he перевод и транскрипция, произношение, фразы и предложения
[hiː]
Добавить в закладки Удалить из закладок
местоимение
- он
- оно
- тот
- она
Синонимы: it, the, one, his, her, she, its, thereby, a, they, same.
Фразы
judge he
судья он
Предложения
He likes to sing in the bathtub.
Он любит петь, принимая ванну.
He became a shell of his former self.
От него прежнего осталась лишь оболочка.
«Is he lying?» «Obviously.»
«Он лжёт?» — «Очевидно, что да».
Tom explained how he lost his money.
He uses an old-style razor, with shaving cream, for a closer shave.
Он пользуется опасной бритвой и кремом для более тщательного бритья.
He reads before bedtime.
Он читает перед сном.
Will he be able to catch the train?
Успеет ли он на поезд?
He asked me if I had slept well the night before.
Он спросил меня, хорошо ли я спала прошлой ночью.
He is a good fellow, to be sure, but he isn’t reliable.
Он, конечно, хороший парень, но не отличается надёжностью.
He complains about one thing or another all the time.
Он постоянно жалуется то на одно, то на другое.
He will be a good teacher.
Он будет хорошим преподавателем.
He was sitting on the floor.
Он сидел на полу.
The speaker took every opportunity he could to big-note himself.
Говоривший использовал всякую подвернувшуюся возможность, чтобы выпятить себя.
He pretended not to hear me.
Он сделал вид, что не слышит меня.
Tom was absent from school because he was sick.
Том отсутствовал в школе, потому что был болен.
He built forty-eight forts.
Он построил сорок восемь фортов.
Is he back already?
Он уже вернулся?
I fear that he may be late for the train.
Я боюсь, что он может опоздать на поезд.
He will join us later.
Он присоединится к нам позже.
He wouldn’t allow me to drive his car.
Он бы не позволил мне сесть за руль его машины.
He isn’t able to drive a car.
Он не в состоянии вести машину.
Tom is a fool if he believes that story.
Том дурак, если верит этим россказням.
He was well known throughout the country.
Он был хорошо узнаваем по всей стране.
Nobody seems to have paid attention to what he said.
Похоже, никто не обратил внимания на то, что он сказал.
He cannot be saved.
Он не может быть спасён.
Tom didn’t tell me he lived in Boston.
Том не говорил мне, что живёт в Бостоне.
He knows how to read Chinese.
Он умеет читать на китайском.
He went from Tokyo to Osaka by plane.
Он отправился из Токио в Осаку на самолёте.
He got hurt in the game yesterday.
Он ушибся во время вчерашней игры.
Перевод, транскрипция слова he, фразы и предложения со словом he.
Фразы, словосочетания со словом he:
he will come at ten — он придёт в десять
he is over thirty — ему за тридцать
he will never see fifty again — ему давно за пятьдесят
I wonder how he keeps body and soul together — удивляюсь, в чём у него душа держится
he with the scar on his face — тот человек со шрамом на лице
he certainly does not want intelligence — ума ему не занимать
perfectly innocent of the confusion he had created — совершенно не замечающий вызванного им замешательства
he found the bean in the cake — ему посчастливилось, повезло
he was received with great circumstance — ему устроили пышную встречу
he is no idiot — он вовсе не дурак
he wants some ginger — ему не хватает задора
Предложения со словом he:
He made a tough decision to break up with her.
Он принял сложное решение расстаться с ней.
Ben boasted, that he would easily win this game.
Бен похвастался, что он легко выиграет эту игру.
He was depressed, the heap of trouble has happened with him.
Он был подавлен, куча неприятностей случилось с ним.
He presented me a mexican hat.
Он подарил мне мексиканскуб шляпу.
He conducted this difficult job.
Oн провел эту трудную работу
He was given an immediate medical attention.
Ему оказали неотложную скорую помощь
He reflected an attack and won the first round.
Он отразил атаку и выиграл первый раунд.
He did not know where he is, because he followed a wrong route.
Он не знал, где он находится, потому что слежовал неверному маршруту.
He has a mental illness and every year he is tested.
Он имеет психическое заболевание и каждый год он проходит тесты.
On the island he should survive and after that he will get money.
На острове он должен выжить и после того, что он получит деньги.
He played many roles, he is a famous actor.
Он сыграл много ролей, он известный актер.
He studied well and improved the skills.
Он хорошо учился и улучшил навыки.
He was sent to a jail.
Его отправили в тюрьму.
He ate a spicy souce.
Он съел острый соус.
He put a proposal to his girlfriend.
Он сделал предложение своей девушке.
He tasted an asian dish.
Он попробовал азиатское блюдо.
He had been trying to convince me for a long time and I finally agreed.
Он долго пытался уговорить меня и я наконец согласился.
he, have, try, convince, me, long, time, finally, agree, had, been, trying, for, agreedHe is tired, he doesn’t seem willing to walk.
Он уставший, не кажется, что он хочет прогуляться.
He gave us a brief description of the overall situation.
Он дал нам краткое описание ситуации вцелом.
He is so indifferent to others as if his heart is made of stone.
Он так безразличен к другим, как будто у него каменное сердце.
he, be, so, indifferent, others, his, heart, make, stone, as, if, made%d1%82%d1%80%d0%b0%d0%bd%d1%81%d0%ba%d1%80%d0%b8%d0%bf%d1%86%d0%b8%d1%8f%20%d1%81%d0%bb%d0%be%d0%b2%d0%b0%20%d0%b4%d0%b5%d0%bb%d1%8c%d1%84%d0%b8%d0%bd — со всех языков на все языки
Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────Айнский языкАканАлбанскийАлтайскийАрабскийАрагонскийАрмянскийАрумынскийАстурийскийАфрикаансБагобоБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийБурятскийВаллийскийВарайскийВенгерскийВепсскийВерхнелужицкийВьетнамскийГаитянскийГреческийГрузинскийГуараниГэльскийДатскийДолганскийДревнерусский языкИвритИдишИнгушскийИндонезийскийИнупиакИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКиргизскийКитайскийКлингонскийКомиКомиКорейскийКриКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛюксембургскийМайяМакедонскийМалайскийМаньчжурскийМаориМарийскийМикенскийМокшанскийМонгольскийНауатльНемецкийНидерландскийНогайскийНорвежскийОрокскийОсетинскийОсманскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийРумынский, МолдавскийСанскритСеверносаамскийСербскийСефардскийСилезскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТатарскийТвиТибетскийТофаларскийТувинскийТурецкийТуркменскийУдмурдскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧеркесскийЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШайенскогоШведскийШорскийШумерскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЮпийскийЯкутскийЯпонский
Все языкиРусскийАнглийскийИспанский────────АймараАйнский языкАлбанскийАлтайскийАрабскийАрмянскийАфрикаансБаскскийБашкирскийБелорусскийБолгарскийВенгерскийВепсскийВодскийВьетнамскийГаитянскийГалисийскийГреческийГрузинскийДатскийДревнерусский языкИвритИдишИжорскийИнгушскийИндонезийскийИрландскийИсландскийИтальянскийЙорубаКазахскийКарачаевскийКаталанскийКвеньяКечуаКитайскийКлингонскийКорейскийКрымскотатарскийКумыкскийКурдскийКхмерскийЛатинскийЛатышскийЛингалаЛитовскийЛожбанМайяМакедонскийМалайскийМальтийскийМаориМарийскийМокшанскийМонгольскийНемецкийНидерландскийНорвежскийОсетинскийПалиПапьяментоПенджабскийПерсидскийПольскийПортугальскийПуштуРумынский, МолдавскийСербскийСловацкийСловенскийСуахилиТагальскийТаджикскийТайскийТамильскийТатарскийТурецкийТуркменскийУдмурдскийУзбекскийУйгурскийУкраинскийУрдуУрумскийФарерскийФинскийФранцузскийХиндиХорватскийЦерковнославянский (Старославянский)ЧаморроЧерокиЧеченскийЧешскийЧувашскийШведскийШорскийЭвенкийскийЭльзасскийЭрзянскийЭсперантоЭстонскийЯкутскийЯпонский
| е | e | Есенин — Esenin Сергеевич — Sergeevich | ГОСТ 7.79-2000 загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса международные телеграммы |
| ye в начале слова, после гласных и знаков ъ и ь; в остальных случаях — e | Есенин — Yesenin Сергеевич — Sergeyevich | Госдепартамент США | |
| ё | yo | ёлка — yolka проём — proyom | ГОСТ 7.79-2000 Народная Карта Яндекса |
| e | ёлка — elka проём — proem | загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег международные телеграммы | |
| ye в начале слова, после гласных и знаков ъ и ь; в остальных случаях — e | ёлка — yelka проём — proyem | Госдепартамент США | |
| jo | ёлка — jolka проём — projom | ||
| ж | zh | жало — zhalo пожар — pozhar | ГОСТ 7.79-2000 загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США |
| j | жало — jalo пожар — pojar | международные телеграммы | |
| й | j | рой — roj сойка — sojka | ГОСТ 7.79-2000 |
| i | рой — roi сойка — soika | загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег международные телеграммы | |
| y | рой — roy сойка — soyka | Народная Карта Яндекса Госдепартамент США | |
| х | kh после букв c, e, h, k, s, z; в остальных случаях — h | хлеб — hleb кхмеры — kkhmery шхуна — shkhuna пароход — parohod | |
| kh | хлеб — khleb кхмеры — kkhmery шхуна — shkhuna пароход — parokhod | загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США | |
| x | хлеб — xleb кхмеры — kxmery шхуна — shxuna пароход — paroxod | ГОСТ 7.79-2000 | |
| h | хлеб — hleb кхмеры — khmery шхуна — shhuna пароход — parohod | международные телеграммы | |
| ц | c | цунами — cunami перец — perec | ГОСТ 7.79-2000 международные телеграммы |
| ts | цунами — tsunami перец — perets | загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США | |
| щ | shch | щука — shchuka Рощин — Roshchin | загранпаспорт водительское удостоверение Госдепартамент США |
| sch | щука — schuka Рощин — Roschin | банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса | |
| shh | щука — shhuka Рощин — Roshhin | ГОСТ 7.79-2000 | |
| sc | щука — scuka Рощин — Roscin | международные телеграммы | |
| ъ | » (кавычка) | подъезд — pod»ezd |
|
| » (два апострофа) | подъезд — pod»ezd | ГОСТ 7.79-2000 (упрощ.) | |
| « (два грависа) | подъезд — pod«ezd | ГОСТ 7.79-2000 | |
| ie | подъезд — podieezd | загранпаспорт водительское удостоверение | |
| не пишется | подъезд — podezd | банковская карта Яндекс.Денег Госдепартамент США международные телеграммы | |
| y перед буквой е; в остальных случаях не пишется | подъезд — podyezd | Народная Карта Яндекса | |
| ы | y | первый — pervyj Давыдов — Davydov | ГОСТ 7.79-2000 (упрощ.) загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Госдепартамент США международные телеграммы |
| y` (y с грависом) | первый — pervy`j Давыдов — Davy`dov | ГОСТ 7.79-2000 | |
| i в окончаниях перед буквой й; в остальных случаях — y | первый — perviy Давыдов — Davydov | Народная Карта Яндекса | |
| ь | ‘ (апостроф) | конь — kon’ пьеса — p’esa | ГОСТ 7.79-2000 (упрощ.) |
| ` (гравис) | конь — kon` пьеса — p`esa | ГОСТ 7.79-2000 | |
| не пишется | конь — kon пьеса — pesa | загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Госдепартамент США международные телеграммы Народная Карта Яндекса | |
| э | e | эхо — ekho поэт — poet | ГОСТ 7.79-2000 (упрощ.) загранпаспорт водительское удостоверение банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США международные телеграммы |
| eh | эхо — ehkho поэт — poeht |
| |
| e` (e с грависом) | эхо — e`ho поэт — poe`t | ГОСТ 7.79-2000 | |
| ю | yu | юг — yug каюта — kayuta | ГОСТ 7.79-2000 банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США |
| iu | юг — iug каюта — kaiuta | загранпаспорт водительское удостоверение международные телеграммы | |
| ju | юг — jug каюта — kajuta | ||
| я | ya | як — yak поляна — polyana | ГОСТ 7.79-2000 банковская карта Яндекс.Денег Народная Карта Яндекса Госдепартамент США |
| ia | як — iak поляна — poliana | загранпаспорт водительское удостоверение международные телеграммы | |
| ja | як — jak поляна — poljana | ||
CONGRATULATIONS — Перевод на русский
Congratulations on your engagement. I hope you will make each other extremely happy.
Поздравляем с помолвкой. Надеемся вы сможете сделать друг друга очень счастливыми.Congratulations on your exam results. Wishing you all the best for your future career.
Поздравляем со сдачей выпускных экзаменов. Удачи тебе в твоей будующей карьере!Congratulations on your engagement. Have you decided upon big day yet?
Поздравляем с помолвкой. Вы уже решили, когда состоится ваш праздник?Congratulations to the bride and groom on their happy union.
Поздравления жениху и невесте. Да будет крепок ваш союз!I said, «Congratulations.»
Я ему: „С Новым Годом”. Он отвечает: „Спасибо. У нас родился ребенок”. Я говорю: „Поздравляю”.Congratulations on your Porcelain Wedding Anniversary!
Поздравляем с фарфоровой свадьбой!Congratulations on your Silver Wedding Anniversary!
Поздравляем с серебряной свадьбой!Congratulations on your Coral Wedding Anniversary!
Поздравляем с коралловой свадьбой!Congratulations on your Pearl Wedding Anniversary!
Поздравляем с жемчужной свадьбой!Congratulations on passing your driving test!
Поздравляю со сдачей на права!Congratulations on your graduation!
Поздравляем с окончанием университета!Congratulations on getting the job!
Поздравляем с приемом на работу!Congratulations on saying your «I do’s»!
Поздравляю с днем свадьбыCongratulations on your new arrival!
Поздравляем с прибавлением!congratulations on your wedding
поздравляем с днем свадьбыДекларация независимости: транскрипция
Примечание. Следующий текст является транскрипцией каменной гравюры Декларации независимости на пергаменте (документ, выставленный в Ротонде в Национальном архивном музее). Орфография и пунктуация соответствуют оригиналу.
Конгресс, 4 июля 1776 г.
Единогласная Декларация тринадцати Соединенных Штатов Америки, Когда в ходе человеческих событий возникает необходимость для одного народа распустить политические банды, которые связывали их с другим, и взять на себя власть земли отдельное и равное положение, на которое их наделяют Законы Природы и Бога Природы, достойное уважение к мнениям человечества требует, чтобы они объявили причины, побуждающие их к разделению.
Мы считаем самоочевидными эти истины, что все люди созданы равными, что они наделены своим Создателем определенными неотъемлемыми правами, среди которых есть Жизнь, Свобода и стремление к счастью. Правительства устанавливаются среди людей, получающие свои справедливые полномочия от согласия управляемых, — что всякий раз, когда какая-либо форма правления становится разрушительной для этих целей, народ имеет право изменить или отменить ее, а также установить новую форму правления. Правительство, закладывая основу на таких принципах и организуя свои полномочия в такой форме, которая, по их мнению, с наибольшей вероятностью повлияет на их безопасность и счастье.В самом деле, благоразумие диктует, что давно сложившиеся правительства не должны меняться по легким и преходящим причинам; и соответственно весь опыт показал, что человечество более склонно страдать, хотя зло терпимо, чем исправлять себя, уничтожая формы, к которым они привыкли. Но когда длинная череда злоупотреблений и узурпаций, преследующих неизменно одну и ту же Цель, выявляет замысел подчинить их абсолютному деспотизму, их право, их долг — свергнуть такое правительство и предоставить новую гвардию для их будущей безопасности. .- Таково терпение этих Колоний; и такова теперь необходимость, которая вынуждает их изменить свои прежние системы правления. История нынешнего короля Великобритании — это история неоднократных травм и узурпаций, и все они имеют прямой целью установление абсолютной тирании над этими государствами. Чтобы доказать это, давайте представим факты откровенному миру.
Он отказался принять законы, самые полезные и необходимые для общественного блага.
Он запретил своим губернаторам принимать законы немедленной и неотложной важности, если их действие не приостановлено до получения его согласия; и когда его отстранили, он совершенно не позаботился о них.
Он отказался принять другие законы для размещения больших групп людей, если только эти люди не откажутся от права представительства в Законодательном собрании, права, бесценного для них и грозного только для тиранов.
Он созвал законодательные органы в необычных, неудобных и удаленных от хранилища публичных архивов местах с единственной целью утомить их и привести их в соответствие с его мерами.
Он неоднократно распускал представительские палаты за мужественное сопротивление его посягательствам на права народа.
После таких роспусков он долгое время отказывался от избрания других; посредством чего Законодательная власть, неспособная к уничтожению, вернулась к народу для осуществления своей деятельности; Тем временем государство остается уязвимым для всех опасностей вторжения извне и внутренних конвульсий.
Он пытался предотвратить заселение этих штатов; с этой целью противодействие законам о натурализации иностранцев; отказ пропускать других, чтобы поощрить их миграцию сюда, и повышение условий нового присвоения земель.
Он препятствовал отправлению правосудия, отказавшись принять законы об установлении судебной власти.
Он поставил судей в зависимость только от своей воли в отношении срока пребывания в должности, а также размера и выплаты жалованья.
Он построил множество Новых Офисов и послал сюда стаи офицеров, чтобы преследовать наш народ и поедать их имущество.
Он сохранил среди нас в мирное время Постоянные армии без согласия наших законодательных органов.
Он пытался сделать Военную независимость и превосходство над Гражданской властью.
Он объединился с другими, чтобы подчинить нас юрисдикции, чуждой нашей конституции и не признанной нашими законами; дает свое согласие на их акты предполагаемого законодательства:
Для расквартирования крупных отрядов вооруженных сил среди нас:
За защиту их посредством инсценированного судебного разбирательства от наказания за любые убийства, которые они должны совершить против жителей этих штатов:
Для прекращения нашей торговли со всеми частями мира:
За обложение нас Налогами без нашего согласия:
За лишение нас во многих случаях преимуществ суда присяжных:
Для перевозки нас за Море для судебного преследования за предполагаемые правонарушения
За отмену свободной системы английских законов в соседней провинции, установление в ней произвольного правительства и расширение его границ, чтобы сразу сделать его примером и подходящим инструментом для введения того же абсолютного правила в этих колониях:
За отмену наших уставов, отмену наших наиболее ценных законов и коренное изменение форм наших правительств:
За приостановку действия наших собственных законодательных собраний и провозглашение себя наделенным властью издавать законы для нас во всех случаях.
Он отрекся от правительства, объявив нас лишенными своей защиты и развязав против нас войну.
Он разграбил наши моря, опустошил наши побережья, сжег наши города и уничтожил жизни наших людей.
Он в это время перевозит большие армии иностранных наемников, чтобы завершить дела смерти, опустошения и тирании, уже начатые при обстоятельствах Жестокости и вероломства, которые едва ли имели параллели в самые варварские века и совершенно недостойны главы цивилизованной нации.
Он принуждал наших соотечественников, взятых в плен в открытом море, нести оружие против своей страны, становиться палачами своих друзей и братьев или падать от их рук.
Он вызвал среди нас внутренние восстания и попытался натравить на жителей наших границ безжалостных индейских дикарей, чьи известные правила ведения войны — явное уничтожение для всех возрастов, полов и условий жизни.
На каждой стадии этих притеснений мы подавали прошения о возмещении ущерба в самых скромных выражениях: на наши неоднократные прошения были даны ответы только в виде повторных травм.Принц, чей характер, таким образом, отмечен каждым поступком, который может определять Тирана, непригоден для того, чтобы быть правителем свободного народа.
Мы не упускали недостатка внимания и к нашим британским братьям. Мы предупреждали их время от времени о попытках их законодательных органов распространить на нас неоправданную юрисдикцию. Мы напомнили им об обстоятельствах нашей эмиграции и поселения здесь. Мы апеллировали к их исконной справедливости и великодушию, и мы заклинали их узами наших общих родственников, чтобы они отвергли эти узурпации, которые неизбежно прервали бы наши связи и переписку.Они тоже были глухи к голосу справедливости и кровного родства. Поэтому мы должны согласиться с необходимостью, которая осуждает наше разделение, и удерживать их, как мы держим остальное человечество, врагов на войне, друзей мира.
Таким образом, мы, Представители Соединенных Штатов Америки, в Генеральном Конгрессе, собравшись, взывая к Верховному Судье мира о справедливости наших намерений, действуем от имени и властью добрых людей этих Колонии, торжественно публикуют и заявляют, что эти Соединенные Колонии являются и по праву должны быть свободными и независимыми государствами; что они освобождены от всякой лояльности британской короне и что всякая политическая связь между ними и государством Великобритания должна быть полностью прекращена; и что как свободные и независимые государства они имеют полную власть вести войну, заключать мир, заключать союзы, устанавливать торговлю и совершать все другие действия и действия, которые независимые государства могут делать по праву.И для поддержки этой Декларации, твердо полагаясь на защиту Божественного Провидения, мы взаимно обещаем друг другу нашу жизнь, наше счастье и нашу священную честь.
Вернуться на главную страницу декларации
определение транскрипции The Free Dictionary
Прежде всего он тщательно уничтожил полученное сообщение и его расшифровку и наблюдал, как фрагменты бумаги сгорают в пепел. Это не просто сухая расшифровка вопросов и ответов, потому что Регистратор часто перемежает свою историю со своими личными данными. Комментарии.9 августа 2019 г .— Американская технологическая компания Cisco (NASDAQ: CSCO) планирует приобрести в Калифорнии, США, поставщика транскрипции собраний, поставщика голосового поиска Voicea, чтобы помочь командам проводить более продуктивные и действенные встречи, превращая разговоры в действия, сообщила компания. Транскрипция — это преобразование устного слова в письменную форму, и в последние годы услуги транскрипции становятся все более точными, и недавние результаты показывают, что услуги транскрипции, управляемые человеком, теперь могут достигать уровня точности почти 100%.Раньше услугами транскрипции в основном пользовались исключительно журналисты и медицинские работники. Транскрипция, основанная на жизни бывшего сотрудника секретной службы во время Второй мировой войны, не является исключением. Гринвич, Коннектикут, 12 сентября 2018 г. — (PR.com) — Базирующаяся в Нью-Йорке служба общей транскрипции TranscriptionWing [TM] теперь является одним из утвержденных поставщиков, предлагающих решения для очистки транскрипции клиентам Sonix, полностью автоматизированной службы транскрипции. Ожидается, что рынок медицинской транскрипции будет расти в среднем в 6 раз.В отчете говорится, что в период с 2018 по 2022 год — 36%. Чтобы понять процесс развития клеток крови, исследователи изучили семь факторов транскрипции, которые, как известно, играют важную роль при раке крови, используя новую мощную технологию, называемую транскриптомикой отдельных клеток. предоставление высококачественной медицинской транскрипции для больниц, клиник, хирургических центров, больших и малых специализированных офисов с 1984 года. CoreDial, LLC, поставщик платформы SaaS, обеспечивающий канальную доставку облачных коммуникаций, добавила транскрипцию голоса в текст на своей платформе SwitchConnex — сказали в компании.Tat ВИЧ-1 и AFF4 хозяина рекрутируют два фактора элонгации транскрипции в бифункциональный комплекс для скоординированной активации транскрипции ВИЧ-1
. 2010 14 мая; 38 (3): 428-38. DOI: 10.1016 / j.molcel.2010.04.013.Принадлежности Расширять
Принадлежность
- 1 Кафедра молекулярной и клеточной биологии, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, Калифорния 94720, США.
Элемент в буфере обмена
Nanhai He et al. Mol Cell. .
Бесплатная статья PMC Показать детали Показать вариантыПоказать варианты
Формат АннотацияPubMedPMID
.2010 14 мая; 38 (3): 428-38. DOI: 10.1016 / j.molcel.2010.04.013.Принадлежность
- 1 Кафедра молекулярной и клеточной биологии, Калифорнийский университет, Беркли, Беркли, Калифорния 94720, США.
Элемент в буфере обмена
Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplayПоказать варианты
Формат АннотацияPubMedPMID
Абстрактный
Привлечение киназы P-TEFb с помощью Tat ВИЧ-1 на вирусный промотор запускает фосфорилирование и ускользание РНК-полимеразы II от остановки, проксимальной к промотору.Однако неясно, привлекает ли Tat дополнительные факторы хозяина, которые дополнительно стимулируют транскрипцию ВИЧ-1. Используя схему последовательной аффинной очистки, мы идентифицировали факторы / коактиваторы транскрипции человека AFF4, ENL, AF9 и фактор элонгации ELL2 как компоненты комплекса Tat-P-TEFb. Благодаря мостиковым функциям Tat и AFF4, P-TEFb и ELL2 объединяются с образованием бифункционального элонгационного комплекса, который в значительной степени активирует транскрипцию ВИЧ-1. Без Tat AFF4 может опосредовать взаимодействие ELL2-P-TEFb, хотя и неэффективно.Tat преодолевает это ограничение, привнося больше ELL2 в P-TEFb и стабилизируя ELL2 в процессе, который требует активного P-TEFb. Способность Tat давать возможность двум различным классам факторов элонгации взаимодействовать и координировать свои действия на одном и том же ферменте полимеразы, объясняет, почему Tat является таким мощным активатором транскрипции ВИЧ-1.
Авторские права (c) 2010 Elsevier Inc.Все права защищены.
Цифры
Рисунок 1. P-TEFb существует в двух мультисубъединицах…
Рисунок 1. P-TEFb существует в двух мультисубъединичных комплексах, содержащих ELL2 / AFF4 / Tat / P-TEFb и ELL2 / AFF4 / P-TEFb, соответственно
Рисунок 1.P-TEFb существует в двух мультисубъединичных комплексах, содержащих ELL2 / AFF4 / Tat / P-TEFb и ELL2 / AFF4 / P-TEFb соответственно(A) CDK9-F, Tat-HA и связанные с ними факторы (дорожка 1) были выделены путем последовательной иммунопреципитации (анти-Flag, а затем анти-HA) из NE клеток TTAC-8 после индукции экспрессии Tat-HA. . Иммунопреципитаты (IP) анализировали на окрашенном серебром геле SDS, их идентичность указана слева. NE, полученный из клеток TTAC-8 до индукции Tat-HA, использовали в параллельной процедуре для контроля (дорожка 2).MW, молекулярная масса. (B) αFlag и αHA IP, проанализированные в (A), исследовали вестерн-блоттингом на указанные белки. (C) Последовательные IP αFlag и αHA, полученные из NE клеток HEK293, экспрессирующих указанные белки, анализировали вестерн-блоттингом, как в (B). (D) IP, полученные с указанными антителами, исследовали, как в (B). (E) IP-адреса αFlag, полученные из NE клеток, экспрессирующих ELL2-F, анализировали, как в (B). (F) Исходные клетки HEK293 и линии клеток на основе HEK293, экспрессирующие указанные белки, подвергали иммунопреципитации против Flag.IP анализировали вестерн-блоттингом на наличие указанных белков.
Рисунок 2. Tat увеличивает уровни…
Рис. 2. Tat увеличивает уровни ELL2 и ELL2 / P-TEFb-содержащего комплекса и синергетически с…
Фигура 2.Tat увеличивает уровни ELL2 и комплекса, содержащего ELL2 / P-TEFb, и действует синергично с ELL2, но не с ELL1, чтобы активировать TAR-зависимую транскрипцию ВИЧ-1(A) Люциферазную активность измеряли в экстрактах клеток, котрансфицированных указанными экспрессирующими shELL2 конструкциями, репортерным геном LTR-люциферазы ВИЧ-1 и вектором, экспрессирующим Tat-HA или ничего. Активность в клетках, экспрессирующих shELL2 # 10, но не Tat, была установлена на 1. Столбики ошибок представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. (B) Вестерн-анализ уровней ELL2-F и α-тубулина в клетках, трансфицированных указанными конструкциями, экспрессирующими shELL2.(C) Люциферазную активность измеряли, как в (A), в клетках, трансфицированных репортером LTR-люциферазы ВИЧ-1 WT или мутантной конструкцией ΔTAR, вместе с указанными плазмидами, экспрессирующими ELL2-F (0,5 мкг / лунку) и / или Tat -HA (0,01 мкг / лунку). (D) Люциферазную активность измеряли, как в (A), в клетках, трансфицированных репортером LTR-люциферазы ВИЧ-1 и указанными плазмидами, экспрессирующими ELL1-F, ELL2-F и / или Tat-HA. (E) Вестерн-анализ указанных белков в NE клеток, котрансфицированных указанными конструкциями кДНК или пустым вектором (vec.или «-»). Tat-HA трансфицировали двукратно. (F) ELL1-F, ELL2-F и связанные с ними CDK9 были выделены анти-Flag IP из NE, как проанализировано в (E), и исследовано вестерн-блоттингом.
Рисунок 3. Эктопически выраженный AFF4 действует как…
Рисунок 3.Эктопически экспрессируемый AFF4 действует подобно Tat, синергизируя с ELL2, чтобы стимулировать транскрипцию…
Рисунок 3. Эктопически экспрессируемый AFF4 действует подобно Tat, синергизируя с ELL2, чтобы стимулировать удлинение транскрипции за счет стимулирования накопления ELL2 и ассоциации с P-TEFb.(A) Люциферазную активность измеряли в экстрактах клеток, трансфицированных указанными конструкциями промотор-люцифераза вместе с плазмидами, экспрессирующими ELL2-F или / и F-AFF4, как указано.Для каждой конструкции промотора уровень активности, обнаруженный в отсутствие ELL2-F и F-AFF4, был установлен на 1. Столбики ошибок представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. (B и C) Люциферазную активность измеряли и анализировали, как в (A), в клетках, трансфицированных указанным репортером и конструкциями кДНК. (D и E) NE клеток, трансфицированных указанными конструкциями кДНК (верхняя панель), и иммунопреципитаты против НА (IP), полученные из NE (нижняя панель), анализировали вестерн-блоттингом (WB) на указанные белки.(F) Анализ люциферазного репортера выполняли, как в (A), в клетках, трансфицированных указанным репортером и конструкциями кДНК. (G) Экстракты из тех же клеток, которые проанализированы в (F), исследовали вестерн-блоттингом на указанные белки. (H) Были выполнены реакции транскрипции, содержащие NE, истощенный по CDK9, матрицу HIV-1 LTR-G400 и указанные очищенные белки. Указана 400 нт РНК, транскрибируемая из кассеты без G, расположенной на расстоянии ~ 1 т.п.н. ниже промотора ВИЧ-1. (I) мРНК, выделенные из клеток, как проанализировано в (A), подвергали анализу RT-PCR с праймерами, которые амплифицируют две указанные области.RT, обратная транскриптаза.
Рис. 4. AFF4 связывает взаимодействие ELL2-P-TEFb…
Рис. 4. AFF4 связывает взаимодействие ELL2-P-TEFb и требуется для стабильного накопления ELL2
Рисунок 4.AFF4 перекрывает взаимодействие ELL2-P-TEFb и необходим для стабильного накопления ELL2(A) Люциферазную активность измеряли в клетках, трансфицированных репортерным геном LTR-люциферазы ВИЧ-1, и конструкциях, экспрессирующих shAFF4 и / или Tat-HA. Уровень активности, обнаруженный в отсутствие shAFF4 и Tat-HA, был установлен на 1. Столбики ошибок представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение. (B) NE (левая панель) клеток HEK293, несущих либо пустой вектор (-), либо стабильно экспрессирующие shAFF4 и IP (правая панель), полученные из NE с указанными антителами, исследовали вестерн-блоттингом на наличие указанных белков.(C) NE и IP anti-Flag, полученные из клеток, трансфицированных пустым вектором (-), или конструкцией, экспрессирующей либо полноразмерный (FL), либо усеченный (Δ1-300) F-AFF4, анализировали вестерн-блоттингом на указанные белки. (D) Указанные белки инкубировали с иммобилизованным CycT1-HA / CDK9 in vitro, и связанные белки элюировали и анализировали вестерн-блоттингом (левая и средняя панели). Десять процентов введенных белков FL и Δ1-300 F-AFF4 исследовали с помощью вестерн-блоттинга против Flag (правая панель).
Рисунок 5. Tat увеличивает количество…
Рисунок 5. Tat увеличивает количество ELL2, связанного с P-TEFb, что приводит к улучшенному…
Рисунок 5.Tat увеличивает количество ELL2, связанного с P-TEFb, что приводит к усиленной ассоциации ELL2 / AFF4 / P-TEFb-содержащего комплекса с матрицей хроматина ВИЧ-1(A) NE из клеток HEK293, инфицированных ретровирусами, экспрессирующими (+) или не (-) Tat-HA, подвергали вестерн-блоттингу с указанными антителами (вверху справа) и иммунопреципитации с помощью анти-CDK9 (вверху слева), анти- ELL2 (внизу слева), антитела против ELL1 (внизу справа) или неспецифический кроличий IgG.IP анализировали вестерн-блоттингом на наличие указанных белков. (B) Anti-Flag IP, полученный из клеток, стабильно экспрессирующих CDK9-F и несущих либо пустой вектор (-), либо плазмиду, экспрессирующую shELL2 # 8, анализировали вестерн-блоттингом на указанные белки. (C) Иммунопреципитация хроматина (ChIP) антителами против Flag, против CDK9 и против AFF4 выполнялась в клетках, содержащих интегрированный репортерный ген LTR-люциферазы ВИЧ-1 и стабильно экспрессирующих ELL2-F. Три области, соответствующие промотору, внутренней части и 3′-UTR интегрированного репортерного гена (нижняя панель), амплифицировали с помощью ПЦР из осажденной и очищенной ДНК.Также были показаны усиленные сигналы от 5% и 10% входящего хроматина. (D) Анализ ChIP выполняли, как в (C), в локусе GAPDH с указанными антителами. Область, близкую к 3′-концу гена, амплифицировали с помощью ПЦР из осажденной ДНК.
Рисунок 6. Активный P-TEFb требуется для…
Рисунок 6.Активный P-TEFb необходим для накопления ELL2 и взаимодействия с P-TEFb
Рисунок 6. Активный P-TEFb необходим для накопления ELL2 и взаимодействия с P-TEFb.(A) NE из клеток HEK293, трансфицированных указанными конструкциями кДНК и обработанных указанными лекарственными средствами, анализировали вестерн-блоттингом на уровни ELL2-F и α-тубулина. (B и C) NE (левая панель в B и верхняя панель в C) и анти-Flag IP (правая панель в B и нижняя панель в C), полученные из NE клеток, трансфицированных указанными конструкциями кДНК, были проанализированы вестерн-блоттингом на наличие наличие указанных белков.(D) Клетки F1C2, стабильно экспрессирующие CDK9-F, либо не обрабатывали, либо обрабатывали указанными лекарственными средствами. ФВП, флавопиридол. NE (левая панель) и анти-Flag IP (правая панель) анализировали вестерн-блоттингом.
Рисунок 7. ELL2 — короткоживущий белок…
Рисунок 7.ELL2 — это короткоживущий белок, стабильность которого может быть значительно повышена с помощью Tat…
Рисунок 7. ELL2 — это короткоживущий белок, стабильность которого может быть значительно увеличена Tat или AFF4.(A и B) Клетки HEK293, содержащие вектор, экспрессирующий ELL2-F (A) или ничего (B), обрабатывали MG132 в течение указанных периодов времени. ELL2-F и его эндогенный аналог были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга против Flag (A) и против ELL2 (B), при этом α-тубулин служил в качестве контроля нагрузки.(C и D) Клетки, продуцирующие ELL2-F, трансфицированные либо пустым вектором (-), либо конструкцией, экспрессирующей Tat-HA (B) или F-AFF4 (C), пульсировали метионином, меченным 35 S, и L-цистеин, а затем гоняются в течение указанных периодов времени. Затем ELL2-F подвергали иммунопреципитации и анализировали с помощью SDS-PAGE с последующей авторадиографией. (E) Аффинность ELL2-F, очищенная из клеток, коэкспрессирующих Tat-HA, инкубировали с фосфатазой кишечника теленка (CIP) и анализировали вестерн-блоттингом против Flag.
Все фигурки (7)
Похожие статьи
- ВИЧ-1 Tat собирает многофункциональный комплекс элонгации транскрипции и стабильно связывается с 7SK snRNP.
Собхиан Б., Лагетт Н., Ятим А., Накамура М., Леви И., Кирнан Р., Бенкиран М.Собхиан Б. и др. Mol Cell. 2010 14 мая; 38 (3): 439-51. DOI: 10.1016 / j.molcel.2010.04.012. Mol Cell. 2010 г. PMID: 20471949 Бесплатная статья PMC.
- Комплекс суперэлонгации способствует ранней транскрипции ВИЧ, и его функция модулируется P-TEFb.
Кузьмина А, Краснопольский С, Таубе Р. Кузьмина А, и др. Транскрипция. 2017 27 мая; 8 (3): 133-149. DOI: 10.1080 / 21541264.2017.1295831. Epub 2017 17 февраля. Транскрипция. 2017 г. PMID: 28340332 Бесплатная статья PMC.
- Каркас AFF4 связывает человеческий P-TEFb рядом с ВИЧ Tat.
Шульце-Гахмен Ю., Аптон Х., Бирнберг А., Бао К., Чжоу С., Кроган Нью-Джерси, Чжоу К., Альбер Т. Schulze-Gahmen U, et al. Элиф. 5 марта 2013 г .; 2: e00327. DOI: 10.7554 / eLife.00327. Элиф. 2013. PMID: 23471103 Бесплатная статья PMC.
- Новые сведения о контроле транскрипции ВИЧ-1: когда Tat встречается с 7SK snRNP и комплексом суперэлонгации (SEC).
Хэ Н, Чжоу К. He N, et al. J. Neuroimmune Pharmacol. 2011 июн; 6 (2): 260-8. DOI: 10.1007 / s11481-011-9267-6. Epub 2011 1 марта. J Neuroimmune Pharmacol. 2011 г. PMID: 21360054 Бесплатная статья PMC. Рассмотрение.
- Взаимодействие HIV Tat / P-TEFb: потенциальная цель для новых методов лечения ВИЧ.
Асамицу К., Фудзинага К., Окамото Т. Асамицу К. и др. Молекулы. 2018 17 апреля; 23 (4): 933. DOI: 10,3390 / молекулы23040933. Молекулы. 2018. PMID: 29673219 Бесплатная статья PMC. Рассмотрение.
Процитировано
225 статьи- Отслеживание эволюции регуляции генов человека и ее связи с изменениями в окружающей среде.
Колбран Л.Л., Джонсон М.Р., Мэтисон И., Капра Дж. Колбран Л.Л. и др. Genome Biol Evol. 2021 5 ноября; 13 (11): evab237. DOI: 10,1093 / GBE / evab237. Genome Biol Evol. 2021 г. PMID: 34718543 Бесплатная статья PMC.
- Таргетинг и понимание задержки ВИЧ: система CRISPR против провируса.
Магро Дж., Калистри А., Паролин К. Magro G и др.Возбудители. 2021, 28 сентября; 10 (10): 1257. DOI: 10.3390 / pathogens10101257. Возбудители. 2021 г. PMID: 34684206 Бесплатная статья PMC. Рассмотрение.
- Нейротоксичность ЦНС, связанная с ВИЧ-белками, их посредники и альтернативные методы лечения.
Саро А., Гао З., Камбей П.А., Пиелнаа П., Марселлин Д.Ф.Х., Луо А., Чжэн Р., Хуанг З., Ляо Л., Чжао М., Суо Л., Лу С, Ли М, Цай Д., Чен Д., Ю Х, Хуанг Дж. .Саро А. и др. Cell Mol Neurobiol. 2021 25 сентября. Doi: 10.1007 / s10571-021-01151-x. Интернет впереди печати. Cell Mol Neurobiol. 2021 г. PMID: 34562223 Рассмотрение.
- Биогенез P-TEFb в CD4 + Т-клетках для изменения латентности ВИЧ опосредуется независимыми от протеинкиназы C (PKC) сигнальными путями.
Мбонье У, Лесков К., Шукла М, Валадхан С., Карн Дж. Мбонье У и др.PLoS Pathog. 2021 16 сентября; 17 (9): e1009581. DOI: 10.1371 / journal.ppat.1009581. eCollection 2021 сен. PLoS Pathog. 2021 г. PMID: 34529720 Бесплатная статья PMC.
- Индукция аутофагии для излечения от вируса иммунодефицита человека 1 типа.
Кэмпбелл Г.Р., Спектор С.А. Кэмпбелл Г.Р. и др. Ячейки. 2021 16 июля; 10 (7): 1798. DOI: 10,3390 / ячейки10071798. Ячейки.2021 г. PMID: 34359967 Бесплатная статья PMC. Рассмотрение.
Типы публикаций
- Научно-исследовательская поддержка, N.I.H., заочная форма
Условия MeSH
- Циклинзависимая киназа 9 / метаболизм
- Взаимодействие хозяин-патоген
- Ядерные белки / метаболизм
- Положительный фактор транскрипционной элонгации B / метаболизм
- Промоутерские регионы, генетические
- Комплекс протеасомной эндопептидазы / метаболизм
- РНК, вирус / биосинтез *
- Репрессорные белки / генетика
- Репрессорные белки / метаболизм *
- Активация транскрипции *
- Факторы удлинения транскрипции / метаболизм
- tat Gene Products, Вирус иммунодефицита человека / генетика
- Продукты гена tat, вирус иммунодефицита человека / метаболизм *
Вещества
- Факторы удлинения транскрипции
- Продукты гена tat, вирус иммунодефицита человека
- Положительный фактор удлинения транскрипции B
- Циклинзависимая киназа 9
- Комплекс протеасомной эндопептидазы
LinkOut — дополнительные ресурсы
Полнотекстовые источники
Другие источники литературы
Медицинские
Разное
цитировать
КопироватьФормат: AMA APA ГНД NLM
Эукариотические РНК-полимеразы и общие факторы транскрипции — Клетка
Хотя транскрипция происходит по одним и тем же фундаментальным механизмам во всех клетках, в эукариотических клетках она значительно сложнее, чем в бактериях.Это отражается в двух отчетливых различиях между прокариотической и эукариотической системами. Во-первых, в то время как все гены транскрибируются одной РНК-полимеразой в бактериях, эукариотические клетки содержат множество различных РНК-полимераз, которые транскрибируют разные классы генов. Во-вторых, вместо прямого связывания с промоторными последовательностями эукариотические РНК-полимеразы должны взаимодействовать с множеством дополнительных белков, чтобы специфически инициировать транскрипцию. Эта повышенная сложность эукариотической транскрипции, по-видимому, способствует сложной регуляции экспрессии генов, необходимой для управления деятельностью многих различных типов клеток многоклеточных организмов.
Эукариотические РНК-полимеразы
Эукариотические клетки содержат три различных ядерных РНК-полимеразы, которые транскрибируют разные классы генов (). Гены, кодирующие белок, транскрибируются РНК-полимеразой II с образованием мРНК; рибосомные РНК (рРНК) и транспортные РНК (тРНК) транскрибируются РНК-полимеразами I и III. РНК-полимераза I специально предназначена для транскрипции трех крупнейших видов рРНК, которые обозначаются 28S, 18S и 5,8S в соответствии с их скоростью оседания во время скоростного центрифугирования.РНК-полимераза III транскрибирует гены тРНК и мельчайших видов рибосомной РНК (5S рРНК). Некоторые из малых РНК, участвующих в сплайсинге и транспорте белков (мяРНК и скРНК), также транскрибируются РНК-полимеразой III, тогда как другие являются транскриптами полимеразы II. Кроме того, отдельные РНК-полимеразы (похожие на бактериальные РНК-полимеразы) обнаруживаются в хлоропластах и митохондриях, где они специфически транскрибируют ДНК этих органелл.
Таблица 6.1
Классы генов, транскрибируемых эукариотическими РНК-полимеразами.
Все три ядерные РНК-полимеразы представляют собой сложные ферменты, каждый из которых состоит из 8–14 различных субъединиц. Хотя они распознают разные промоторы и транскрибируют разные классы генов, у них есть несколько общих черт. Две самые большие субъединицы всех трех эукариотических РНК-полимераз связаны с β- и β′-субъединицами одного E . coli РНК-полимераза. Кроме того, пять субъединиц эукариотических РНК-полимераз являются общими для всех трех различных ферментов.В соответствии с этим структурным сходством разные эукариотические полимеразы обладают несколькими функциональными свойствами, включая необходимость взаимодействия с другими белками для надлежащего инициирования транскрипции.
Общие факторы транскрипции и инициация транскрипции РНК-полимеразой II
Поскольку РНК-полимераза II отвечает за синтез мРНК из генов, кодирующих белок, она была в центре внимания большинства исследований транскрипции у эукариот. Ранние попытки изучения этого фермента показали, что его активность отличается от активности прокариотической РНК-полимеразы.Точная транскрипция бактериальных генов, которая может быть достигнута in vitro простым добавлением очищенной РНК-полимеразы к ДНК, содержащей промотор, невозможна в эукариотических системах. Основа этого различия была выяснена в 1979 году, когда Роберт Родер и его коллеги обнаружили, что РНК-полимераза II способна инициировать транскрипцию, только если в реакцию добавляются дополнительные белки. Таким образом, транскрипция в эукариотической системе, по-видимому, требует различных факторов инициации, которые (в отличие от бактериальных σ-факторов) не связаны с полимеразой.
Биохимическое фракционирование ядерных экстрактов привело к идентификации определенных белков (называемых факторами транскрипции), которые необходимы РНК-полимеразе II для инициации транскрипции. Действительно, идентификация и характеристика этих факторов представляет собой основную часть текущих усилий по пониманию транскрипции в эукариотических клетках. Были определены два основных типа факторов транскрипции. Общие факторы транскрипции участвуют в транскрипции со всех промоторов полимеразы II и, следовательно, составляют часть основного аппарата транскрипции.Дополнительные факторы транскрипции (обсуждаемые далее в этой главе) связываются с последовательностями ДНК, которые контролируют экспрессию отдельных генов и, таким образом, отвечают за регулирование экспрессии генов.
Пять общих факторов транскрипции необходимы для инициации транскрипции РНК-полимеразой II в восстановленных системах in vitro (). Промоторы многих генов, транскрибируемых полимеразой II, содержат последовательность, аналогичную TATAA, от 25 до 30 нуклеотидов перед сайтом начала транскрипции.Эта последовательность (называемая блоком ТАТА) напоминает элемент последовательности -10 бактериальных промоторов, и результаты введения мутаций в последовательности ТАТАА продемонстрировали их роль в инициации транскрипции. Первым шагом в формировании транскрипционного комплекса является связывание общего фактора транскрипции, называемого TFIID, с TATA-боксом ( TF указывает t транскрипцию f актер; II указывает полимеразу II ). TFIID сам по себе состоит из нескольких субъединиц, включая TATA-связывающий белок ( TBP ), который специфически связывается с консенсусной последовательностью TATAA, и 10-12 других полипептидов, называемых TBP-ассоциированными факторами ( TAF ).TBP затем связывает второй общий фактор транскрипции (TFIIB), образуя комплекс TBP-TFIIB на промоторе (). TFIIB, в свою очередь, служит мостиком для РНК-полимеразы, которая связывается с комплексом TBP-TFIIB в ассоциации с третьим фактором, TFIIF.
Рис. 6.12
Образование транскрипционного комплекса полимеразы II. Многие промоторы полимеразы II имеют ТАТА-бокс (консенсусная последовательность ТАТАА) на 25-30 нуклеотидов выше сайта начала транскрипции. Эта последовательность распознается фактором транскрипции TFIID, который (подробнее…)
Рисунок 6.13
Модель комплекса TBP-TFIIB, связанного с ДНК. ДНК показана в виде фигурки, состоящей из желтых и зеленых нитей, с местом инициации транскрипции, обозначенным +1. TBP состоит из двух повторов, окрашенных в голубой и темно-синий цвета. Повторы TFIIB (подробнее …)
После привлечения РНК-полимеразы II к промотору для инициации транскрипции требуется связывание двух дополнительных факторов (TFIIE и TFIIH). TFIIH является мультисубъединичным фактором, который, по-видимому, играет по крайней мере две важные роли.Во-первых, две субъединицы TFIIH представляют собой геликазы, которые могут раскручивать ДНК вокруг сайта инициации. (Эти субъединицы TFIIH также необходимы для эксцизионной репарации нуклеотидов, как обсуждается в главе 5.) Другой субъединицей TFIIH является протеинкиназа, которая фосфорилирует повторяющиеся последовательности, присутствующие в С-концевом домене самой большой субъединицы РНК-полимеразы II. Считается, что фосфорилирование этих последовательностей высвобождает полимеразу из ее ассоциации с инициирующим комплексом, позволяя ей двигаться вдоль матрицы по мере того, как она удлиняет растущую цепь РНК.
Помимо ТАТА-бокса, промоторы многих генов, транскрибируемых РНК-полимеразой II, содержат второй важный элемент последовательности (инициатор, или Inr, последовательность), который охватывает сайт начала транскрипции. Более того, некоторые промоторы РНК-полимеразы II содержат только элемент Inr без ТАТА-бокса. Для инициации на этих промоторах по-прежнему требуется TFIID (и TBP), хотя очевидно, что TBP не распознает эти промоторы путем связывания непосредственно с последовательностью TATA. Вместо этого другие субъединицы TFIID (TAF), по-видимому, связываются с последовательностями Inr.Это связывание привлекает TBP к промотору, и TFIIB, полимераза II и дополнительные факторы транскрипции затем собираются, как уже описано. Таким образом, TBP играет центральную роль в инициации транскрипции полимеразы II, даже на промоторах, у которых отсутствует ТАТА-бокс.
Несмотря на разработку in vitro систем и характеристику нескольких общих факторов транскрипции, многое еще предстоит узнать о механизме транскрипции полимеразы II в эукариотических клетках. Последовательный набор факторов транскрипции, описанный здесь, представляет собой минимальную систему, необходимую для транскрипции in vitro ; внутри ячейки могут потребоваться дополнительные факторы.Кроме того, РНК-полимераза II, по-видимому, способна связываться с некоторыми факторами транскрипции in vivo до сборки транскрипционного комплекса на ДНК. В частности, предварительно сформированные комплексы РНК-полимеразы II с TFIIB, TFIIE, TFIIF, TFIIH и другими белками, регулирующими транскрипцию, были обнаружены как в клетках дрожжей, так и в клетках млекопитающих. Эти большие комплексы (называемые холоферментами полимеразы II) могут быть задействованы в промоторе посредством прямого взаимодействия с TFIID (). Таким образом, относительный вклад ступенчатой сборки индивидуальных факторов в промоторы внутри клетки по сравнению с привлечением холофермента РНК-полимеразы II еще предстоит определить.
Рис. 6.14
Холофермент РНК-полимеразы II. Холофермент состоит из предварительно сформированного комплекса РНК-полимеразы II, общих факторов транскрипции TFIIB, TFIIE, TFIIF и TFIIH и нескольких других белков, активирующих транскрипцию. Этот комплекс может быть задействован (подробнее …)
Транскрипция с помощью РНК-полимераз I и III
Как обсуждалось ранее, различные РНК-полимеразы ответственны за транскрипцию генов, кодирующих рибосомные РНК и РНК-переносчики в эукариотических клетках.Однако все три РНК-полимеразы требуют дополнительных факторов транскрипции для связывания с соответствующими промоторными последовательностями. Более того, хотя три разных полимеразы в эукариотических клетках распознают разные типы промоторов, для инициации транскрипции всеми тремя ферментами, по-видимому, необходим общий фактор транскрипции — ТАТА-связывающий белок (ТВР).
РНК-полимераза I предназначена исключительно для транскрипции генов рибосомной РНК, которые присутствуют в тандемных повторах.Транскрипция этих генов дает большую пре-рРНК 45S, которая затем процессируется с образованием рРНК 28S, 18S и 5,8S (2). Промотор генов рибосомной РНК охватывает около 150 пар оснований непосредственно перед сайтом инициации транскрипции. Эти промоторные последовательности распознаются двумя факторами транскрипции, UBF (восходящий фактор связывания) и SL1 (фактор селективности 1), которые кооперативно связываются с промотором и затем рекрутируют полимеразу I для образования комплекса инициации (). Фактор транскрипции SL1 состоит из четырех белковых субъединиц, одной из которых, как ни удивительно, является TBP.Роль TBP была напрямую продемонстрирована открытием, что дрожжи, несущие мутации в TBP, дефектны не только для транскрипции полимеразой II, но также и для транскрипции полимераз I и III. Таким образом, TBP является общим фактором транскрипции, необходимым для всех трех классов эукариотических РНК-полимераз. Поскольку промотор для генов рибосомной РНК не содержит ТАТА-бокса, ТВР не связывается со специфическими последовательностями промотора. Вместо этого ассоциация TBP с генами рибосомной РНК опосредуется связыванием других белков в комплексе SL1 с промотором, ситуация аналогична ассоциации TBP с последовательностями Inr генов полимеразы II, в которых отсутствуют ТАТА-боксы.
Рисунок 6.15
Ген рибосомной РНК. Рибосомная ДНК (рДНК) транскрибируется с образованием большой молекулы РНК (45S пре-рРНК), которая затем расщепляется на 28S, 18S и 5,8S рРНК.
Рисунок 6.16
Инициирование транскрипции рДНК. Два фактора транскрипции, UBF и SL1, кооперативно связываются с промотором рДНК и рекрутируют РНК-полимеразу I с образованием комплекса инициации. Одна субъединица SL1 — это ТАТА-связывающий белок (ТВР).
Гены тРНК, 5S рРНК и некоторых малых РНК, участвующих в сплайсинге и транспорте белков, транскрибируются полимеразой III.Эти гены характеризуются промоторами, которые расположены внутри транскрибируемой последовательности, а не перед ней (). Наиболее изученными генами, транскрибируемыми полимеразой III, являются гены 5S рРНК Xenopus . TFIIIA (который является первым очищенным фактором транскрипции) инициирует сборку транскрипционного комплекса путем связывания со специфическими последовательностями ДНК в промоторе 5S рРНК. За этим связыванием следует последовательное связывание TFIIIC, TFIIIB и полимеразы.Промоторы генов тРНК отличаются от промотора 5S рРНК тем, что они не содержат последовательности ДНК, распознаваемой TFIIIA. Вместо этого TFIIIC связывается непосредственно с промотором генов тРНК, служа для рекрутирования TFIIIB и полимеразы для образования комплекса транскрипции. TFIIIB состоит из нескольких субъединиц, одной из которых (опять же) является TATA-связывающий белок, TBP. Таким образом, хотя три РНК-полимеразы эукариотических клеток распознают разные промоторы, TBP, по-видимому, является общим элементом, который связывает распознавание промотора с рекрутированием полимеразы в комплекс транскрипции.
Рис. 6.17
Транскрипция генов полимеразы III. Промоторы генов 5S рРНК и тРНК расположены ниже сайта инициации транскрипции. Транскрипция гена 5S рРНК инициируется связыванием TFIIIA с последующим связыванием TFIIIC, TFIIIB и (подробнее …)
Best Transcription Services 2020 | Обзоры Wirecutter
Наш выбор
Temi
Через несколько минут Теми вернула расшифровки стенограмм, которые было легче читать, чем то, что создавали другие службы ИИ, даже когда аудиофайл не был идеальным или когда слова было трудно понять.
Службы транскрипции на основе AI полезны для поиска определенного места или быстрого просмотра содержимого аудиозаписи. Они не дают результатов, которые достаточно идеальны, чтобы вы могли ожидать скопировать цитату, не возвращаясь и не проверяя фактическое содержание аудио. В наших тестах стенограммы Теми были самыми легкими для чтения среди вариантов на основе ИИ, с приемлемой грамматикой и точностью слов, даже когда наш звук содержал жаргон или фоновый шум. (Мы рекомендуем использовать компанию, в которой работают люди-транскрипционисты, если в ваших записях есть шум, неамериканский акцент, есть дефекты речи или другие проблемы.Расшифровка стенограммы доставляется за считанные минуты, а встроенный текстовый редактор позволяет легко очистить завершенную стенограмму — необходимость, поскольку даже лучшие службы на основе ИИ, такие как Temi, в лучшем случае правильно интерпретируют только около 75% слов. Поскольку Temi работает быстро и относительно недорого (25 центов за минуту звука), это отличный выбор для тех, кто платит за свои собственные транскрипции, не ожидает, что они будут безошибочными, и не против провести некоторую очистку. работают сами.
Также отлично
GoTranscript
Человеческие расшифровщики в GoTranscript вернули почти 100% точную транскрипцию за пару дней и не отказались от записей с сильным акцентом.
Если вам нужна максимально точная транскрипция, и вы (или ваша компания) готовы платить за это больше, GoTranscript — лучший сервис для использования. Это также отличный вариант, если у вас есть аудиозапись со сложными акцентами или если вам нужна транскрипция чего-либо на другом языке, кроме английского. Примерно в четыре раза дороже Теми, реальный человек расшифрует ваш звук и вернет почти идеальную транскрипцию в течение нескольких дней. Другие протестированные нами компании, использующие человеческие транскрипционисты, были почти такими же точными, но GoTranscript возвращал вакансии быстрее и был готов справиться даже с самыми сложными аудиофайлами с поддержкой многих акцентов и 48 языков.
Фонематическая и фонетическая транскрипция | Фонетика
Есть два способа расшифровки речи. Фонематическая транскрипция, также известная как «широкая» транскрипция, включает представление речи с использованием только уникального символа для каждой фонемы языка. Используя символы Митчелла и Делбриджа, мы могли бы фонематически транскрибировать следующие три слова:
| «рассыпанный» | / strun / |
| «десятый» | / tɛnθ / |
| «чистый» | / клин / |
Здесь вы можете видеть, что «разбросанный» имеет 5 звуков, а «десятый» и «чистый» — 4 звука, и каждый звук представлен уникально.Обратите внимание, что фонематическая транскрипция помещается между / скобками с косой чертой /. Когда мы транскрибируем фонемно, мы представляем не настоящие звуки, а абстрактные мысленные конструкции. Это категории звуков, которые говорящие понимают как «звуки своего языка». В случае австралийского английского языка фонематическая транскрипция требует использования 44 символов фонемы. Другой способ транскрибировать речь — использовать фонетическую транскрипцию, также иногда известную как «узкая» транскрипция. Это включает представление дополнительных сведений о контекстных вариациях произношения, встречающихся в нормальной речи.Опять же, используя символы Митчелла и Делбриджа, мы могли бы фонетически транскрибировать те же три слова следующим образом:
| «рассыпанный» | [стру: n] |
| «десятый» | [tʰɛ̃n̪θ] |
| «чистый» | [kl̥i: n] |
Здесь вы можете увидеть, что:
- «усыпанный» имеет долгую гласную, представленную диакритическим знаком двоеточия [:].
- «десятый» имеет начальную букву [tʰ], обозначенную надстрочным индексом [ʰ]; и гласный назальный, представлен диакритическим знаком тильды над гласным [ɛ̃], потому что он непосредственно предшествует носовому; и носовая часть фактически сочленяется в межзубном месте сочленения, представленном диакритическим знаком [n̪], потому что он непосредственно предшествует межзубному фрикативу.
- «чистый» имеет долгую гласную, представленную диакритическим знаком [:]; и безмолвный [l̥], представленный маленьким нижним диакритическим кружком, потому что нормальное голосовое качество [l] подавляется стремлением [k] перед ним.
Обратите внимание, что фонетическая транскрипция заключена в [квадратные скобки]. Когда мы транскрибируем фонетически, мы представляем не абстрактные мысленные конструкции, а, скорее, реальные звуки с точки зрения их акустических и артикуляционных свойств.Обратите внимание, что носители языка глухи к подобным контекстным вариациям в произношении. Например, из этих фонетических транскрипций вы можете видеть, что звуки «т» фонетически различаются — «т» в «разбросанном» без наддува, а «т» в «десятом» — с придыханием. Точно так же «n» в «разбросанном» означает альвеолярное, а «n» в «десятом» — межзубное. Носители английского языка слышат и [tʰ], и [t] как экземпляры фонемы / t /, и они слышат и [n̪], и [n] как экземпляры фонемы / n /.И фонематическая, и фонетическая транскрипция имеют свои цели. Цель фонематической транскрипции — записать «фонемы как ментальные категории», которые использует говорящий, а не фактические речевые варианты тех фонем, которые создаются в контексте определенного слова. Носитель английского языка усвоил правило, согласно которому «звуки, похожие на / t / всегда с придыханием, когда слово-начальное», они автоматически сделают / t / в «десятом» придыхании. Фонетическая транскрипция, с другой стороны, определяет более тонкие детали того, как на самом деле производятся звуки.Таким образом, человек, не говорящий по-английски, обученный IPA, может взглянуть на фонетическую транскрипцию вроде [tʰɛ̃n̪θ] и знать, как правильно ее произносить, не зная правил использования английских фонем. Итак, фонемы — это абстрактные ментальные категории в сознании людей, и эти / категории / реализуются как [реальные звуки] из уст людей. Разговорные варианты каждой фонемы известны как ее аллофоны. Теперь мы можем сказать что-то вроде: Фонема / t / имеет два аллофона [t] и [tʰ].
ТЕЛЕФОННАЯ РАСШИФРОВКА | Энциклопедия.com
ТЕЛЕФОННАЯ РАСШИФРОВКА. Письменное или печатное представление РЕЧИ с использованием фонетического алфавита. Принимая во внимание, что в стандартной орфографии одни и те же буквы могут использоваться для обозначения разных звуков ( y в sky и сироп ), и разные комбинации букв могут использоваться для обозначения одного и того же звука ( ee из соответствует и ea из мяса (), фонетический символ всегда представляет один и тот же звук, а звук всегда представлен одним и тем же символом.Речь может быть фонетически расшифрована с разной степенью детализации и точности. В общих чертах существует два вида транскрипции: (1) собственно фонетическая транскрипция, которая использует все ресурсы фонетического алфавита для обозначения мельчайших различий в звуке и помещает символы в квадратные скобки, [t]. Такие транскрипции используются, в частности, для представления использования отдельных носителей и неофициально известны как узкая транскрипция . (2) Фонематическая транскрипция, которая предоставляет символ для каждого PHONEME в тексте и помещает символы между наклонными точками, как в / t /.Такие транскрипции используются для представления идеализированного описания системы речевого сообщества. Это вид, используемый при произношении словарей, и неофициально называется широкая транскрипция .Современные фонетики обычно берут свои символы из МЕЖДУНАРОДНОГО ФОНЕТИЧЕСКОГО АЛФАВИТА, но используются и другие символы, особенно в Северной Америке. Все такие символы являются мнемоническими метками, которые игнорируют фонетические детали, например, когда начальные согласные tea , два и train фонемно записываются / t /, хотя все они фонетически немного отличаются.Во многих случаях к фонематическим символам добавляются ДИАКРИТИКИ, чтобы дать дополнительную информацию: например, верхний индекс h добавляется к / t / для обозначения стремления, / t h /.