцианидин B2) в молярном соотношении 1: 1 заметное нарушение структуры β-слоев в фибриллах Aβ 1-42 было очевидным, как показано сглаживание минимумов, наблюдаемых при 218 нм (по сравнению с одним Aβ 1–42) (рис.12б). Это наблюдалось как через 3 дня (не показано), так и через 7 дней (фиг. 12b) после совместной инкубации фибрилл Aβ 1–42 с соединением h3. Это исследование ясно продемонстрировало, что соединение h3 (эпикатехин-4β-8-эпикатехин; проантоцианидин B2) обладало способностью разрушать / разбирать вторичную структуру бета-складчатого листа, характерную для фибрилл Aβ 1–42.

Как показано на фиг. 12c, только Aβ 1-40 в 10% буфере TFE PBS также показал типичные спектры КД амилоидного белка со значительной структурой β-пластин, что продемонстрировано резкими минимумами при 218 нм.Однако в присутствии соединения h3 (при молярном соотношении 1: 1) был очевиден почти полный разрыв / разборка β-листовой структуры в фибриллах Aβ 1-40 (со значительным увеличением случайного клубка или α-спирали). как показано полным сглаживанием минимумов, наблюдаемых при 218 нм (рис. 12c). Это наблюдалось как через 3 дня (фиг. 12c), так и через 7 дней (не показано) после совместной инкубации фибрилл Aβ 1-40 с соединением h3. Это исследование ясно продемонстрировало, что проантоцианидин B2 (т.е. соединение h3) также разрушает / разбирает бета-складчатую вторичную структуру фибрилл Aβ 1-40.

Проантоцианидин B2 (эпикатехин-4β-8-эпикатехин; соединение h3) снижает нагрузку на бляшки головного мозга и улучшает память в модели трансгенных мышей, «продуцирующих бляшки».

Как показано на фиг. 13, уровни Aβ в мозге (т. Е. В коре) 42 и Aβ 40 уровни растворимых и нерастворимых мышей у более молодых 4-месячных трансгенных мышей TASD-41 APP были значительно (p <0,01) снижены после введения проантоцианидина B2 (соединение h3; эпикатехин-4β-8-эпикатехин) в дозе 50 мг / кг. / день после 90 дней лечения (т.е. 7 месяцев при умерщвлении), как определено с помощью ELISA для Aβ 1–42 и 1–40. Обработка проантоцианидином B2 значительно (p <0,05) снижала уровни нерастворимых Aβ 42 и Aβ 40 в головном мозге на 18,5% (фиг. 13a) и 23,9% (фиг. 13b), соответственно. Обработка проантоцианидином B2 также значительно (p <0,01) снижала уровни растворимых Aβ 42 и Aβ 40 на 70,4% (фиг. 13c) и 58,9% (фиг. 13d), соответственно, соответственно.

Снижение нагрузки бляшками головного мозга у более молодых ( a – h ) и более старых ( i – j ) трансгенных мышей TASD-41 APP с помощью проантоцианидина B2 (соединение h3).( a – h ) Снижение нагрузки Aβ 1–42 и Aβ 1–40 в головном мозге проантоцианидином B2 (т.е. соединением h3) у более молодых (4 месяца в начале; 7 месяцев при умерщвлении) трансгенных мышей APP. n = 10 на группу. ( a ) Проантоцианидин B2 вызывал значительное (p <0,05) 18,5% снижение нерастворимого Aβ 1–42 и ( c ) значительное (p <0,05) 70,4% снижение растворимого Aβ 1–42, как определено. с помощью Aβ ELISA. ( b ) Соединение h3 также вызывало значительное снижение нерастворимого Aβ 1-40 на 23,9%, а ( d ) значительное уменьшение 58.Снижение на 9% растворимого Aβ 1–40 в мозге трансгенных мышей TASD-41. n = 4 на группу. ( e – h ) Снижение амилоидной нагрузки в головном мозге и количества бляшек с помощью проантоцианидина B2 у более молодых (4 месяца в начале; 7 месяцев после умерщвления) трансгенных мышей TASD-41. n = 10 на группу. ( e ) Анализ изображений окрашенных тиофлавином-S срезов коры головного мозга показал, что проантоцианидин B2 (обработка h3) вызывал значительное снижение амилоидной нагрузки тиофлавином S на 74,2% и ( f ) значительное 74.Снижение количества налета на 9% (на квадратный мм). Точно так же окрашивание конго красным показало значительную нагрузку амилоида 82,9% ( г, ) и снижение количества бляшек на 80,8% ( ч ). Окрашенные тиофлавином S срезы коры более старых трансгенных мышей TASD-41 APP (в возрасте 6 месяцев в начале; 9 месяцев в момент умерщвления) показали, что проантоцианидин B2 вызывал значительное снижение амилоидной нагрузки тиофлавином S на 58,2% ( i ) и значительное снижение количества налета на 51,9% ( j ).* p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001, по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

Как показано на рис. 13e, количественный анализ изображений срезов, окрашенных тиофлавином-S, из коры более молодых трансгенных мышей TASD-41 APP (т. Е. В возрасте 4 месяцев до начала; 7 месяцев при умерщвлении) показал, что обработка проантоцианидином B2 вызывала значительное (p <0,001) снижение амилоидной нагрузки тиофлавина-S на 74,2% (рис. 13e) и значительное (p <0,001) уменьшение количества бляшек на 74,9% (рис.13f) по сравнению с мышами APP, получавшими физиологический раствор. Количественный анализ изображений срезов, окрашенных конго красным, продемонстрировал, что проантоцианидин B2 также вызывал значительное (p <0,001) 82,9% снижение количества амилоидов, окрашенных конго красным (рис. 13g), и значительное (p <0,001) снижение количества бляшек на 80,8% (рис. Фиг. 13h) по сравнению с мышами APP, получавшими физиологический раствор.

Аналогичное снижение амилоидной нагрузки в головном мозге и количества бляшек было также обнаружено через 90 дней периферической обработки проантоцианидином В2 у более старых (9 месяцев при умерщвлении) трансгенных мышей TASD-41 APP.В этом последнем исследовании животные, получавшие проантоцианидин B2, показали значительное (p <0,001) снижение нагрузки бета-амилоидным белком на 58,2% (по оценке с использованием антитела Aβ 6E10) (рис. 13i) и значительное (p <0,001) 51,9. % уменьшение количества бляшек (фиг. 13j) по сравнению с мышами, получавшими физиологический раствор.

Примеры 2 трансгенных мышей TASD-41 APP, обработанных физиологическим раствором в течение 90 дней и окрашенных на наличие амилоидных бляшек в коре головного мозга с использованием тиофлавина S, показаны на фиг. 14a (a, b, обработка физиологическим раствором). Обработка проантоцианидином B2 (обработанная h3) вызвала заметное снижение амилоидной нагрузки мозга / количества бляшек в коре головного мозга, как показано на двух разных мышах TASD-41 APP с использованием флуоресценции тиофлавина S (рис.14a, h3, как показано в c и d).

Улучшение памяти и уменьшение воспаления (астроцитоза и микроглиоза) с помощью проантоцианидина B2. ( a ) Пример уменьшения окрашенных тиофлавином-S бляшек в коре головного мозга 2 обработанных физиологическим раствором трансгенных мышей TASD-41 (рис. A, верхние панели) по сравнению с двумя проантоцианидином B2 (т.е. трансгенных мышей TASD-41, обработанных h3 ( Рис. A, нижние панели) Масштабная шкала = 50 мкм. ( b ) Тестирование в водном лабиринте Морриса продемонстрировало, что обработка проантоцианидином B2 (Tg / h3) заметно и достоверно (p <0.001) улучшили кратковременную память на 57,8% по сравнению с животными, получавшими физиологический раствор (Tg / физиологический раствор), как показано на 4-й день невидимой платформы. Подобное снижение наблюдалось на 5-й день невидимой платформы после обработки процианидином В2. p <0,001 по t-критерию Стьюдента и ANOVA. n = 12 на группу. ( c ) Проантоцианидин B2 был мощным редуктором астроцитоза у трансгенных животных TASD-41, что продемонстрировано значительным (p <0,001) 69% снижением астроцитоза (то есть срезов мозга, окрашенных иммуноокрашенным GFAP).Масштабная линейка = 50 мкм. ( d ) Иммуноокрашивание MHC-II и анализ изображений также показали, что обработка проантоцианидином B2 (значительно p <0,001) уменьшала иммуноокрашивание MHC-II (т.е. микроглиоз) на 80,3%. *** p <0,001 по t-критерию Стьюдента. Столбцы представляют собой среднее значение +/- SEM.

Через 90 дней ежедневного i.p. инъекции (50 мг / кг / день) физиологического раствора (Tg / физиологический раствор) или проантоцианидина h3 (Tg / h3), трансгенных мышей TASD-41 APP и нетрансгенных контрольных однопометников (Non-Tg) тестировали в водном лабиринте Морриса. для определения влияния на гиппокамп-зависимую память (т.е. пространственное приобретение). Обработка проантоцианидином h3 вызвала заметное улучшение гиппокампа-зависимой памяти (на 57,8% на 4 день невидимой платформы; рис. 14b) и на 57,3% на 5 день невидимой платформы (не показано). Это было обнаружено как по длине пути (расстояние в метрах) (рис. 14b), так и по задержке (м / с) (не показано). Таким образом, изменений в скорости плавания (м / сек) между всеми группами не обнаружено. У мышей TASD-41 APP, получавших проантоцианидин B2, наблюдалось заметное улучшение кратковременной памяти, приближающееся к уровням, наблюдаемым у нетрансгенных животных (Non-Tg) (рис.14б). В последний день обучения все группы обнаружили видимую платформу, демонстрирующую отсутствие двигательных нарушений у всех животных. Это исследование подтвердило, что основной компонент кошачьего когтя PTI-00703, проантоцианидин В2, был мощным редуктором амилоидных «бляшек» мозга, что совпало с заметным улучшением кратковременной памяти.

Главный компонент кошачьего когтя PTI-00703 (проантоцианидин В2) является мощным редуктором как астроцитоза головного мозга, так и микроглиоза.

Как иммуноокрашивание GFAP (для астроцитов), так и иммуноокрашивание MHC-II (для микроглии) из обработанных солевым раствором проантоцианидов по сравнению с проантоцианидом B2 Трансгенных мышей, получавших АРР, количественно оценивали с помощью программы анализа изображений.Как показано на фиг. 14c, обработка проантоцианидином B2 (обработка h3) вызвала значительное снижение астроцитоза, что продемонстрировано заметным уменьшением срезов мозга, иммуноокрашенных GFAP. Количественный анализ изображений показал, что соединение h3 вызывает значительное (p <0,001) 69,0% снижение астроцитоза. Как показано на фиг. 14d, обработка проантоцианидином B2 также вызвала значительное (p <0,001) 80,3% снижение микроглиоза, на что указывает заметное снижение иммуноокрашивания MHC-II в срезах мозга.Эти исследования дополнительно подтвердили сильную противовоспалительную активность проантоцианидина B2 за счет значительного снижения как астроцитоза мозга, так и микроглиоза у трансгенных мышей TASD-41 APP. Ранее было показано, что кошачий коготь является сильным противовоспалительным средством ^39,40 .

НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 Дешевая распродажа с ограниченным сроком действия для мобильных устройств P и

НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 с ограниченным временем дешевые продажи инструмент часы для мобильных P и $ 32 НОВЫЙ 115-в-1 инструмент для разборки отверток для часов и мобильных P инструменты ремонт дома электрические ручные инструменты ручные инструменты мобильные, / agoge774159.html, Разобрать, demmer.ro, И, 32 доллара США, НОВИНКА, Часы, Отвертка, Инструмент, P, Для, Инструменты Ремонт дома, Электроинструменты, Ручные инструменты, 115-в-1 НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 Ограниченное время дешевая распродажа для мобильных часов P и $ 32 НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 для часов и мобильных P Инструменты для дома Электроинструменты Ручные инструменты для мобильных устройств, / agoge774159.html, Disassemble, demmer.ro, And, 32 доллара США, НОВИНКА, Часы, Отвертка, Инструмент, P, Для, Инструменты, Товары для дома, Ручные электрические инструменты, Ручные инструменты, 115-в-1

$ 32

НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 для часов и мобильных устройств P

• Убедитесь, что это подходит введя номер вашей модели.
• Просто набор острых инструментов для разборки и сборки из материала S2, несколько мягких стержней, удлиненные телескопические стержни, дробленый огонь и закаленные биты, прочные и долговечные, не ржавеют
• Телескопический удлинительный стержень, нажмите для регулировки длины удлинительного стержня, прост в установке и извлечении; разнонаправленный шланг, вращение на 360 °, можно сращивать по желанию; расширенная телескопическая функция, удобная для использования в узких местах
• Импортированный материал головки дозирования S2, твердость около 58-60HRC, высокая твердость и длительный срок службы; хвостовая часть ручки вращается для легкой разборки и сборки.
• Различные спецификации, подходящие для разборки и установки различных конфиденциальных деталей, инструментов, мобильных телефонов, часов и часов.
• Наша цель — создавать высококачественные продукты и искренне обслуживать клиентов, и мы искренне благодарим вас за покровительство нашему магазину.Если у вас возникли проблемы с качеством и использованием, свяжитесь с нами. Мы ответим вам в течение 24 часов и сделаем все возможное, чтобы обслужить вас.

НОВАЯ отвертка для разборки 115-в-1 для часов и мобильных устройств P

Вина и спиртные напитки

Адзума Макото переосмысливает односолодовый виски Glenmorangie 18 Years Old с удивительно цветочным дизайном ограниченной серии

Парфюмерия и косметика

Acqua di Parma и Эмилио Пуччи собрались вместе, чтобы поддержать организацию Save the Children

Мода и кожа

Выставка «Christian Dior: Designer of Dreams» прибывает в Бруклинский музей

Мода и кожа

Путешествие на Марс с Франсуа Шуитеном и Сильвеном Тессоном, новая жемчужина пополнила коллекцию туристических книг Louis Vuitton

ПАПКА НОВОСТЕЙ

1780-2020.Chaumet написал свою исключительную историю столетие за столетием, непрерывную 240-летнюю сагу о первом ювелире, поселившемся по одному из самых известных адресов в мире, на Вандомской площади в Париже. Чтобы отпраздновать эту годовщину и вернуть великолепие Baudard de Sainte-James hôtel speulier, всемирно известный ювелирный дом полностью обновил свой престижный флагман. Присоединяйтесь к нам в частном туре по 12 Вандому.

ПАПКА НОВОСТЕЙ

Социальная и экологическая ответственность

ПАПКА НОВОСТЕЙ

Команды Maison Ruinart потратили более трех лет на разработку революционной упаковки, которая окутывает бутылку шампанского, как вторая кожа. Эко-оболочка, на 100% пригодная для вторичной переработки, идеально сочетается с символическим силуэтом фирменных бутылок Ruinart, сохраняя при этом целостность вкуса до тех пор, пока эликсир не будет использован.Это новаторское достижение — результат долгосрочных коллективных усилий команды шампанского дома и его партнеров.

Социальная и экологическая ответственность

ПАПКА НОВОСТЕЙ

Таланты

Присоединиться к LVMH означает стать частью академии талантов и творчества вместе, чтобы обеспечить более устойчивое, творческое и инклюзивное будущее.

Группа

LVMH — семейная группа, которая стремится обеспечить долгосрочное развитие каждого из своих домов в соответствии с их индивидуальностью, их наследием и их опытом.

до полной разборки — французский перевод — Linguee

Как работают мины | HowStuffWorks

Подрывная мина M14

M14 — это небольшая цилиндрическая взрывная мина с пластиковым корпусом. Его высота составляет всего 1,57 дюйма (40 мм), а диаметр — 2,2 дюйма (56 мм).Первоначально он был разработан и использовался Соединенными Штатами в 1950-х годах, но его использовали и копировали многие страны по всему миру. Эта противопехотная мина содержит лишь небольшое количество взрывчатого вещества, около 31 грамма тетрил . Он предназначен для нанесения вреда людям и объектам в непосредственной близости от него.

M14 изначально оснащен U-образным предохранительным зажимом , который устанавливается вокруг прижимной пластины. Чтобы активировать M14, предохранительный зажим снимается, и прижимная пластина поворачивается из своего безопасного положения в исходное положение.На прижимной пластине выбиты буквы A (активирован) и S (безопасность). Солдаты просто совместят стрелку с буквой A, чтобы поставить мину.

Когда мина взорвана, любое давление не менее 19,8 фунтов (9 кг) может вызвать детонацию мины. При приложении надлежащего давления он давит на пружину Belleville под прижимной пластиной. Эта пружина толкает боек вниз к детонатору , который воспламеняет основной заряд тетрилового взрывчатого вещества .

Ограничивающая / осколочная мина M16

Ограничивающие мины вырываются из-под земли, а затем взрываются. M16 состоит из трех основных частей: минного взрывателя , метательного заряда для подъема мины и снаряда , заключенного в чугунный корпус. Его высота составляет 7,83 дюйма (199 мм), а диаметр — 5,24 дюйма (133 мм). Мина M16 содержит около 1,15 фунта (521 грамм) взрывчатого вещества тринитротолуола (тротил).

Взрыватель проходит через центр мины до дна, где находится метательный заряд.Для взведения мины с бойка на верхней части взрывателя извлекается английская булавка. Сверху предохранителя расположены три контакта , соединенных с подпружиненным клином . Взрыватель включает в себя ударный капсюль , элемент задержки и заряд черного пороха .

M16 можно взорвать двумя способами: приложив давление или потянув за подпружиненный спусковой штифт. При любом из этих методов штифт выдергивается из предохранителя, высвобождая ударник и воспламеняя ударный капсюль.Ударный капсюль запускает элемент задержки во взрывателе, который запускает детонатор после небольшой задержки. Детонатор воспламеняет черный порох в взрывателе, стреляя метательным зарядом в дно мины. Мина взлетает примерно на 1,2 метра; затем основной заряд взрывается и высвобождает ливень металлических осколков.

v26n03.pdf

% PDF-1.3 % 261 0 объект > эндобдж 280 0 объект > поток 11.08.5152017-12-07T12: 02: 56.930-07: 00Acrobat Distiller 4.0 для Macintosh0ccdfedcce23e8b0d1d0c9dc44b00fa15b9159e71846430application / pdf2017-12-07T12: 09: 59.422-07: 00