Времена по составу разобрать: 404 Не найдено

Определение, фонетический (звуко-буквенный) разбор и разбор слова по составу

На данной странице представлено лексическое значение слова «время», а также сделан звуко-буквенный разбор и разбор слова по составу с транскрипцией и ударениями.

Оглавление:

1. Значение слова
2. Звуко-буквенный разбор
3. Разбор по составу

Значение слова

ВРЕМЯ, мени, мн. мена, мён, менам, ср.

1. Одна из форм (наряду с пространством) существования бесконечно развивающейся материи последовательная смена её явлений и состояний. Вне времени и пространства нет движения материи.

2. Продолжительность, длительность чего-н., измеряемая секундами, минутами, часами. Сколько времени (который час?).

3. Промежуток той или иной длительности, в к-рый совершается что-н., последовательная смена часов, дней, лет. Отрезок времени. Хорошо провести в. В. не ждёт

(надо торопиться). В. терпит (еще можно ждать). В. покажет (будет видно в будущем). В. работает на нас. Продолжительное в. На короткое в. Выиграть в.

4. Определённый момент, в который происходит что-н. Назначить в. заседания. В. обеда. В любое в. дня.

5. (мн. в одном знач. с ед.). Период, эпоха. Во время (времена) Петра I. Суровое время (суровые времена). С незапамятного времени (с незапамятных времён). Во все времена (всегда). На все времена (навсегда).

6. Пора дня, года. Вечернее в. В. детское (взрослым ещё рано ложиться спать; разг.). Дождливое в. Времена года (зима, весна, лето, осень).

7. в знач. сказ., с неопр. Подходящий, удобный срок, благоприятный момент. Не в. сидеть сложа руки. Самое в. обедать.

8. Период или момент, не занятый чем-н., свободный от чего-н.

Свободное в. Есть в. поговорить. Нет времени для прогулок.

9. В грамматике: категория глагола, специальными формами относящая действие в план настоящего, прошлого или будущего. Настоящее, прошедшее, будущее в. Причастие настоящего, прошедшего времени.

10. времён кого-чего, в знач. предлога с род. п. В период, во время существования кого-чего-н. (о ком-чёмн. бывшем в отдалённом прошлом). Писатели времён классицизма. Оружие времён гражданской войны.

• Во время чего, предлог с род. п. в то время, когда что-н. происходит. Шум во время лекции.

(В) первое время в начальный период чего-н., вначале. В первое время на работе уставал.

(В) последнее время незадолго до настоящего момента и сейчас. В последнее время получаю много писем.

Время от времени

иногда.

Всё время не переставая, постоянно.

Всему своё время всё должно делаться вовремя, своевременно.

В своё время 1) когда-то, в прошлом. В своё время хорошо играл в футбол; 2) когда нужно, своевременно. В своё время всё узнаешь.

В скором времени скоро, в ближайшем будущем.

В то время как (когда), союз 1) присоединяет предложение со знач. одновременности. В то время как она отдыхала, он приготовил обед; 2) то же, что тогда как (в 1 знач.). Бездельничает, в то время как завтра экзамен.

(И, а, но) в то же время, союз (и, а, но) одновременно, наряду с этим. Осторожен, (и, а, но) в то же время расчётлив.

До времени или до поры до времени пока, до какого-н. момента.

До сего времени до сих пор, до этого времени, момента.

Ко времени (разг.) к сроку, вовремя. Этот разговор не ко времени (несвоевременен).

На время на какой-н. срок, ненадолго.

На первое время на ближайшее будущее.

Одно время в течение нек-рого времени в прошлом. Одно время не ладилось с учёбой.

По временам то же, что иногда. По временам скучает.

Раньше времени то же, что преждевременно.

Со временем по прошествии нек-рого времени. Со временем остепенится.

Тем временем одновременно с этим, именно в это же время.

| уменьш. времечко, а, ср. (к 3, 4, 6, 7 и 8 знач.).

| прил. временной, ая, ое (к 1, 2 и 9 знач.).

Фонетический (звуко-буквенный) разбор

вре́мя

время — слово из 2 слогов: вре-мя. Ударение падает на 1-й слог.

Транскрипция слова: [вр’эм’а]

в — [в] — согласный, звонкий парный, твёрдый (парный)
р — [р’] — согласный, звонкий непарный, сонорный (всегда звонкий), мягкий (парный)
е — [э] — гласный, ударный
м — [м’] — согласный, звонкий непарный, сонорный (всегда звонкий), мягкий (парный)
я — [а] — гласный, безударный

В слове 5 букв и 5 звуков.

Цветовая схема: время

Разбор слова «время» по составу

время

Части слова «время»: врем/я
Состав слова:
врем — корень,
я — окончание,
врем — основа слова.

Разбор глагола по составу, как часть речи

Разбор глагола, одной из самых сложных частей речи, выполняется по известной опорной схеме:

1. Часть речи и общее грамматическое значение.

2. Начальная форма (инфинитив) и морфологические признаки:

Постоянные признаки (П.п.):

•   вид,
•   переходность,
•   возвратность,
•   спряжение.

Непостоянные признаки (Н.п.):

употреблён в форме

•   наклонения,
•   времени (только в изъявительном наклонении),
•   числа,
•   лица (только настоящем и будущем времени и в повелительном наклонении),
•   род (только в прошедшем времени единственного числа).

3. Синтаксическая роль глагола (простое и составное глагольное сказуемое, составное именное сказуемое).

 Пример: На рассвете Бильбо разбудили яркие лучи солнца.

1. (Лучи) разбудили — глагол, так как обозначает действие предмета.

2. Начальная форма (инфинитив): разбудить

Постоянные признаки (П.п.):

•   совершенный вид,
•   переходный,
•   невозвратный,
•   II спряжение.

Непостоянные (Н.п.):

употреблён в форме

•   изъявительного наклонения,
•   прошедшего времени,
•   множественного числа.

3. Синтаксическая роль: простое глагольное сказуемое.

 

Для того, чтобы определить, какую роль играет глагол в нашей речи, давайте представим себе предложения без глаголов: я люблю кататься на санках – я на санках. Без глаголов практически невозможно полноценно выражаться и объясняться. Поэтому, глагол выполняет главную роль в русском языке. Когда мы строим предложения, то в них присутствуют слова со значениями предмета и его действия или состояния действия. И эти слова называются главными членами предложения. Кроме того, глагол дал жизнь таким частям речи, как причастие и деепричастие. Например: влюбить- глагол, от которого образовано действительное причастие влюби+ суффикс «-вш»+окончание «-ий» или деепричастие- влюбив.

 

Морфемный разбор глаголов, как и других слов, осуществляют по следующей схеме:

•  определение части речи;
•  выделение окончания с объяснением его значения;
•  подбор однокоренных слов и выделение корня;
•  выделение приставки и суффикса;
•  определение основы слова, в которой заключается лексическое значение.

 

Глаголы обозначают действие или состояние предмета, изменяются по временам, лицам и числам, и отвечают на вопросы «что делать?», «что сделать?».

что такое в Морфемном разборе слова по составу

Смотреть что такое ДОЛУ в других словарях:

ДОЛУ

ДОЛУ, нареч. (стар.). Книзу, вниз. Опус-тить очи д.

ДОЛУ

долу нареч. устар. Вниз, книзу.

ДОЛУ

долу внизу, книзу, вниз Словарь русских синонимов. долу см. вниз Словарь синонимов русского языка. Практический справочник. — М.: Русский язык.З. Е. Александрова.2011. долу неизм. • вниз • книзу по направлению к низу, к земле) Словарь русских синонимов. Контекст 5.0 — Информатик.2012. долу нареч, кол-во синонимов: 3 • вниз (12) • внизу (12) • книзу (3) Словарь синонимов ASIS.В.Н. Тришин.2013. . Синонимы: вниз, внизу, книзу… смотреть

ДОЛУ

нареч. (греч. κάτω) — вниз; под землею, на землю, внизу.         (Екк. 3, 21).     … смотреть

ДОЛУ

нареч. трад.-поэт.Вниз, книзу.Зачем ты, грозный аквилон, Тростник прибрежный долу клонишь? Пушкин, Аквилон. Среди садов деревья гнутся долу, И до земли… смотреть

ДОЛУ

ВНИЗ (УНИ́З) (у напрямі до низу, до землі), ДОНИ́ЗУ, ДОДО́ЛУ, ДО́ЛУ, ДО́ЛІ, НАНИ́З, ВДОЛИ́НУ (УДОЛИ́НУ) діал., НАДОЛИ́НУ діал. Вона полізла по драбинці… смотреть

ДОЛУ

1) Орфографическая запись слова: долу2) Ударение в слове: д`олу3) Деление слова на слоги (перенос слова): долу4) Фонетическая транскрипция слова долу :… смотреть

ДОЛУ

долу I 1. (о человеке) сварливый, взбалмошный, вздорный; долу чал вздорный старик; катының долу болсо, замандын тынчтыгынан не пайда? погов. что пользы в том, что времена спокойны, если у тебя жена взбалмошна? 2. (в эпосе) положительный эпитет некоторых героинь; долу толкун бурные волны. долу II ир. град; күн күркүрөп, чагылган жаркылдап, долу куюп жиберди гремел гром, сверкала молния, посыпался град; долу уруп кетти градом побило. долу III ир. южн. мельничный ковш…. смотреть

ДОЛУ

нареч. уст., поэт.гнуться долу — doblarse, inclinarseветер клонит долу ветки — el viento inclina las ramasопустить глаза долу — bajar los ojos (la vist… смотреть

ДОЛУ

поэт., в соч. опусти́ть о́чи / глаза́ до́лу — gözlerini yere indirmekСинонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

нареч. уст., поэт. (она) молчит, потупя очи долу — elle se tait, les yeux baissésСинонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

I град; долу дүшкен выпал град. II 1. пОлный // полно; аяк долу сүт пОлная чашка молока; долу үнелиг полноценный; долу суглуг хем полновОдная река; чык долу битком набитый; полным-полнО; 2. мнОго; бо дагларда чуңмалар долу в этих горах много диких коз; ◊ долу эвес дээди эртем незаконченное вЫсшее образование…. смотреть

ДОЛУ

долу нареч. (2) И меч склоняя долуПр1. Тогда же долу спустилась планета Венера в лице жены прелестной.Пс37.

ДОЛУ

1. долу, подолувниз2. долувнизу

ДОЛУ

до́лу, нареч.; опусти́тьо́чи до́луСинонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

нареч. уст., поэт. (она) молчит, потупя очи долу — elle se tait, les yeux baissés

ДОЛУ

д’олу, нареч. (вниз, книзу) Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

〔副〕〈古〉往下, 向下. 〈〉 Опустить (或 потупить) глаза (或очи) долу 眼睛向下看. Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

Ударение в слове: д`олуУдарение падает на букву: оБезударные гласные в слове: д`олу

ДОЛУ

, доле — вниз, внизу, в глубине, в преисподней.Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

1) (на вопрос: куда?) додолу, вниз. [Додолу никне голова (Грінч.). І схиляється сонце униз (Фраако)]; 2) (на вопрос: где?) долі, внизу. [Ліг долі].

ДОЛУ

нар. уст. опустить очи долу поэт. — abbassare lo sguardo Итальяно-русский словарь.2003. Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

присл. Вниз, до землі.

ДОЛУ

нареч.Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

долу (Источник: «Полная акцентуированная парадигма по А. А. Зализняку») . Синонимы: вниз, внизу, книзу

ДОЛУ

ДОЛУ нареч. (книжн. поэт. устар.). Книзу, вниз. Молчит, потупя очи долу. Пушкин.

ДОЛУ

нареч. уст. ылдый, төмөн; опустить глаза долу ылдый карап калуу; жерди карап калуу.

ДОЛУ

Нареч. köhn. aşağı, aşağıya, yerə; опустить очи долу gözlərini yerə dikmək.

ДОЛУ

долу, д′олу, нареч. (стар.). Книзу, вниз. Опустить очи д.

ДОЛУ

прысл.уніз;˜ приклонитися долу — быць пакорлівым

ДОЛУ

ДОЛУ, наречие (стар.). Книзу, вниз. Опус-тить очи долу

ДОЛУ

внизвнизудодолудонизунанизуниз

ДОЛУ

до́лу прислівник незмінювана словникова одиниця

ДОЛУ

долу д`олу, нареч. (вниз, книзу)

ДОЛУ

нар.иск.: опустить очи долу башны түбән ию

ДОЛУ

вниз внизу додолу донизу наниз униз

ДОЛУ

нареч. поэт. уст. дадолу, уніз

ДОЛУ

долу внизу, книзу, вниз

ДОЛУ

присл. Вниз, до землі.

ДОЛУ

Дуо Дуло Долу Дол Одул

Диктант по теме «Глагол» — ✍️ «По русскому»

Цель: проверить усвоение правил написания изученных орфограмм; умение правильно писать родовые окончания у имён прилагательных, предлоги и приставки; выполнять разбор слова по составу, подбор однокоренных слов, разбирать предложения по членам, изменять глаголы по временам.

«Лакомства для зверей»

Бурого медведя считают хозяином смешанных лесов. Он очень любит малину и мёд. Косолапый часто совершает набеги на жилища диких пчёл. Забредает порой на пасеки. Пчёлы мстят медведю. Они жалят его в кончик носа, язык. Зверю приходится спасаться бегством.

Барсук поедает коренья растений, полевых мышей, земляных червей, юрких ящериц, ядовитых змей, болотных лягушек. Его любимое лакомство – виноград.

Заяц любит грызть морковь, капусту, репу и петрушку. (64 слова)

Грамматическое задание:

1. Выписать три словосочетания глаголов с именами существительными, указать число и время глаголов.
2. Разобрать по составу слова: набеги, приходится, полевых.
3. Разобрать предложения по членам и частям речи:
   1 вариант: 1 предложение.
   2 вариант: последнее предложение.

«Весна»

Наступила весна. Синее небо. Апрельское солнце. Немножко тепла и очень много света. Раскрылись почки на деревьях. Показались молоденькие зелёные листочки. Проснулась пчёлка. Она разбудила своих подруг. Пчёлки вылетели из улья. Вот под кустиком они увидели синий цветочек. Это была синяя фиалка. Она открыла свою чашечку. Там был сладкий сок. Пчёлки напились вкусного сока и весело полетели домой. Здравствуй, весна! (60 слов)

Грамматическое задание:

1. Подчеркните грамматическую основу, указав части речи
   1 вариант – 8 предложения (Она разбудила своих подруг.)
   2 вариант — 12 предложения (Она открыла свою чашечку.)
2. Выпишите глаголы, употреблённые …
   1 вариант – в единственном числе (6)
   2 вариант — во множественном числе (6)
3. Подберите глаголы — синонимы, употреблённые в неопределённой форме
   1 вариант. Рассказывать-…, смотреть-….
   2 вариант. Трудиться — …, видеть -…

Индивидуальные карточки для работы над составом слова.3 класс

Фамилия,имя______________________ Разбери по составу: Травушка травинка молоденький рассвет светлячок ветерок моряк полюшко рысёнок самовар золотые побережье бережок небо небеса голуби прибрежная полоска лисята лесник город	Фамилия,имя______________________ Разбери по составу: Времена глазной глоток гнёздышко горный давний далёкий подарок денёк длинный дождливый дочурка дровишки дроздовый еловый жарища желток котёнок ночник выпечка плясун
Фамилия,имя______________________ Разбери по составу: Зелёный зеркальный позолота ловец замазка игривый игрушка качка носишко конина котёнок красивый лесник крикливый кровинка ледник летучий ловушка овчина парник перина мировая низина новизна	Фамилия,имя______________________ Разбери по составу: Плечистый пчелиный пятнашки робкий садовый свинина свисток божок бочар больной силач синева ходули подсказка скворушка снежинка хитрый травинка тропинка сосновый соринка

КАРТОЧКИ ДЛЯ РАЗБОРА СЛОВ ПО СОСТАВУ

1. ПОМОЩНИК ПОВАР НАКЛОН

ВЫСТАВКА КАЧКА ДРУЖОЧЕК

ШКОЛЬНИК ЗИМНИЙ БАБУШКА

_____________________________________________________________________

2. СНЕЖОК ДЕДУШКА КНИЖЕЧКА

ПОМОЩНИЦА СОСЕДКА КОРАБЛИК

БЕЛЫЙ ШАЛУН КАЗАК

_____________________________________________________________________

3. ШАЛОСТЬ СТРЕЛОК ОТМЕТКА

ПЕРЕБЕЖКА ПАРОХОД ЗАМАЗКА

КРИКУН ГОРОХ ГОРСТКА

_____________________________________________________________________

4. ОБЛАЧКО ПАРОВОЗ ПОДЕЛКА

ПОЕЗД ГОРСТКА ОЧИСТКИ

ГНЕЗДЫШКО ДВЕРКА ДРУЖОК

_____________________________________________________________________

5. НАГРУЗКА РАЗГОВОР РЫБАК

ПАЛАТКА ЗАВЯЗКА ВЕТОЧКА

СКОРЛУПКА ДУБОК ЗИМУШКА

_____________________________________________________________________

6. ГРАДУСНИК ЕЖИКИ ВЕСЕННИЙ

ТРЯСКА ПРОГУЛКА ЗАКОЛКА

ГЛАЗОК КОРМУШКА ТИШИНА

7. СЕРДЕЧНЫЙ ТИГРЕНОК САРАЙ

ЗВЕРЕК СЛОВЕЧКО МОРСКАЯ

ЧАСОВОЙ РАССВЕТ РУССКИЙ

_____________________________________________________________________

8. РАССКАЗ ПОДДЕРЖКА ЦИРКАЧ

ВЕСЕЛЬЕ ПОБЕЛКА ДЕЛОВЫЕ

ЗВЕРИ СНЕГОВИКИ СКРИПУЧАЯ

_____________________________________________________________________

9. ГРУЗОВОЕ КОРМУШКА ПОВАРЕНОК

ЗАВЯЗКА ЛЯГУШЕЧКА ДЕВОЧКА

ОТГАДКА СИНЕНЬКИЕ ПРИБРЕЖНАЯ

_____________________________________________________________________

10. ПЕРЕХОД ПОЖАР ТРАВУШКА

КАРТИНА ПЕСЕНКА КРЫЛАТЫЕ

СВИСТОК РАЗЛИНОВКА ВОДОПАД

_________________________________________________________________

11. ХВАСТЛИВАЯ СЕНОКОС ДОРОЖКА

ПАРОХОД МАЛЕНЬКИЕ ЁЛКА

СОЛНЦЕ ЛОШАДКА ПРОЕЗД _________________________________________________________________

12. КРЕПОСТЬ ПОГРАНИЧНИК ПЫЛЕСОС

МУДРАЯ МОРОЗНЫЕ КРИКЛИВЫЙ

ЛЕДОХОД ЧАЙНИК КОРОВКА

Главные члены предложения в английском языке

Как и подлежащее, сказуемое в английских предложениях делится на три типа: Simple Predicate (простое сказуемое), Compound Predicate (составное сказуемое) и Full / Complete Predicate (полное сказуемое).

Simple Predicate (простое сказуемое) состоит только из глагола в определенной личной или временной форме.

• Kate likes you. – Ты нравишься Кейт.
• You disturb him. – Ты ему мешаешь.
• We worked hard to meet a deadline. – Мы усердно работали, чтобы закончить работу в срок.

Фразовые глаголы, хотя и состоят из глагола и предлога (а также иногда существительного), в предложении также выступают в качестве простого сказуемого, так как имеют единое значение.

• Help! Jack passed out! – Помогите! Джек потерял сознание!
• John takes care of his sister. – Джон заботится о своей сестре.
• Jane moved in with her boyfriend last month. – Джейн переехала к своему парню в прошлом месяце.

Compound Predicate (составное сказуемое) может состоять из нескольких простых сказуемых, которые относятся к общему простому или составному подлежащему.

• Kelly and Jane called Peter and invited him to their party. – Келли и Джейн позвонили Питеру и пригласили его на свою вечеринку.
• Someone approached our house, rang the doorbell and ran away. – Кто-то подошел к нашему дому, позвонил в звонок и убежал.

К составному сказуемому также относятся модальные, вспомогательные или фразовые глаголы с неличностными формами смыслового глагола (герундий, причастие). Такие составные сказуемые называются Compound Verbal Predicates (составные глагольные сказуемые). 

• I am working now. – Я сейчас работаю.
• I haven’t finished my work yet. – Я еще не закончил свою работу.
• You must take care of your cat. – Ты должен заботиться о своем коте.
• I will keep on telling my story. – Я продолжу рассказывать свою историю.

Также к составным относятся сказуемые, состоящие из глаголов-связок в личной форме и предикативов. 

Predicative (предикатив) – это именная часть составного сказуемого, которая дает характеристику подлежащему. Часто предикатив выражается существительным, прилагательным, числительным, местоимением и др. Такие составные сказуемые называются Compound Nominal Predicates (составные именные сказуемые). 

• He is nobody. – Он — никто.
• My father is an engineer. – Мой отец — инженер.
• Marco will be 25 next month. – Марко исполнится 25 в следующем месяце.
• She feels bad and looks tired. – Она чувствует себя плохо и выглядит уставшей.

Full Predicate или Complete Predicate состоит из простого или составного сказуемого и всех второстепенных членов предложения, которые относятся и зависят от данного сказуемого. 

• Kate doesn’t like you. – Ты не нравишься Кейт. 
• My friend Matt is a kind and intelligent guy. – Мой друг Мэтт – добрый и умный парень. 
• We have been living here for twenty years. – Мы живем здесь на протяжении двадцати лет.

В английском языке, в отличие от русского, подлежащее и сказуемое являются незаменимыми компонентами для построения правильного предложения. Они являются основой любого английского предложения. Однако, важно также и правильное использование второстепенных членов предложения (рассмотренных в отдельной статье), так как они дополняют информацию, выраженную подлежащим и сказуемым, обогащают речь говорящего и делают ее более выразительной.

Диктант «Изменение глаголов по временам» 4 класс

Диктант  с грамматическим заданием

 «Изменение глаголов по временам»

 

Спектр проверяемых умений

Знать главные и второстепенные члены предложения. Признаки изученных частей речи.

Знать лексико — грамматические признаки глагола.

Знать признаки 1 и 2 спряжения глаголов.

Уметь разбирать по составу глаголу неопределенной формы, задавать вопросы к глаголам

Уметь определять спряжение глаголов в настоящем и будущем  времени

Уметь правильно писать   –тся. –ться в глаголах, анализировать слово, предложение

Уметь находить способы проверки написания слов.

Уметь безошибочно писать под диктовку текст с изученными орфограммами.

Уметь расставлять знаки препинания в предложениях.

 

 

Последнее облако растаяло в небесной синеве. Галечная отмель делила реку на две протоки. У берега темнел омуток. На его поверхности непрерывно возникали небольшие воронки. Они уносились стремительным бегом воды. У вершины омута лежал большой валун. Вода трепетала на его мокрых плечах, как туго натянутый серебряный шарф. (46 слов.)

Задание.

1. Озаглавьте текст.

2. Сделайте морфологический разбор любых трех глаголов.

3. Разберите первое предложение по членам предложения и частям речи.

4. Разберите любые три глагола по составу.

5. Определите, какой частью речи являются подчеркнутые слова. Спишите предложение.

из-за холодных утренних рос хлеб рос медленно.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Анализ разборки, анализ состава материалов и оценка воздействия на окружающую среду дисководов компьютеров

Аннотация

Основная цель данной диссертации — выполнить анализ разборки приводов компьютера, таких как жесткий диск рабочего стола, дисковод гибких дисков сервера, дисковод гибких дисков и дисковод компакт-дисков сервера, чтобы идентифицировать компоненты и определить условия окружающей среды. Влияние этих компонентов и продукта в целом. Для анализа разборки приводы компьютера были разобраны до уровня, когда дальнейшая разборка невозможна, и время разборки было зафиксировано.Подобрана оптимальная последовательность разборки, чтобы разборка была произведена за минимально возможное время. Дерево разборки было создано для облегчения понимания разборки и понимания различных уровней разборки. Взаимосвязь компонентов была разработана на основе механической взаимосвязи и электрического соединения между компонентами. Стоимость демонтажа рассчитывалась с учетом только трудозатрат. Уровень сложности рассчитывался в зависимости от выполняемой операции по разборке конкретного изделия.Для определения воздействия на окружающую среду необходима идентификация материала. Известно, что на печатных платах приводов компьютеров присутствуют опасные материалы. Печатные платы приводов компьютеров были отправлены в «Noranda Recycling Inc.» для анализа материалов. Пластик, используемый в приводах, был идентифицирован по этикетке на пластиковых компонентах, а данные для металлических компонентов были взяты из литературы. Оценка воздействия на окружающую среду проводилась с использованием методологии Eco-Indicator 99.Было рассчитано воздействие на окружающую среду, вызванное компонентами привода, а также воздействие на окружающую среду компьютерного привода в целом. Если эти компоненты будут переработаны, то, сколько экологических индикаторов будет сэкономлено, было определено с помощью методологии расчета стоимости вторичной переработки, взвешенной с учетом окружающей среды. Методология Eco-Indicator 99 — широко используемая методика определения воздействия электронных продуктов на окружающую среду. Также очень проста в использовании.

Почему мыло работает — The New York Times

Эти более устойчивые микробы, как правило, менее восприимчивы к химическому воздействию этанола и мыла.Но энергичное мытье с мылом и водой все же может удалить эти микробы с кожи, отчасти поэтому мытье рук более эффективно, чем дезинфицирующее средство. Дезинфицирующее средство на спиртовой основе является хорошим подспорьем, когда мыло и вода недоступны.

В эпоху роботизированной хирургии и генной терапии тем удивительнее, что немного мыла в воде, древний и принципиально неизменный рецепт, остается одним из самых ценных медицинских вмешательств. В течение дня мы собираем всевозможные вирусы и микроорганизмы от предметов и людей в окружающей среде.Когда мы рассеянно касаемся наших глаз, носа и рта — привычка, по мнению одного исследования, которая повторяется каждые две с половиной минуты, — мы предлагаем потенциально опасным микробам портал к нашим внутренним органам.

Мытье рук стало основой повседневной гигиены сравнительно недавно. В 1840-х годах венгерский врач Игнац Земмельвейс обнаружил, что, если врачи мыли руки, после родов умирало гораздо меньше женщин. В то время микробы не были широко признаны переносчиками болезней, и многие врачи высмеивали идею о том, что отсутствие личной гигиены может быть причиной смерти их пациентов.Изгнанный своими коллегами доктор Земмельвейс в конечном итоге был помещен в психиатрическую лечебницу, где был жестоко избит охранниками и скончался от инфицированных ран.

Флоренс Найтингейл, английская медсестра и статистик, также пропагандировала мытье рук в середине 1800-х годов, но только в 1980-х Центры по контролю и профилактике заболеваний выпустили первые в мире общенациональные рекомендации по гигиене рук.

Мытье с мылом и водой является одним из основных методов общественного здравоохранения, который может значительно замедлить темпы пандемии и ограничить количество инфекций, предотвращая катастрофическую перегрузку больниц и клиник.Но эта техника работает только в том случае, если все мыть руки часто и тщательно: хорошо вспеньте, потрите ладони и тыльную сторону ладоней, переплетите пальцы, потрите кончиками пальцев ладони и оберните мыльный кулак вокруг больших пальцев.

Или, как недавно сказала канадский санитарный врач Бонни Генри: «Мойте руки, как если бы вы нарезали перец халапеньо и вам нужно сменить контакты». Даже относительно молодые и здоровые люди должны регулярно мыть руки, особенно во время пандемии, потому что они могут передать болезнь тем, кто более уязвим.

Мыло — это больше, чем средство индивидуальной защиты; при правильном использовании он становится частью общественной системы безопасности. На молекулярном уровне мыло работает, разбивая вещи на части, но на уровне общества оно помогает удерживать все вместе. Помните об этом в следующий раз, когда у вас появится импульс не обращать внимания на раковину: жизни других людей в ваших руках.

[ Поставьте лайк на странице Science Times на Facebook. | Подпишитесь на информационный бюллетень Science Times. ]

Возникающие решетки клатрина спонтанно разбираются без достаточного количества адаптерных белков

ВВЕДЕНИЕ

В клетках структуры, покрытые клатрином, собираются в связанные с мембраной точки ¹ , которые переходят в продуктивные везикулы только в половине случаев ² , а то и разбирают. Наблюдается, что эти структуры содержат по крайней мере ^~ 20 клатрин ¹ ; они динамические ³ и нестабильные? Было показано, что многие белки настраивают частоту и вероятность разборки в этих переходных структурах ^1,2,4,5 , но ни один из этих белков не является физическим движителем разборки.Клатриновое без покрытия оборудование, которое может приводить в движение разборку ^6,7 , редко встречается в созревающих структурах с клатриновым покрытием ^8,9 . Таким образом, остается фундаментальный вопрос: что физически стабилизирует структуры, покрытые клатрином, от разборки и в какой степени? Ответ на этот вопрос поможет установить, при каких условиях ранние структуры, покрытые клатрином, развиваются в продуктивные пузырьки. Здесь наше моделирование набора и сборки клатрина на мембранах воспроизводит кинетические данные in vitro , подтверждая модель, которая затем устанавливает, как ключевые параметры плотности адаптера, отношения объема к площади (V / A) и концентрации клатрина определяют кинетику и критические зародыши покрытых клатрином структур на мембранах.

Эксперименты in vitro показали, что покрытые клатрином структуры могут надежно собираться на мембранах с клатрином и минимальным набором компонентов, требуя цитозольного адаптера, который локализует клатрин на мембране, и участков связывания мембраны, которые локализуют адаптеры на мембране, что физиологически незаменимый липид PI (4,5) P ₂ ^10–12 . Кроме того, in vitro клатрин собирает как плоские, так и везикулярные решетки, точно так же, как наблюдается in vivo ^13,14 .Однако в ходе этих экспериментов не выяснилось, какая стехиометрия клатрина, адаптеров и площади мембраны определяет переход от нестабильной к стабильной клатриновой оболочке, поскольку все изученные условия свидетельствуют о равновесных, высокостабилизированных решетках. Даже когда концентрации компонентов сравнимы с сообщенными значениями in vivo и , соотношение V / A обычно на порядки выше, чем в клетках, что может резко повысить стабильность ассоциированных с мембранами комплексов ¹⁵ . Эксперименты in vivo предоставили более подробное представление о динамике зарождения и отпочкования клатриновой оболочки ^3,16 , но о количестве факторов, которые, как известно, вносят вклад в опосредованный клатрином эндоцитоз в клетках, включая ферментативную активность ^17,18 , делает невозможным оценку критического ядра клатрина и адаптеров, устойчивых к разборке. Состав успешных продуктивных пузырьков ¹⁹ демонстрирует, что разнообразие составов адаптеров и рецепторов приводит к продуктивному почкованию, и цель нашего исследования состоит в том, чтобы установить минимальные критерии стабильного зарождения и роста, зависящие от концентрации адаптеров, из равновесия.

Кинетические измерения предоставили мощную переменную для оценки как моделей, так и механизмов сборки раствора в различных образующих нити ^20,21 , агрегированных ^22,23 и системах формирования капсида ²⁴ . В недавних кинетических экспериментах Саркар и Пукайдил ²⁵ предоставили понимание не только начальных условий, которые могут способствовать формированию стабильной решетки клатрина на мембранах, но и ограничений скорости роста, в то время как предыдущие биохимические эксперименты ограничивали относительную свободную энергию клатрин-клатрин ²⁶ и клатрин-адаптер ²⁷ взаимодействия.В кинетических экспериментах использовались начальные условия, которые снова приводили к стабильным решеткам, и не могли проверить требования для стабильных и нестабильных решеток. Чтобы оценить размер и скорость стабильных ядер, которые могут возникать в клетке, нам необходимо имитировать более низкое соотношение V / A клетки, воссоздав эти эксперименты in silico в новых условиях, которые являются сложными экспериментально. Большим преимуществом типа микроскопического пространственного моделирования здесь является то, что вместо того, чтобы требовать экспериментов с множеством различных концентраций, чтобы подогнать уравнения скорости к данным ²³ , наши явные физические модели жестко ограничивают подмножество констант скорости, которые могут количественно определять данные. .

Моделирование сыграло важную роль в понимании принципов сборки, покрытой клатрином, но еще не охарактеризовало кинетику сборки из-за проблем с захватом молекулярной структуры на мезоскопической длине (мкм) и времени (минуты) в масштабах. Мы достигаем этого с помощью недавно разработанного программного обеспечения реакции-диффузии с разрешенной структурой ²⁸ , которое фиксирует грубую молекулярную структуру ²⁹ для многокомпонентных систем в 3D ³⁰ , 2D ³¹ и переходе между ³² .Важно отметить, что уменьшение размеров или изменение пространства поиска и динамики, которое сопровождает переходы от 3D к 2D ³³ , строго учтено в нашей модели, что будет количественно влиять на стабильность ¹⁵ и кинетику ³⁴ этапов сборки. Наша модель производит энергетику клатриновых клеток, аналогичную чисто статистическим механическим моделям ^35–39 , хотя этим моделям не хватает временного разрешения и молекулярных деталей. Наша модель создает структуры, аналогичные предыдущим пространственным симуляциям в растворе ^40–42 , но с включенной мембраной эти симуляции были слишком дорогими, чтобы охарактеризовать экспериментальную кинетику ⁴³ .Здесь мы оцениваем энергетический баланс образования изогнутой клетки и изгиба мембраны, определяя минимальную энергетическую форму мембраны, совместимую с изогнутыми клетками для раствора. Подобно другим подходам ^44–46 , мы не динамически связываем сборку клетки с образованием пузырьков. Тем не менее, мы обладаем уникальной способностью фиксировать кинетику локализации и сборки на мембране, отслеживая сборку плоской решетки, что согласуется с наблюдаемым ранним ростом ¹³ . Наша модель обеспечивает отправную точку для выхода за рамки непространственных кинетических моделей ^47,48 или моделей с силовой балансировкой ⁴⁹ и встраивания важных структурных деталей, которые обязательно повлияют на упаковку, механику и реконструкцию адаптеров и груза в везикулы.Важно то, что наше моделирование предоставляет подробную информацию о каждом мономере клатрина и структуре более высокого порядка, поскольку они развиваются во времени и пространстве. Используя концепции классической теории нуклеации, мы можем таким образом количественно оценить критические ядра как функцию плотности адаптеров, показывая, что при фиксированной концентрации клатрина минимальная плотность адаптеров необходима для запуска нуклеации и продолжения роста с соответствующими физиологическими скоростями ( ^~ 60 с) .

МОДЕЛЬ

Наша модель предназначена для воспроизведения количественной кинетики недавно измеренной сборки клатрина на мембранах ²⁵ путем фиксации грубой структуры тримера клатрина и его адаптивного белка, констант диффузии белков (и мульти-белков), скоростей, описывающих все парные белок-белковые взаимодействия, а также концентрации и соотношение V / A в эксперименте.Каждый жесткий тример клатрина содержит 3 участка для связывания другого клатрина, расположенных так, чтобы образовывать плоскую или изогнутую шестиугольную решетку в зависимости от угла α «складки» ветвей относительно оси z (рис. 1). Каждый тример также содержит 3 сайта для связывания адаптеров. Каждый адаптер содержит один сайт для клатрина и один сайт для связывания мембранного липида. Когда две молекулы связываются через свои определенные сайты взаимодействия, они принимают заранее заданную ориентацию относительно друг друга, образуя либо плоскую гексагональную решетку ( α = 90 °), либо сферическую клетку ( α > 90 °), с обоймой, состоящей из шестиугольников, пятиугольников и несовершенных контактов из-за жесткости тримеров ²⁸ .Масштаб длины белков выбирается в соответствии с известным размером решетки клатрина ⁵⁰ с межцентровым расстоянием 17 нм. Исключенный объем (рис. 1) важен для предотвращения перекрытия решеток, поскольку они диффундируют в 3D или 2D, что, как мы проверили, не повлияло на кинетику (рис. S1A).

Рис. 1. Модель реакции-диффузии с разрешенной структурой для набора и сборки клатрина на мембранах фиксирует структуру, валентность и исключенный объем.

Тримеры клатрина инициализируются в растворе, но связываются с адапторными белками, локализованными на поверхности.Связывание клатрина с адаптерами только один раз на поверхности согласуется с поведением AP-2 ¹⁰ . Адаптерные белки могут связывать определенные липиды на поверхности мембраны при инициализации в растворе. Несвязанные клатрин-клатриновые сайты исключают друг друга с радиусом σ = 5 нм (синие кружки) и клатриновые адаптеры с σ = 1 нм. Во все времена моделирования, центры масс (ЦМ) на тримерах исключают СОМ других тримеров при σ = 10 нм (фиолетовые кружки).

Мы зафиксировали несколько параметров на основе эксперимента, описанного здесь.Мы используем фиксированные константы диссоциации 120 мкм для клатрина-клатрина (без адаптера) ²⁶ и 25 мкм для клатрин-адаптера ²⁷ . Экспериментальное соотношение V / A составляет 991 мкм (методы) с концентрацией клатрина 80 нМ ²⁵ . Объем нашего моделирования имеет плоскую SA размером 1 мкм ² , для чего потребуется высота 991 мкм. Чтобы сохранить такое же соотношение V / A без распространения огромного избытка раствора клатрина, мы вместо этого используем высоту 1 мкм и поддерживаем постоянную (стохастически колеблющуюся) концентрацию [Cla] _до = 80 нМ (48 копий) в растворе (рис. .2A и см. Методы SI). Это предполагает, что общая концентрация клатрина в растворе не изменяется по мере того, как клатрин накапливается на мембране, что верно с очень хорошим приближением: <5% от общего клатрина попадает на мембрану через 100 секунд. Для кинетического моделирования наша мембрана моделируется как плоская поверхность, а отдельные участки связывания на поверхности моделируются неявно ³² . Неявные адаптеры имеют высоту 4 нм, что обеспечивает точную кинетику связывания с мембраной, что подтверждается изменением временного шага моделирования (рис.S1B) и простой системой без клатрин-клатриновой реакции (рис. S1C). Мы оцениваем транспортные свойства по Эйнштейну-Стоксу, с D _Cla = 13 мкм ² / с, D _{R, Cla} = 0,03 рад ² / с, D _ap = 25 мкм ² / с, D _{R, ap} = 0,5 рад ² / с, D _липид = 0,5 мкм ² / с и D _{R, липид} = 0,01 рад ² / с, чтобы позволить связанным комплексам вращаться на поверхность. Диффузия замедляется по мере роста комплексов в соответствии с Эйнштейном-Стоксом ²⁹ .

Рис. 2. Моделирование реакции-диффузии с разрешенной структурой кинетики сборки клатрина на мембранах воспроизводит эксперимент in vitro .

A) Моделирование имитировало экспериментальные условия из опубликованной работы Pucadyil et al ²⁵ , где флуоресценцию клатрина на мембранных канальцах измеряли во времени. Постоянная (колеблющаяся) концентрация раствора клатрина (80 нМ) поддерживалась посредством обмена с резервуаром большого объема. B) Данные флуоресценции, усредненные по множеству канальцев, показаны черным цветом.Экспериментальные данные были нанесены на график в единицах числа копий на мкм ² , а не в произвольных единицах, путем обнуления смещения (за вычетом 300) и масштабирования высоты на 1,7. Результат модели показан синим цветом (среднее значение по 4 траекториям моделирования). C) Снимки одной траектории моделирования в разные моменты времени. D) Макроскопические масштабы времени (время запаздывания τ и начальная скорость роста E * k — см. Уравнение 1) при изменении параметров модели в таблице 1 вместе с подгонками (уравнения 2 и 3).

Параметры, которые мы варьировали для оптимального воспроизведения эксперимента, сведены в Таблицу 1.Мы позволяем варьировать относительные скорости включения и выключения клатрин-клатринового ( k _CLA-CLA ) и клатрин-адаптера ( k _AP-CLA ) связывания. Наш клатрин-клатрин K _D усиливается, когда клатрин связан с адаптером, что давно известно из эксперимента ⁵¹ . Таким образом, мы уменьшаем свободную энергию Δ G _{+ ap 2} = Δ G _coop + Δ G _coop с использованием Δ G _coop значений в диапазоне −1.От 1 до −3 k _B T , где k _B — постоянная Больцмана, а T — температура. Мы сохраняем скорость выхода клатрина-клатрина неизменной и ускоряем скорость включения на f _coop = exp (–Δ G _coop / k _B T ). Наша модель учитывает изменения в скоростях, которые сопровождают локализацию на двумерной мембране ⁵² , которая компактно определяется одной молекулярной шкалой длины, h . Мы протестировали значения ч = 1-100 нм, порядок величины молекулярной шкалы длин клатрина.Введем энергию деформации Δ G _{деформацию} для образования замкнутых многоугольников (шестиугольников или пятиугольников). Когда решетка клатрина образует замкнутый шестиугольник (или пятиугольник), диссоциация единственной связи клатрин-клатрин не высвобождает мономер или фрагмент. Отношение скорости повторного связывания к скорости отсоединения определяется выражением, где Δ G _CC — разность свободных энергий несвязанной и связанной пары клатрина ²⁸ . Термин exp просто для парной реакции, где C ₀ — концентрация в стандартном состоянии (1M), что дает коэффициент повторного связывания 8.3 × 10 ³ или 9,2 × 10 ⁴ для клатрин-клатриновых связей без и с адаптерной связкой соответственно. Гораздо более высокие скорости повторного связывания делают шестиугольники очень устойчивыми к диссоциации. Таким образом, термин exp снижает стабильность шестиугольника по сравнению с 6 идеальными связями (для Δ G _{деформация} > 0). Мы ожидаем этого по нескольким причинам, потому что клатрин — гибкая молекула, которая образует различные решетки и клетки. Образование двух связей для замыкания шестиугольника / пятиугольника может вызвать упругую деформацию клатрина, снижая его стабильность.Некоторые решетки in vivo , в частности плоские решетки, также образуют весьма несовершенные «шестиугольники», которые явно имеют плохо выровненные контакты ⁵³ , способствуя менее стабильной и более динамичной решетке. При значении деформации Δ G , равном +6,9 k _B T , свободная энергия гексагонального 6-мера соответствует прочности 5,4 идеальных связей, а не 6, тогда как 6-мер в расширенном конформация содержит 5 связей. Наконец, плотность адаптеров (? _AP ) в моделировании in vitro рассматривается как переменный параметр, потому что, хотя плотность сайтов связывания мембраны была известна (0.0746 / nm ² ), мы не ожидаем, что на всех этих сайтах будут задействованы адаптеры. Для K _D в диапазоне от 1 до 10 мкм ⁵⁴ между хелатором и His-тегированным адаптером (присутствует при 200 нм) ²⁵ , у нас будет ^~ 0,0014-0,012 / нм ² адаптеров на поверхности до втекает клатрин, который мы используем в качестве ограничения для параметра плотности адаптера. Мы отмечаем, что в экспериментах in vitro присутствует только бета-отросток AP-2, и мы предполагаем, что он остается связанным с мембраной на протяжении всего моделирования.В «физиологических условиях» мы позволяем белку AP-2 обратимо связываться с мембраной и предотвращаем связывание этого полноразмерного AP-2 с клатрином в растворе, поскольку связывание ингибируется до локализации на мембране ¹⁰ .

Таблица 1.

Различные параметры модели и оптимальные значения для воспроизведения экспериментальной кинетики

РЕЗУЛЬТАТЫ

Количественное согласие, установленное между моделированием и кинетикой

in vitro

Моделирование роста решетки клатрина (см. Рис.2A) воспроизводят экспериментальную кинетику в эквивалентных условиях (рис. 2B). Основными характеристиками кинетики являются время задержки ( τ ) и наклон начального роста ( k × E ), которые следуют из приблизительного выражения для мембраносвязанного клатрина, [CLA] _mem ( т ):

Математически отставание в начальном росте объясняется ступенчатой ​​функцией Хевисайда H, которая равна нулю до τ и единице после него. Расчетные масштабы времени [ τ , 1/ k ] = [13 с, 121 с] полностью согласуются с экспериментальными [11 с, 107 с].Геометрия эксперимента ( В / А ) и размер предела решетки клатрина [CLA] _mem — ^~ 5000 клатрин / мкм ² ( ^~ 201 нм ² на тример). Как в эксперименте, так и в моделировании, насыщение клатрина на поверхности, таким образом, является результатом потери доступной площади поверхности, а не потери сайтов связывания адаптера. Быстрый рост после начального отставания — признак сотрудничества. Здесь клатрин связывает адаптеры, увеличивая скорость его ассоциации с другим клатрином.Уменьшение геометрического пространства поиска после связывания с мембраной (уменьшение размеров) еще больше увеличивает скорость.

Кооперативность как размерного уменьшения, так и связывания адаптеров необходима для воспроизведения экспериментальной кинетики

Эксперименты установили, что как только клатрин связывает адаптерные белки, его сродство к другим клатринам увеличивается. ⁵¹ . Основываясь на нашем моделировании, где K _D без адаптера фиксируется ²⁶ , мы видим, что сродство с адаптером увеличивается на ^~ 2.4 k _B T , что обеспечивает более быстрое и стабильное связывание. Кроме того, как только клатрин локализуется на поверхности, он связывает дополнительные адаптеры или клатрины с 2D константой скорости ¹⁵ , с масштабом длины 30 нм, определенным путем сравнения с экспериментальной кинетикой (см. Моделирование), что сопоставимо с радиусом клатрина. Оба источника кооперативности вносят значительный вклад в быстрый рост на поверхности (рис. 2D).

Время запаздывания контролируется скоростью прилипания клатрина к поверхности.

Рисунок 2D показывает черным цветом чувствительность τ _лаг к шести основным параметрам модели (см. Таблицу 1).Данные моделирования демонстрируют четкие тенденции, которые хорошо соответствуют упрощенной модели, суммированной по двум временным шкалам, первая из которых представляет локализацию клатрина в мембране, а вторая — зарождение клатрин-клатриновых контактов: где f _coop = exp (–Δ G _coop / k _B T ) и коэффициент размерности DF = V / A / h . [ CLA ] _{навалом} — концентрация клатрина в растворе. Упрощенная модель τ _лаг показана черной пунктирной линией на рис.2D. Параметры упрощенной модели определяются путем подбора всех результатов моделирования (включая рис. 2–3), так что она описывает как in vitro, , так и физиологические симуляции, приведенные ниже (рис. S2, методы SI, таблица S2). Зависимость τ _{запаздывания} от скоростей и концентраций аналогична полупериоду ⁵⁵ или среднему времени первого прохождения ³⁴ , изменяясь обратно пропорционально скорости x концентрации в обоих условиях. Однако существует нелинейная зависимость от фактора размерности ( DF ) и упругой деформации клатриновой решетки (Δ G _{деформация} ).Вероятно, это связано с тем, что некоторые клатрины связываются непосредственно с клатрином из раствора, минуя механизмы взаимодействия, обеспечиваемые уменьшением размеров. Зарождение зародышей на поверхности также меньше зависит от общего объема, так как сифонирует лишь небольшое количество клатрина. В этих моделях in vitro время локализации клатрина на мембране составляет около 40% задержки (первый член в уравнении 2) и, как и ожидалось, наиболее чувствительно как к скорости связывания клатрина с адаптером, так и к плотность переходника на мембране.Зарождение структуры клатрина (второй член) требует, чтобы несколько клатринов локализовались в одном положении, что ограничено, в первую очередь, низкой концентрацией клатрина (0,08 мкм).

Рис. 3. Клатриновые решетки с физиологически подобной геометрией не могут собраться, пока концентрация адаптера не достигнет 0,6 мкм.

A) Кинетика самого большого узла клатриновой решетки быстрее и достигает больших размеров с увеличением концентрации адаптера. Все модели содержат клатрин 0,65 мкм. Б) Время запаздывания и темпы роста следуют простым формулам (2 и 3).C) Время задержки медленнее в этих геометрически физиологических моделированиях и ограничено по скорости рекрутированием клатрина на мембрану с гораздо меньшим количеством сайтов связывания адаптеров, чем in vitro . D) Размер самых больших решеток увеличивается с переходниками, переходя от маленьких решеток к большим на 0,8 мкм (черные квадраты). На данный момент стехиометрия клатрин: адаптер достигла 1: 1 (оранжевые кружки).

Кинетика роста контролируется в основном набором из адаптеров

На рисунке 2D красным цветом показана чувствительность начальной скорости роста k × E к параметрам в таблице 1.Как и в случае τ , упрощенная модель, мотивированная кинетикой действия массы, в большинстве случаев достаточно хорошо соответствует данным (рис. 2D, красная пунктирная линия):

Этот начальный быстрый рост наиболее чувствителен к первому члену (пропорциональному k _AP-CLA ), учитывающему привлечение клатрина в адаптеры. Рост дополнительно усиливается совместно из-за 2D взаимодействий между контактами как тример-тример клатрина, так и контактов клатрина-адаптера. Варьирование h = k _{on, 3D} / k _{on, 2D} при фиксированном V / A показывает чувствительность к DF (рис. 2D), указывая на то, что 2D-связывание необходимо для управления экспериментальной скоростью роста.

Как ни странно, более высокая свободная энергия деформации Δ G _{деформация} замедляет время задержки, но увеличивает скорость роста , тогда как все другие параметры вызывают коррелированное замедление отставания и роста. Увеличение штрафа за деформацию дестабилизирует замкнутые гексагональные структуры, способствуя разборке, которая замедляет зародышеобразование (τ _{отставание} ), как и следовало ожидать. Однако рост ускоряется из-за увеличения выборки динамических и неупорядоченных структур с большим количеством «липких концов» или свободных ножек (1 свободная ножка / тример в шестиугольнике, 1.33 свободная нога / тример в удлиненном 6-мере), который быстрее набирает дополнительный клатрин.

AP-2 сам по себе недостаточен для зарождения решеток в клеточных условиях

Чтобы охарактеризовать зародышеобразование в более физиологических условиях, мы уменьшаем отношение V / A с 991 мкм до 1 мкм, что характерно для клетки HeLa, и увеличиваем концентрации тримеров клатрина до 0,65 мкМ ⁵⁶ (методы). Стабильные решетки не образуются при физиологических концентрациях АР-2 (0,2 мкМ ⁵⁶ , см. Рис.3А). По сравнению с системой in vitro значительно сниженное значение V / A приводит к гораздо более низкой плотности AP-2 на мембране ( ^~ 120 мкм ^-2 по сравнению с 9000 мкм ^-2 ). Большинство клатриновых ансамблей представляют собой димеры и мономеры со стехиометрией 2 клатрин: 1 AP-2, которая слишком мала, чтобы вызвать кооперативность, необходимую для образования зародышей. При этой концентрации клатрина для фазы задержки и роста необходимо соотношение клатрина и адаптера ^~ 1: 1 (достигается при 0.7-0,8 мкм адаптера). Равновесные флуктуации являются наибольшими в этой точке, что указывает на переход в росте решетки (рис. S3). Увеличенный AP-2 зарождает более крупные решетки с более коротким временем задержки и более быстрым ростом (рис. 3B).

Уравнение 2 показывает, что время задержки значительно увеличивается при низких концентрациях AP-2. При небольшом количестве сайтов связывания AP-2 локализация клатрина на мембране ограничивает скорость (рис. 3C). Скорость роста значительно ниже, чем у in vitro , где только небольшое количество клатрина набирается на площадь поверхности ² мкм в секунду (рис. 3B).И здесь несколько доступных AP-2 ограничивают привлечение клатрина на поверхность. Рекрутирование клатрина клатрином также замедлилось из-за чувствительности скорости роста к DF в стабилизации клатрин-клатриновых контактов на поверхности. Мы отмечаем, что рекрутирование AP-2 в липиды не является ограничивающим в этих моделированиях, так как покрытие PI (4,5) P ₂ составляет ^~ 20000 мкм ^-2 (1%), а скорость Связывание АР-2 с липидами происходит быстро, 0,3 с ^-1 мкМ ^-1 (Таблица S2).

Сборка решеток преодолевает начальный барьер, за которым следует небольшое увеличение стабильности во время роста

Отслеживание размера решетки в процессе моделирования позволяет количественно оценить их относительную вероятность во время роста в единицах кТ , — ln p _obs ( n; t ), (рис. 4A), а равновесная свободная энергия для всех размеров решетки, — ln p ( n ). В равновесии и для более высоких концентраций адаптеров мы наблюдаем бимодальное распределение — либо очень большие решетки, либо совокупность маленьких решеток n < ^~ 25 (рис.4А, В). Это примечательный результат, поскольку он демонстрирует, что даже при более высокой концентрации адаптера, после того, как большая часть раствора клатрина и адаптера концентрируется в единую структуру с покрытием, оставшийся клатрин образует небольшие кластеры, которые не устойчивы к разборке. Следовательно, образование стабильных клатриновых решеток может локально истощать ресурсы, необходимые для зарождения дополнительных стабильных сайтов. Фаза роста сборки (рис. 4A-желтый) дополнительно показывает, как даже после преодоления начального барьера для зародышеобразования решетки демонстрируют аналогичную стабильность в широком диапазоне размеров, что указывает на динамическое ремоделирование (рис.4А, 4Б). За этой плоской областью следует устойчивая яма, которая смещается больше и углубляется по мере того, как система уравновешивается до максимальных размеров решетки, с последней «стенкой», которая предотвращает дальнейший рост. Эта стенка возникает из-за недостаточного количества адаптеров для стабилизации роста на периферии решетки.

Рис. 4. Решетки клатрина сталкиваются с первоначальным препятствием для роста, и стабильный размер достигается только после значительного роста.

A) Вероятность наблюдения клатриновых решеток размером n может быть преобразована в подобную энергии метрику -ln (P ( n )), которая в состоянии равновесия является истинной свободной энергией.Первоначальный барьер для плато зарождения, за которым следует плоская область, в которой структуры имеют сравнимую вероятность. Фаза роста (желтая) представляет собой образцы решеток промежуточных размеров, в то время как в состоянии равновесия видны только маленькие и большие кластеры. Полная траектория обозначена зеленым цветом. [AP2] = 1,6 мкм. B) Чтобы количественно определить конец начального барьера для роста (n ₁ ) и начало стабилизированного роста (n ₂ ), мы определяем плато при постоянном -ln (P (n)), которое определяет эти перехватов для каждой траектории (Методы).C) С увеличением концентрации адаптера стабилизируются более крупные решетки. D) Критический размер, при котором плато барьера составляет ^~ n ₁ = 25, независимо от концентрации адаптера. За областью плато следует лунка, которая начинается с n ₂ и увеличивается с переходниками. (Вставка) Время прохождения первого барьера следует обратно пропорционально концентрации адаптера τ _obs ∝ 1 / [ AP2 ], с константой пропорциональности 1 / [0,026 μ M ^-1 с ^-1 ].

Концентрация адаптера контролирует время достижения наблюдаемого ядра, но не его размер

По мере увеличения концентрации адаптера свыше 0,7 мкм мы наблюдаем, что по всей траектории начальный барьер для зародышеобразования переходит в сплющенную область с аналогичной решеткой. размер n ₁ ^~ 25 клатрина для всех концентраций адаптера (рис. 4C – 4D). Этот начальный барьер является значительным, потому что меньшие решетки склонны к разборке (рис. S3C). Существует более поздний переход, когда начинает формироваться устойчивая яма, при n ₂ , которая явно смещается в сторону более крупных решеток по мере увеличения концентрации адаптера (рис.4С). Эти два размера решетки, которые ограничивают сплющенную область, которая возникает во время роста, вполне согласуются с размерами решеток, которые определяют области равновесия (рис. 4D) (методы). Таким образом, во всех фазах остается барьер для зародышеобразования, который в значительной степени не зависит от концентрации адаптеров, тогда как максимальный размер решеток растет. Мы действительно наблюдаем некоторые особенности в более плоской, более шумной промежуточной области по всей траектории, где небольшой барьер может существовать при более высоких размерах решетки (n ^~ 40-70).Это указывает на то, что во время роста решетки, которые находятся примерно на полпути к стабильному размеру, наблюдаются реже всего и действительно имеют короткое время жизни (рис. S3). Дополнительные адаптеры также значительно ускоряют время, необходимое для достижения «критического» ядра, причем время примерно пропорционально обратной концентрации адаптеров (рис. 4D-вставка).

Размер наблюдаемых нами «критических» зародышей показывает, что даже после образования множества (8–10) шестиугольников (вставка на рис. 4A) решетка все еще может самопроизвольно разрушиться.В частности, при временных масштабах меньше, чем время, необходимое для достижения этого критического размера, который даже для адаптера 1,6 мкм составляет ^~ 30 с, решетки демонстрируют значительный объем динамического ремоделирования. Большая часть роста и сжатия происходит за счет мономеров (рис. S3B), и когда решетка действительно меняет размер, вероятности диссоциации тримеров или добавления одного сравнимы до достижения предела максимального размера (рис. S3C). При изменении концентрации клатрина размер изначально стабильных ядер действительно изменяется, указывая на то, что именно общий доступный клатрин контролирует начальный барьер для нуклеации при наличии достаточного количества адаптеров (рис.S4).

Сборка в растворе менее кооперативна, чем на мембране, несмотря на повышенную стабильность изогнутых структур

Приведенное выше моделирование отслеживало плоские клатриновые решетки на плоской поверхности. Однако в растворе клетки изогнуты ⁵¹ , что указывает на то, что изогнутые клетки более устойчивы при отсутствии внешних ограничений мембраны. Недавние эксперименты также количественно показали, что сборка клатрина более стабильна на более сильно изогнутых поверхностях, иллюстрируя выигрыш в энергии, который сопровождает изогнутые клатриновые контакты ⁵⁷ .В соответствии с этими наблюдениями, когда мы используем те же энергетические и кинетические параметры для моделирования образования изогнутой клетки в растворе, мы видим минимальную сборку (рис. 5). Это показывает, что общая энергия решетки на мембране слабее, чем в растворе, либо потому, что она плоская, либо потому, что она изогнута, но ее стабильность снижается из-за сил изгиба мембраны. Увеличивая свободную энергию связи клатрин-клатриновых контактов, что согласуется с повышенной стабильностью изогнутой решетки в растворе, и уменьшая штраф за деформацию шестиугольников или пятиугольников, мы видим рост сборки.Этот выход сборки зависит от концентрации адаптера, что согласуется с экспериментами in vitro по формированию клетки, управляемой адаптером-пептидом, в растворе ⁵¹ , и демонстрирует значительно меньшую кооперативность, чем на мембране, из-за отсутствия уменьшения размеров. За счет стабилизации связей на ^~ 2k _B T и уменьшения гексагональной деформации на 2,3k _B T, наша сборка клетки относительно хорошо согласуется с экспериментами in vitro (рис.S5) ⁵¹ . По нашим оценкам, в результате деформации связей и гексагональной решетки изогнутая решетка имеет дополнительные 3-4 k _B T на тример (Таблица S1), доступная для выполнения работы с плоской мембраной, то есть для ее изгиба. . В дальнейшем мы будем называть эту величину «свободной энергией кривизны клатрина».

Рис. 5. Сборка изогнутой клетки в растворе требует дополнительной стабилизации, которая сопоставима с энергией изгиба мембраны

A) Клатриновые клетки с имеющимися адаптерами не образуются в растворе (черные точки), при использовании той же модели, что и на мембране (белые кружки) .При дополнительной стабилизации через клатрин-клатриновые связи (ΔG) и уменьшении деформации (ΔG _штамм ) начинают формироваться клетки раствора (красный и синий). Б) Энергия изгиба мембраны на тример клатрина при увеличении размеров изогнутых решеток n . Более сильно изогнутые клетки ( α = 98 °) требуют больше энергии на тример для изгиба мембраны. Энергия мембраны пропорциональна модулю изгиба, где мы используем 20 k _B T в соответствии с измерениями на плазматической мембране ⁵⁸ .

Стоимость изгиба мембраны может быть, по крайней мере, частично компенсирована стабильностью изогнутой решетки

При формировании изогнутой клетки на мембране образование изогнутой клетки должно сочетаться с изгибом мембраны, и здесь мы гармонично соединили наши собранные изогнутые клетки с моделью деформируемой мембраны ⁵⁹ , который следует за гамильтонианом Хельфриха ⁶⁰ (вставки на рис. 5B) (методы). Энергии мембран, представленные на фиг. 5B, показывают, что упругая энергия мембраны и свободная энергия кривизны клатрина сопоставимы (3-4 k _B T), что указывает на то, что изогнутые ямки близки по устойчивости к плоской решетке.Для плоской решетки на мембране напряжена именно клатриновая решетка, при этом мембрана находится в состоянии покоя. Когда образуется ямка, нагрузка на решетку снижается, но увеличивается стоимость изгиба мембраны. Обратите внимание, что мы не ожидаем, что изогнутая, связанная с мембраной решетка клатрина восстановит стабильность изогнутых клеток раствора из-за сил, приложенных к ней деформированной мембраной. Таким образом, изогнутые энергии сборки изменяются на мембранах, что наблюдалось в крупнозернистой модели клатрина ⁴³ .Этот баланс напряжений является основой для использования отдельных скоростей для изогнутых решеток в растворе по сравнению с ожидаемыми значениями на мембране, которые в таком случае будут более похожи на значения для плоских решеток. Наши расчеты также демонстрируют, как стоимость энергии изгиба зависит от кривизны везикулы. Для более крупных везикул требуется больше клатрина, но общая кривизна ниже, что приводит к более низким затратам энергии изгиба на клатрин (рис. 5B).

Обсуждение

Наша модель предсказывает, что возникающие решетки клатрина на мембранах нестабильны до тех пор, пока не будут присутствовать ^~ 25 клатрина, при физиологических параметрах 0.65 мкм клатрина и V / A = 1 мкм. Наша оценка порога устойчивости очень похожа на размеры абортивных структур в ячейках ¹ . Минимальным требованием для преодоления этого барьера для зародышеобразования структур на мембране является достаточная концентрация адаптерных белков, которые могут связывать клатрин с мембраной, позволяя сборке совместно извлекать выгоду из повышенной (управляемой адаптером) стабильности и уменьшения размеров. Физиологические концентрации одного АР-2 недостаточны для рекрутирования достаточного количества клатрина для спонтанного образования мембраносвязанной клетки.Следовательно, участие других адаптеров необходимо для запуска зародышеобразования. Наша модель показывает, как in vitro, условия с in vivo концентрации белка не определяют переход от нестабильного к стабильному росту решетки, в значительной степени из-за нефизиологического отношения V / A. Наше кинетическое моделирование и теоретический анализ позволяют нам преодолеть геометрический разрыв между in vitro, и in vivo; наша модель предсказывает, что для одного типа адаптера для запуска продуктивного зарождения и роста за ^~ 60 секунд (среднее время образования пузырьков) требуется по крайней мере 1.Адаптеры на 6 мкм. Это также требует наличия достаточного количества липидных популяций, которые могут запускать эффективное связывание с мембраной, с более медленными скоростями связывания липидов или уменьшенными популяциями, в конечном итоге замедляющими как задержку, так и скорость роста. Наши результаты ясно демонстрируют, что спонтанная разборка покрытых клатрином структур на мембранах может происходить естественным путем даже через относительно длительные периоды времени (многие секунды). Как свидетельствуют наши результаты равновесия, накопление большей части клатрина в отдельные структуры также истощает локальные популяции клатрина и адаптеров, оставляя оставшийся клатрин способным образовывать только небольшие и временные структуры (рис.4).

Моделируя только один тип адаптера для рекрутирования клатрина на мембрану, мы смогли построить прогностические формулы того, как микроскопические переменные изменяют макроскопическое отставание и время роста, даже если мы варьировали концентрацию клатрина, концентрацию липидов, систему геометрия, изменения в кооперативности (рис. S6) или скорости связывания липидов (рис. S7). Однако у in vivo, есть несколько типов адаптеров или дополнительных белков, которые могут связывать клатрин с мембраной ⁶¹ .Хотя наша модель предсказывает, как адаптеры с более быстрой или более медленной кинетикой связывания будут изменять макроскопический рост, способность многих из этих белков связываться друг с другом ⁶² создает перекрестное связывание, которое будет стабилизировать эти белки на поверхности мембраны ¹⁵ . Увеличивая локальную плотность сайтов рекрутирования клатрина, мы прогнозируем, что это перекрестное связывание будет способствовать зарождению стабильных решеток при более низких концентрациях, чем это происходит для одного типа адаптеров. Кинетика связывания дополнительных взаимодействий также может быть значительно более динамичной, чем у AP-2; белки FCho1 и eps15 образуют кластеры с AP-2, которые помогают инициировать сайты образования покрытых клатрином структур в клетках, и все же как FCHo1, так и eps15 в значительной степени отсутствуют в завершенных пузырьках, указывая на быстротечность их клатриновых контактов ^63–65 .Поведение этих дополнительных типов адаптерных белков согласуется с нашим прогнозом модели, что AP-2 нуждается в помощи для зарождения стабильных решеток, и в будущей работе мы рассмотрим, как явное перекрестное связывание может повысить локальные концентрации, чтобы управлять зародышеобразованием и ростом во времени и пространстве. . Важно отметить, что модель и программное обеспечение имеют открытый исходный код, поэтому они могут быть немедленно применены и изменены с дополнительными экспериментальными данными (Методы).

Ограничение нашей модели состоит в том, что сборка клатринового покрытия не связана динамически с ремоделированием мембраны с образованием сферических пузырьков.Однако наши энергетические расчеты с использованием собранных нами клатриновых структур и модели деформируемой мембраны демонстрируют, что энергия на клатрин, необходимая для изгиба мембраны, сопоставима со свободной энергией кривизны клатрина. Таким образом, наша модель предсказывает, что энергия плоских решеток на мембранах и изогнутых клеток на изогнутых мембранах имеет аналогичный масштаб, хотя и чувствительна к жесткости мембраны и дополнительным механизмам образования кривизны. Дополнительная индукция искривления, вызванная адапторными белками (например,грамм. вставка амфипатической спирали и BAR домены (^{, 66,} ) помогли бы реконструировать мембрану, тем самым уменьшая работу, требуемую только от клатриновой решетки. Кинетика изгиба мембраны вряд ли будет ограничивать скорость, учитывая медленные временные масштабы рекрутирования клатрина и относительно быструю динамику ремоделирования, наблюдаемую при отрастании мембран ⁶⁷ . Кинетика поздней сборки клетки может быть изменена из-за почкования, однако, из-за уменьшения периметра клатриновой решетки в изогнутой клетке, когда размер выходит за пределы диаметра пузырька ( ^~ 150 нм).Хотя это не повлияет на ранний рост, чтобы преодолеть барьер зародышеобразования, закрытие везикулы включает сокращение периметра, что сокращает сайты для рекрутирования клатрина, но увеличивает контакты, образующиеся в среднем на клатрин. Моделирование кинетики спаренной сборки и ремоделирования будет в конечном итоге важно для выделения событий формирования продуктивных пузырьков и возможно для типов моделей, используемых здесь.

Сборка клатриновой оболочки, изучаемая здесь, имеет много общих свойств с различными биологическими путями, включая этапы сборки вируса ^67–-69 и агрегации белка ⁷⁰ , где мы ожидаем аналогичной чувствительности к мембранной или поверхностной (воздух / вода) локализации. и геометрия.Наша работа здесь предсказывает, как сборка и агрегация могут происходить на поверхностях с более слабой энергией взаимодействия или значительно меньшим числом копий, чем это необходимо для зарождения структур в растворе. Локализация на поверхности обеспечивает дополнительную шкалу времени, которая может замедлить зародышеобразование, что может помочь избежать кинетических ловушек ⁷¹ для повышения выхода в разработанных системах ^72,73 . Добавление мембраны обеспечивает контрольную переменную для экспериментальной количественной оценки кинетики взаимодействия, где мы показали здесь, как визуализация рекрутирования на поверхности ²⁵ может быть эффективной наблюдаемой для различения механизмов сборки.Затем можно использовать ферментативный контроль состава мембраны для запуска разборки, чтобы изучить скорость отсоединения ²⁸ . В целом, используемый здесь подход на основе скорости ²⁸ предлагает ценную платформу для механистического и прогнозного моделирования самосборки, как в равновесии, так и вне его.

Разобрать определение | Law Insider

Относится к

Разобрать

Ассемблер означает любое лицо, занимающееся сборкой, заменой или установкой одного или нескольких компонентов в рентгеновскую систему или подсистему.Этот термин включает владельца рентгеновской системы или сотрудника или агента, который собирает компоненты в рентгеновскую систему, которая впоследствии используется для оказания профессиональных или коммерческих услуг.

Воспроизведение означает создание копий Произведения любыми средствами, включая, помимо прочего, звуковые или визуальные записи и право на запись и воспроизведение записей Произведения, включая хранение защищенного исполнения или фонограммы в цифровой форме или на другом электронном носителе. .

Производные работы означает любую работу, будь то в форме исходного кода или объекта, которая основана на Работе (или получена из нее) и для которой редакционные исправления, аннотации, уточнения или другие модификации представляют собой в целом оригинал. авторская работа. Для целей данной Лицензии Производные работы не должны включать работы, которые остаются отделенными или просто связаны (или связаны по имени) с интерфейсами Работы и Производных работ.

Прошивка означает любую компьютерную программу, хранящуюся в интегральных схемах, постоянном запоминающем устройстве или других подобных устройствах;

Исходный код для произведения означает предпочтительную форму работы для внесения в нее изменений.Для библиотеки полный исходный код означает весь исходный код для всех модулей, которые он содержит, плюс все связанные файлы определения интерфейса, а также сценарии, используемые для управления компиляцией и установкой библиотеки.

Программное обеспечение поставщика означает программное обеспечение, являющееся собственностью Поставщика или его Аффилированных лиц, которое используется или предоставляется Поставщиком при предоставлении Услуг; Персонал Поставщика означает всех лиц, нанятых или нанятых Поставщиком вместе с слугами, агентами, поставщиками, консультантами и Субподрядчиками Поставщика (и всех лиц, нанятых любым Субподрядчиком вместе с служащими, консультантами, агентами, поставщиками и Субподрядчики), используемые для выполнения своих обязательств по настоящему Контракту;

Работы означают работы, которые должны быть выполнены и завершены в соответствии с Контрактом.

Инженер означает лицо, услуги которого были привлечены ПРООН для администрирования Контракта, как это предусмотрено в нем, о чем будет письменно уведомлено Подрядчика.

Серверное программное обеспечение означает программное обеспечение, которое предоставляет услуги или функции на компьютере, выступающем в качестве сервера.

Дополнительные работы означают те работы, которые требуются Инженеру для завершения Контракта, которые не были специально и отдельно включены в график работ i.е. (Ведомость объемов работ) тендера. «Избыточные работы» означают требуемые объемы работ сверх того, что предусмотрено в любой позиции ведомости объемов работ.

Программное обеспечение для повторного распространения означает программное обеспечение, описанное в пункте 4 («Использование программного обеспечения для повторного распространения») ниже.

Мелкие инструменты означает предметы, которые обычно требуются для выполнения рабочих функций работника, включая, помимо прочего, оборудование, которое обычно не требует лицензирования, страхования или существенных затрат на хранение; такие как циркулярные и цепные пилы, ударные дрели, резьбонарезные станки, гибочные машины, гаечные ключи, инструменты для торцевых головок и т. д.

Форма исходного кода означает форму работы, предпочтительную для внесения изменений.

Инструменты разработки означает комплекты средств разработки, инструменты программирования, эмуляторы и другие материалы, которые могут использоваться при разработке Игр в соответствии с настоящим Соглашением.

Эксплуатировать означает производить, производить, импортировать, использовать, продавать или предлагать для продажи, в том числе для исследования, разработки, коммерциализации, производства, изготовления, получения нормативного разрешения для, удержания или хранения (будь то для утилизации или в противном случае), использовали, экспортировали, транспортировали, распространяли, продвигали, продавали, продавали или иным образом избавлялись от них во всем мире.«Эксплуатация» означает акт эксплуатации.

Recycler означает лицо, занимающееся сбором, транспортировкой и доставкой вторсырья.

Клиентское программное обеспечение означает программное обеспечение, которое принадлежит или лицензировано для Клиента, которое используется или будет использоваться Поставщиком для целей предоставления Услуг;

Встроенное программное обеспечение означает любое стороннее программное обеспечение, которое может содержать Доступный код или Защищенный код, лицензированное Deswik у третьей стороны и встроенное в Программное обеспечение.

Программное обеспечение означает любые и все (а) компьютерные программы, включая любую программную реализацию алгоритмов, моделей и методологий, будь то в исходном коде, объектном коде, в удобочитаемой форме или в другой форме, (б) базы данных и компиляции, включая любые и все данные и коллекции данных, будь то машиночитаемые или иные, (c) описания, блок-схемы и другие рабочие продукты, используемые для проектирования, планирования, организации и разработки любого из вышеперечисленных, (d) экранов, пользовательских интерфейсов, отчетов форматы, микропрограммное обеспечение, инструменты разработки, шаблоны, меню, кнопки и значки и (e) документация, включая руководства пользователя и другую учебную документацию, относящуюся к любому из вышеперечисленного.

Лицензионное программное обеспечение включает исправления ошибок, обновления, улучшения или новые выпуски, а также любые результаты, подлежащие предоставлению по контракту на обслуживание или обслуживание (например, исправления, исправления, PTF, программы, преобразование кода или данных или индивидуальное программирование).

Программное обеспечение Подрядчика означает программное обеспечение, являющееся собственностью Подрядчика, включая программное обеспечение, которое используется или будет использоваться Подрядчиком для целей предоставления Услуг.

Исполняемый файл означает Защищенный код в любой форме, кроме исходного кода.

Очистные сооружения означает все сооружения для сбора, откачки, обработки и удаления сточных вод.

Производное произведение означает произведение, основанное на Произведении или на Произведении и других ранее существовавших произведениях, таких как перевод, музыкальная аранжировка, инсценировка, беллетризация, версия фильма, звукозапись, репродукция искусства, сокращение, сжатие, или в любой другой форме, в которой Работа может быть переделана, преобразована или адаптирована, за исключением того, что работа, составляющая Коллективную работу, не будет считаться Производной работой для целей настоящей Лицензии.Во избежание сомнений, если Произведение является музыкальной композицией или звукозаписью, синхронизация Произведения во временной привязке с движущимся изображением («синхронизация») будет считаться Производным произведением для целей настоящей Лицензии.

Прикладное программное обеспечение означает Программное обеспечение, разработанное для выполнения определенных деловых или технических функций и взаимодействия с бизнес-пользователями или техническими пользователями Системы и обозначенное как таковое в Приложении 4 к Контрактному соглашению, и такое другое Программное обеспечение, о котором стороны могут договориться в письменной форме. быть прикладным программным обеспечением.

Документация по компьютерному программному обеспечению — это руководства пользователя, руководства пользователя, инструкции по установке, инструкции по эксплуатации и другие аналогичные элементы, независимо от носителя данных, которые объясняют возможности компьютерного программного обеспечения или предоставляют инструкции по использованию программного обеспечения.

Разборка под Win — DOTABUFF

Снова и снова в наших сообщениях в блогах мы подчеркиваем важность гибкости. Способность адаптироваться к меняющимся обстоятельствам и отклоняться от стандартных сборок в играх, где это необходимо, является важным навыком для любого игрока в Dota.Хотя большинство игроков это прекрасно понимают и действуют соответственно, многие до сих пор недооценивают некогда важную механику, которая может позволить вам быть еще более гибкой — разборку предметов.

Это, вероятно, общеизвестно для подавляющего большинства игроков, но мы подумали, что должны рассказать об этом. Arcane Boots можно разобрать, и во многих играх о героях поддержки они должны быть такими. Для этого есть несколько важных причин, некоторые из которых являются мета-специфичными, в то время как другие будут оставаться актуальными независимо от того, в каком патче играется игра.

Прямо сейчас для саппорта неспособность оставаться на карте — довольно большая проблема, особенно для игроков пятой позиции. Благодаря неограниченному курьерскому доступу служба поддержки, которая более эффективно использует свои ресурсы, получит больше опыта, немного дополнительного золота и, что особенно важно, возможность помочь своим товарищам по команде.

По этой причине Tranquil Boots невероятно популярны прямо сейчас: игроки иногда могут потратить 100 золотых на пару зелий Clarity, чтобы поддерживать свой уровень маны, непрерывно восстанавливая HP между боями.

В то же время одно или два использования Arcane Boots могут быть очень важны для вас и ваших товарищей по команде. Это особенно актуально, когда в качестве поддержки вы получаете прилив золота за убийство или за разрушение башни, но вам нужно пополнить запасы ресурсов, чтобы снова остаться на карте.

Поскольку Aether Lens является очень естественным предметом для некоторых героев поддержки, когда возникают такие ситуации, стоит пойти в Arcane, использовать их пару раз, чтобы помочь своим товарищам по команде с их проблемами с маной, будь то сражение или чтобы ускорить их фарм, а затем разобрать предмет, чтобы получить Спокойные сапоги и Эфирную линзу через некоторое время.

Однако помните, нужен ли вашим командам конкретный предмет для сохранения. Во многих играх вы можете быть вынуждены пойти на ранний Force Staff или Glimmer Cape из-за состава вражеских героев. В таких ситуациях вполне допустимо оставлять ваш Energy Booster в инвентаре без обновления: дополнительная мана на самом деле очень важна для некоторых героев, так что это не пустая трата времени. Впоследствии, как только вы решите проблему безопасности, может иметь смысл закончить сборку вашей линзы или перейти на Lotus Orb, если есть неприятные эффекты, которые вам нужно будет рассеять от своих товарищей по команде.

Скорее гиперспецифический сценарий поздней игры, а не стандартный прогресс, но Lotus Orb можно разобрать, чтобы вернуть Perseverance и построить из него Linken’s Sphere.

На самом деле это может иметь большой смысл для героев поддержки или вспомогательных героев, когда имеешь дело с гексами на более поздних этапах игры: Linken’s — довольно ужасный предмет для большинства ядер и часто является скорее вынужденной адаптацией, чем естественной. прогресс, поэтому, если у вас достаточно средств на оффлейнере на третьей позиции или на саппорте, вы можете значительно упростить игру своего керри, выполняя свою работу.

Plate Mail может быть использован как часть Shiva’s Guard или просто храниться в вашем инвентаре: случайный +10 Armor никогда не бывает плохим, честно. Поиск использования Energy Booster может быть немного более проблематичным, особенно в позднем игровом сценарии, когда проблемы с маной становятся менее серьезной проблемой, но Aeon Disk может быть хорошим способом продвинуть предмет, если ваш герой действительно не получает пользы от Aether. Объектив.

Один из самых простых предметов для разборки: Mask of Madness — отличный инструмент для ускорения фарма и раннего DPS, который часто становится слишком рискованным и ненадежным для использования в середине игры.По этой причине большинство керри-игроков обычно делают возврат компонентов и переход на комбинацию Satanic + Butterfly.

Конечно, возможны отклонения, но для большинства героев, на которых вы хотите увеличить скорость фарма, переход на «Подношение Владимира» не интуитивно понятен. Это полезный предмет, в то время как Сатанинский — гораздо лучший предмет самозащиты. Это более эгоистично, но керри в первую очередь должны думать о собственном плане, чтобы выиграть игру, по крайней мере, в большинстве игр.

По умолчанию обычно используется

Quarterstaff into Butterfly: этот предмет отлично подходит даже для героев Силы, так как дает приличное количество AS и брони.Однако, если вы чувствуете, что вам не нужна дополнительная броня или уклонение, переход за Орхидею в Кровавый Шип — вариант, который обязательно следует рассмотреть.

Наверное, один из самых важных элементов патча, который теперь можно разобрать, если нужно, сделав его еще лучше. Вам не нужно использовать Silver Edge в каждой игре: иногда просто нет пассивов, которые стоит взломать. Но на некоторых героях простое ускорение фарма и регенерация маны от Echo Sabre слишком хороши, чтобы их можно было передать.

Вместо этого, как только предмет, надеюсь, принесет вам участие или поможет с парой гангов, вы можете разобрать его на очень многоцелевой топор огров и немного специфический, но, тем не менее, важный Oblivion Staff.

Последний имеет только один путь развития, кроме Echo Sabre — Orchid Malevolence, который, в свою очередь, позже может быть объединен в Bloodthorn. Кровавый Шип — невероятный, но дорогой предмет для ДПС, однако для героев, которым действительно не хватает скорости атаки, но имеют большие значения урона от атаки, он может быть довольно хорошим.Добавленная утилита, доступная после того, как вы получите Orchid, также очень хороша, поскольку она может позволить вам пропустить BKB на некоторое время, если у врага есть только один проблемный источник блокировки.

Ogre Axe несколько интереснее. Хотя переход на BKB, вероятно, является вариантом по умолчанию для героев, которым действительно нужен иммунитет к заклинаниям, и в противном случае их кидают до смерти, есть определенно другие варианты.

Свену действительно может быть полезно получить в свои руки скипетр более раннего Аганима: большой разрыв ближе, в сочетании с тишиной Орхидеи может гарантировать, что он с относительной легкостью выполнит одно или два начальных убийства, и в этой ситуации довольно легко провести снежный ком.В качестве альтернативы, для других героев переход за Санге в Алебарду может быть очень полезной адаптацией: если враг в основном полагается на урон от автоатак от героев дальнего боя, нет лучшего предмета, чем Алебарда.

Halberd, а также S&Y, K&S и K&Y также можно разобрать, хотя мы не знаем, как это правильно использовать. Иногда вы можете пойти на ранний S&Y, а затем понять, что вам действительно нужна манта или алебарда, и это может пригодиться, но, опять же, это действительно специфично.

Алебарда, теоретически, может быть превращена в Баттерфляй, но тогда вам нужно будет найти применение компоненту Sange, который обычно будет означать S&Y для героя, который в первую очередь хочет иметь Баттерфляй. Но это немного похоже на откат в вашей сборке, хотя не обязательно плохо с точки зрения управления запасами.

Возможно, частью этого обсуждения может быть рецепт «Трезубца» в поздней игре, но игрокам действительно не повезет, чтобы не получить ничего лучше для своих ядер, чем «Трезубец», когда выпадает один из предметов T5.

Оставьте нам комментарий в разделе ниже, если у вас есть какие-либо идеи относительно дизассемблирования производных от S & K&Y.

Состав vs. наследование: как выбрать?

В начале …

… не было наследования и композиции, только код.

И код был громоздким, повторяющимся, блочным, несчастливым, многословным и утомительным.

Копирование и вставка были основными механизмами повторного использования кода. Процедуры и функции были редкими, новомодные устройства рассматривались с подозрением.Вызвать процедуру было дорого! Отделение фрагментов кода от основной логики вызвало путаницу!

Было темное время.

Затем мир озарил объектно-ориентированное программирование (ООП)… И мир практически игнорировал это в течение нескольких десятилетий. ¹ . Вплоть до графических пользовательских интерфейсов ² , которые оказались очень, очень нужны ООП. Когда вы нажимаете кнопку в окне, что может быть проще, чем отправить этой кнопке (или ее суррогату) сообщение Click ³ ?

После этого ООП взлетело.Было написано множество ⁴ книг и появилось бесчисленное количество статей ⁵ . Итак, к настоящему времени все подробно разбираются в объектно-ориентированном программировании, не так ли?

К сожалению, код (и Интернет) говорит «нет».

Самая большая путаница и разногласия, кажется, заключается в противопоставлении композиции наследованию, что часто резюмируется в мантре «отдавайте предпочтение композиции перед наследованием». Давай поговорим об этом.

Мантры, считающиеся вредными

С точки зрения эвристики, «предпочтение композиции важнее наследования» — это нормально, однако я не поклонник мантр.Хотя они часто содержат зерно истины, людям слишком легко услышать лозунг, не понимая его источника или контекста, и, таким образом, не думать самостоятельно — а это никогда не получается.

Я также не поклонник нелепых заголовков типа «Наследование — это зло» ⁶ , особенно когда автор пытается подкрепить такое возмутительное утверждение ненадлежащим использованием наследования… а затем обвиняет наследование. Как плотник, заявляющий, что молотки бесполезны, потому что они плохо заворачивают винты.

Начнем с основ.

Определения

Вот определение объектно-ориентированного программирования, которое я буду использовать в оставшейся части статьи: предположим, что у нас есть «классический» язык ООП, то есть тот, который поддерживает классы с полями, методами и единичным наследованием. Без интерфейсов, без миксинов, без аспектов, без множественного наследования, без делегатов, без замыканий, без лямбда-выражений, только основы:

• Класс: именованное понятие в доменном пространстве с необязательным суперклассом, определенным как набор полей и методов.
• Поле: именованное свойство некоторого типа, которое может ссылаться на другой объект (см. Состав)
• Метод: именованная функция или процедура с параметрами или без них, реализующая некоторое поведение класса.
• Наследование: класс может наследовать — использовать по умолчанию — поля и методы своего суперкласса. Наследование является транзитивным, поэтому класс может наследовать от другого класса, который наследуется от другого класса, и так далее, вплоть до базового класса (обычно Object, возможно, неявного / отсутствующего).Подклассы могут переопределять некоторые методы и / или поля, чтобы изменить поведение по умолчанию.
• Состав: когда тип поля является классом, поле будет содержать ссылку на другой объект, создавая, таким образом, связь между ними. Не вдаваясь в нюансы разницы между простой ассоциацией, агрегацией и композицией, давайте интуитивно определим композицию, как когда класс использует другой объект для обеспечения некоторых или всех своих функций.
• Инкапсуляция: взаимодействуя с объектами, а не напрямую с реализацией методов и полей, мы скрываем и защищаем реализацию класса.Если потребитель ничего не знает об объекте, кроме его общедоступного интерфейса, он не может полагаться на какие-либо внутренние детали реализации.

Наследование является фундаментальным

Наследование фундаментально для объектно-ориентированного программирования. Язык программирования может иметь объекты и сообщения, но без наследования он не является объектно-ориентированным (просто «объектно-ориентированным», но все же полиморфным).

… и композиция

тоже Состав также является основополагающим для на каждом языке.Даже если язык не поддерживает композицию (что в наши дни редко!), Люди все равно мыслят в терминах частей и компонентов. Без композиции невозможно разбить сложные проблемы на модульные решения.

(Инкапсуляция тоже имеет важное значение, но мы не будем здесь много говорить об этом.)

Так в чем суета?

Композиция и наследование имеют фундаментальное значение, так что в этом такого?

Главное — думать, что одно может заменить другое во всех случаях, или что одно лучше или хуже другого.Как и во всем остальном в разработке программного обеспечения, здесь нужно идти на компромиссы.

Композицию понять довольно просто — композицию мы видим в повседневной жизни: у стула есть ножки, стена из кирпича и раствора и так далее. Хотя определение наследования простое, оно может стать сложным и запутанным, если его использовать неразумно. Наследование — это скорее абстракция, о которой мы можем только говорить, а не касаться напрямую. Хотя во многих ситуациях можно имитировать наследование с помощью композиции, часто это бывает громоздко.Цель композиции очевидна: сделать из частей целое. Цель наследования немного сложнее, потому что наследование служит двум целям: семантике и механике.

Семантика наследования

Наследование фиксирует семантику (значение) в иерархии классификации (таксономии), упорядочивая концепции от обобщенных до специализированных, группируя связанные концепции в поддеревьях и т. Д. Семантика класса в основном фиксируется в его интерфейсе, наборе сообщений, на которые он отвечает, но часть семантики также находится в наборе сообщений, которые отправляет класс.При наследовании от класса вы неявно принимаете ответственность за все сообщения, которые суперкласс отправляет от вашего имени, а не только за сообщения, которые он может получать. Это делает подкласс более тесно связанным со своим суперклассом, чем если бы он просто использовал экземпляр суперкласса в качестве компонента вместо наследования от него. Обратите внимание, что даже в классах, которые мало что делают, имя класса передает разработчику значительную семантическую информацию о предметной области.

Механика наследования

Наследование захватывает механику, кодируя представление данных (полей) и поведения (методов) класса и делая его доступным для повторного использования и увеличения в подклассах. Механически подкласс наследует реализацию суперкласса и, следовательно, его интерфейс.

Двойная цель наследования ⁷ в большинстве современных языков ООП, как мне кажется, является причиной большинства недоразумений. Многие думают, что «повторное использование кода» является основной целью наследования, но это не единственная его цель.Чрезмерный упор на повторное использование может привести к трагически ошибочным проектам. Давайте посмотрим на пару примеров.

Как злоупотребить наследованием — Пример 1

Начнем с простого и чрезвычайно распространенного примера неправильного использования наследования:

 class Stack extends ArrayList {
    public void push (значение объекта) {…}
    public Object pop () {…}
}
 

Этот класс будет функционировать как стек, но его интерфейс фатально раздут. Открытый интерфейс этого класса — это не просто push и pop, как можно было бы ожидать от класса с именем Stack, он также включает в себя получение, установку, добавление, удаление, очистку и множество других сообщений, унаследованных от ArrayList, которые не подходят для Куча.

Вы можете переопределить все нежелательные методы и, возможно, адаптировать некоторые полезные (например, clear), но это большая работа, чтобы скрыть ошибку моделирования. Фактически, три ошибки моделирования, одна семантическая, одна механическая, одна и та, и другая:

1. Семантически утверждение «Стек является списком массивов» неверно; Стек не является правильным подтипом ArrayList. Предполагается, что стек должен обеспечивать выполнение последним вошел — первым вышел, ограничение легко удовлетворяется интерфейсом push / pop, но не обеспечивается интерфейсом ArrayList.
2. Механически наследование от ArrayList нарушает инкапсуляцию; использование ArrayList для хранения коллекции объектов стека — это вариант реализации, который следует скрыть от потребителей.
3. Наконец, реализация стека путем наследования от ArrayList является междоменной связью: ArrayList — это коллекция с произвольным доступом; Стек — это концепция организации очередей со специально ограниченным (неслучайным) доступом ⁸ . Это разные области моделирования.

Последний вопрос важен, но немного тонок, поэтому давайте рассмотрим его на другом примере.

Как злоупотребить наследованием — пример 2

Создание класса концепции предметной области путем наследования от класса реализации является распространенным злоупотреблением наследованием. Например, предположим, что мы хотим что-то сделать с определенным сегментом наших клиентов. Легко и очевидно, что нужно создать подкласс ArrayList, назвать его CustomerGroup и начать кодирование, верно?

Неправильно. Это будет отношения междоменного наследования, и их следует избегать:

1. ArrayList уже является подклассом списка, коллекция утилит — реализация класса .
2. CustomerGroup — это еще один подкласс — домен , класс .
3. Классы домена должны использовать классы реализации , а не наследовать от них.

Пространство реализации должно быть невидимым на уровне домена. Когда мы думаем о том, что делает наше программное обеспечение, мы работаем на уровне домена; мы не хотим отвлекаться на подробности о том, как он работает. Если мы сосредоточимся только на «повторном использовании кода» через наследование, мы будем неоднократно попадать в эту ловушку.

Проблема не в одиночном наследовании

Одиночное наследование по-прежнему является наиболее распространенной моделью ООП; одинарное наследование — это обязательно наследование реализации, которое может привести к сильной связи между классами. Проблема, казалось бы, в том, что у нас есть только один путь наследования, который можно использовать для моделирования как наших механических, так и семантических потребностей. Если вы используете его для одного, вы не можете использовать его для другого. Так разве множественное наследование не решает эту проблему?

№ . Отношения наследования не должны пересекать границы домена (домен реализации или домен приложения).Заставляя CustomerGroup наследовать от ArrayList , но также и от (скажем) DemographicSegment, эти два поддомена запутываются, что сбивает с толку таксономию.

Предпочтительное (по крайней мере, для меня!) Решение — унаследовать от служебных классов столько, сколько необходимо для реализации ваших механических структур, а затем использовать эти структуры в доменных классах посредством композиции, а не наследования. Позвольте мне еще раз заявить:

Если вы не создаете класс реализации, вы не должны наследовать от класса реализации.

Это одна из самых распространенных проблем новичков — ведь это так удобно! — и причины, по которым это неправильно, не часто обсуждаются в литературе по программированию, поэтому я повторю это еще раз: классы области приложения должны использовать классы реализации , а не быть одними из них. Держите эти таксономии / домены отдельно.

Итак, когда и как нам использовать наследование?

Использование колодца наследования

Наиболее распространенное и полезное использование наследования — для дифференциального программирования .Нам нужен виджет, аналогичный существующему классу Widget, но с несколькими настройками и улучшениями. В этом случае наследуйте прочь; это уместно, потому что наш подкласс по-прежнему является виджетом, мы хотим повторно использовать весь интерфейс и реализацию из суперкласса, и наши изменения в основном добавочные . Если вы обнаружите, что ваш подкласс удаляет вещи, предоставленные суперклассом, вопрос о наследовании от этого суперкласса.

Наследование наиболее полезно для группировки связанных наборов концепций, идентификации семейств классов и в целом организации имен и концепций, описывающих домен.По мере того, как мы углубляемся в реализацию системы, мы можем обнаружить, что наши первоначальные обобщения о концепциях предметной области, зафиксированные в наших иерархиях наследования, начинают разрушаться. Не бойтесь разбирать иерархии наследования на наборы взаимодополняющих взаимодействующих интерфейсов и компонентов, когда код ведет вас в этом направлении ⁹ .

Как определиться: состав или наследование?

Если у вас есть ситуация, когда сработает либо композиция, либо наследование, подумайте о разделении обсуждения дизайна на две части:

1. Представление / реализация концепций вашей предметной области — одно измерение
2. Семантика концепций вашей предметной области и их отношения друг к другу — это второе измерение

В общем, наследование в пределах одного из этих параметров нормально.Проблема возникает, когда мы забываем разделить два измерения и начинаем наследование через межпространственные границы.

Если вы обнаружите, что используете компонент для обеспечения подавляющего большинства своих функциональных возможностей, создавая методы пересылки в своем классе для вызова методов компонента, раскрывая поля компонента и т. Д., Подумайте, является ли наследование — для некоторых или всех желаемых поведение — может быть более подходящим.

Ничто не заменит объектное моделирование и критическое дизайнерское мышление.Но если у вас есть какие-то рекомендации, учтите их —

Наследование следует использовать только в следующих случаях:

1. Оба класса находятся в одном логическом домене
2. Подкласс — это правильный подтип суперкласса
3. Реализация суперкласса необходима или подходит для подкласса
4. Усовершенствования подкласса в основном являются аддитивными.

Бывают моменты, когда все это сходится:

• Моделирование предметной области более высокого уровня
• Фреймворки и расширения фреймворков
• Дифференциальное программирование

Если вы не делаете ничего из этого, вероятно, вам не понадобится часто наследование классов.«Предпочтение» композиции — это не вопрос «лучше», это вопрос «наиболее подходящего» для ваших нужд в конкретном контексте.

Надеюсь, эти рекомендации помогут вам заметить разницу.

Удачного кодирования!

Приложение

Особая благодарность за ценный вклад и комментарии следующим работникам мысли: Питу Ходжсону, Тиму Брауну, Скотту Робинсону, Мартину Фаулеру, Минди Ор, Шону Ньюхэму, Сэму Гибсону и Махендре Кария.

---

1. Первый официально объектно-ориентированный язык, SIMULA 67, родился в 1967 году.Объектно-ориентированному программированию 48 лет!
2. Программисты систем и приложений приняли C ++ в середине 1980-х, но повсеместному распространению ООП пришлось ждать еще десять лет.
3. да, я слишком упрощаю, игнорируя слушателей / делегатов событий и т. Д .; стараюсь сделать эту статью короткой!
4. Amazon заявляет о 24 777 книгах по теме объектно-ориентированного программирования на момент написания этой статьи
5. Поиск в Google заявляет ~ 8 миллионов результатов для точной фразы «объектно-ориентированное программирование» на момент написания этой статьи
6. Поиск в Google дает ориентировочные результаты 37 600 результатов для точной фразы «наследство — зло» на момент написания этой статьи
7.Семантика (интерфейсы) и механика (представление) могут быть разделены за счет дополнительной сложности языка; см., например, спецификацию языка D К. Дж. Дэйта и Хью Дарвена.
8. С некоторой грустью обратите внимание на то, что класс Java Stack наследуется от Vector.
9. Проектирование классов для повторного использования посредством наследования выходит за рамки данной статьи. Просто имейте в виду, что потребители экземпляров и подклассов имеют разные потребности, и обе они должны быть удовлетворены дизайном вашего класса.

Быстрое и элегантное закрытие

Этот вариант использования идеально подходит для датчиков. Они были написаны точно для серии преобразований последовательности:

 (- >> хз
     (карта f)
     (фильтр g)
     (карта h))
;; эквивалентно =>
(последовательность
 (сост.
  (карта f)
  (фильтр g)
  (карта h))
 хз)
 

С дополнительным бонусом в виде удаления промежуточных размещений. Это довольно аккуратно. Единственная проблема в том, что нам не хватает важного компонента. Преобразователя, эквивалентного (разделение n ступенчатых колл) , не существует.длинное п] (fn [rf] (пусть [a (java.util.ArrayList. n)] (fn ([] (рф)) ([результат] (let [результат (if (.isEmpty a) результат (пусть [v (vec (.toArray a))] ;; сначала очистить! (. ясно a) (нередуцированный (рф результат v))))] (рф результат))) ([ввод результатов] (. добавить ввод) (если (= n (. размер a)) (пусть [v (vec (.длинный шаг] (fn [rf] (let [a (java.util.ArrayDeque. n)] ;; Очередь здесь (fn ([] (рф)) ([результат] (rf результат)) ;; не нужны остатки ([ввод результатов] (. добавить ввод) (если (= n (. размер a)) (пусть [v (vec (.toArray a))] ;; Удалите элементы step вместо clear (время выполнения [_ шаг] (.removeFirst a)) (рф результат v)) результат)))))))

Убедимся, что это работает:

 (последовательность (скольжение 3 1) '[a b c d e]) ;; => ([a b c] [b c d] [c d e])
 

Теперь мы можем определить эквивалентный преобразователь:

 (def baseline-xf
  (сост.
   (скольжение 8 1)
   (карта (смежная идентичность
              (comp (частичное применение -)
                    (сначала с последнего))))
   (фильтр (comp (частичное> 1000) секунд))))

(cc / quick-bench (doall (последовательность baseline-xf times-v)))
;; Количество оценок: 6 из 6 выборок из 1 звонка.;; Среднее время выполнения: 462,921956 мс
;; Стандартное отклонение времени выполнения: 20,213288 мс
;; Нижний квантиль времени выполнения: 453,931650 мс (2,5%)
;; Верхний квантиль времени выполнения: 497,963799 мс (97,5%)
;; Используемые накладные расходы: 2,079753 нс
 

И мы уже в ~ 2,5 раза быстрее

.