Что такое побег 6 класс биология: Недопустимое название — Викиверситет

01:49

Квест-комната для биологических наук — усиленное обучение

Описание продукта

Совершенно новый биологический квест — виртуальный квест 2-го поколения от Cre8tive Resources! Это длится час или меньше, в зависимости от того, насколько быстро команды решат каждую головоломку! Студентам нравится такой стиль уроков, который отлично подойдет для вашего класса.

Другая наша совершенно другая, но очень популярная комната для квеста в науке первого поколения находится здесь НАУЧНАЯ КОМНАТА ПЕРВОГО ПОКОЛЕНИЯ

Содержимое продукта:
☞ Интерактивный трекер для квестов в PowerPoint — сохраняет на виду соревновательный характер
☞ Ключи для загадки квестов (шесть наборов для шести команд)
☞ Лист команды квестов — коды записи, ответы на подсказки по мере прохождения через 7 комнат
☞ Пазлы для квестов (7 комнат = 7 различных стилей головоломок, включающих в себя счет, грамотность и нестандартное мышление)
☞ Лист с ответами учителя — быстро подтвердите командам, что они правильно решили головоломку.
☞ Инструкции для учителей о том, как настроить квест и что печатать, и главные советы и ярлыки.
☞ Сертификаты об успешном побеге для тех, кто выполнил все задание (есть еще и трудный бонусный побег 🙂 для любых быстрых команд

✿ 7 комнат включают в себя: игровую площадку, прихожую F, класс английского языка, бесконечный подвал, кабинет руководителей, библиотеку и, наконец, секретную лабораторию (каждая головоломка была адаптирована к теме этой квестовой комнаты и подходит для KS3 и KS4 Студент.

Наша философия
✿ Мы стремимся помочь вам вооружить учащихся знаниями и навыками, которые позволят им взять на себя ответственность за собственное обучение.В наших продуктах есть все необходимое для проведения веселых и творческих уроков. Наши продукты разработаны учителями, протестированы в классе и одобрены учащимися.

ПРОСТО ПЕЧАТИ И ИДЕЛАЙТЕ!
✿ Их также можно использовать для создания перевернутой учебной среды. Код продукта Cre8tive C8 / ES / 36

✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰✰

Вы также можете ознакомиться с этими другими замечательными ресурсами по научному творчеству для ваших учеников

Пользовательское поле

Ресурсы для творчества авторов

Оценка Уровень 7 8 9 10 11

Тип продукта Квестовая комната

Тип файла PPT

Страниц 25

Ключ ответа Да

Идеи квестов для естественных наук

Создать увлекательную квестовую комнату для школьников, изучающих естественные науки, не должно быть сложно.

Выделите свои квесты отдельно друг от друга, заплетая повествование на протяжении всей игры. Студенты будут вовлечены в историю, а артефакты и головоломки станут для них более значимыми.

Я составил список идей для загадки квестов, которые дадут вам толчок к творчеству на следующем уроке.

Давай сделаем это!

Создание поддельной квитанции — Этот онлайн-генератор квитанций позволяет создавать поддельные квитанции и манипулировать всеми данными на листе бумаги.

Подсказки могут быть скрыты в датах, покупках линейных единиц, налогах, итогах, телефонных номерах и т. Д. В этой конкретной головоломке учащиеся используют предметы, купленные линейной единицей, и им необходимо найти количество валентных электронов с каждым из них.

Использование изображения для создания головоломки — Jigsaw Planet позволяет загружать изображение, а затем создает наложение головоломки поверх него. Количество частей пазла также может быть выбрано.

Головоломка сама по себе делает занятие забавным, но я настоятельно рекомендую интегрировать контент в изображение, иначе ценность квеста уменьшится.

В этом примере ученики должны собрать головоломку, а затем определить характеристики атома, чтобы получить код.

Создать письмо с отсутствующим текстом — Идея простой головоломки — создать письмо (да, буквы все еще существуют), в котором отсутствует текст. После добавления недостающего текста студенты смогут использовать эту информацию для создания кода.

Предыстория этой загадки состоит в том, что кто-то пролил кофе на письмо, но вы все равно можете заполнить недостающую информацию, чтобы получить ключ.

Используйте азбуку Морзе — азбука Морзе — проверенная и верная последовательность, которую можно использовать в квестах. Существует даже бесплатный шрифт кода Морзе, который можно загрузить и использовать в вашем издательском ПО.

Опять же, важно, чтобы учащиеся не просто расшифровывали код, чтобы получить ключ.Перейдите на новый уровень и интегрируйте учебные материалы в расшифрованный код.

В следующей головоломке учащиеся решают азбуку Морзе, которая гласит: «Общее количество атомов кислорода». Оттуда ученики должны будут использовать эти знания, чтобы подсчитать общее количество атомов кислорода, чтобы раскрыть разгадку.

Use Snotes — Snotes — это супер классный инструмент, который позволяет наложить текст на, казалось бы, нечитаемую головоломку. Однако, когда Snote повернут на точный угол, разгадка обнаруживается.

Сноска ниже — это пример того, как можно выглядеть. Если вы не распечатаете его и не наклоните правильно, вы не сможете обнаружить подсказки. У Snotes также есть цифровая версия, которая позволяет студентам манипулировать Snote онлайн, чтобы раскрыть ключ.

Используйте PigPen Cipher — Шифр ​​Pigpen — один из моих любимых шифров. Он меняет буквы на символы и просто круто смотрится. Также для загрузки доступен шрифт pigpen cipher.

При расшифровке загадки ниже появляется сообщение «Нейтроны в C, O, B, H». Затем студентам нужно будет найти нейтроны в этих элементах, чтобы раскрыть код.

Создать лабиринт — Вам лучше поверить, что я всегда краду лабиринт из детского меню дочери и дополняю его дешевым мелком, который идет в комплекте. Создать лабиринт как идею квеста легко с помощью этого создателя лабиринта.

Инструмент позволяет ввести предложение (подсказку), а затем создать вокруг него лабиринт.Чем длиннее предложение, тем больше лабиринт. Как и все другие головоломки, эта подсказка работает лучше всего, если она интегрирована с контентом, и учащийся должен использовать свои знания, чтобы найти разгадку.

Лабиринт в головоломке ниже дает подсказку: «второй закон гласит, что сила равна ускорению, умноженному на какое?»

Создайте разговор с фальшивым текстом — Познакомьтесь с учеником, где он, верно? Создавая фальшивый текстовый разговор, я могу превратить сюжетную линию в головоломку или побег.

iPhoneFakeText создает изображение после входа в разговор (в комплекте со смайликами!).

Ниже приведена одна часть головоломки, которую я создал с помощью генератора поддельного текста.

Перевернутый текст — Использование зеркала или отражающей поверхности для чтения текста — это забавная подсказка для побега, которую можно использовать в классе. В большинстве инструментов публикации вы можете отформатировать текстовое поле для поворота в 3D на 180 градусов. В PowerPoint есть эта функция.

Обязательно используйте шрифт, который трудно читать в обратном направлении.Я использовал Zapfino в головоломке ниже. При просмотре в зеркало он говорит: «Думаешь, ты меня поймал? Убери свой разум из облаков! Как будто вы все равно могли бы понять, что общего в этих словах… »

Студенты могут даже использовать свою переднюю камеру на своем телефоне, чтобы читать текст. Может быть, пусть они в этом разберутся.

Используйте генератор ребуса — Генератор ребуса — это аккуратный небольшой инструмент, который позволяет вам ввести сообщение и преобразовать его в смайлы и буквы.

Студентам может потребоваться пара минут, чтобы выяснить, как их расшифровать, но они превращаются в забавную головоломку с побегом, которую можно использовать для различных тем.

Генератор позволяет включать или нет подсказки эмодзи. Я включил их ниже. Решение этой проблемы — «Kesler Science потрясающая». Многие учителя и ученики зацикливаются на знаке равенства. Каждый раз, когда есть знак равенства, вам нужно заменить букву перед знаком равенства буквой после него.

Сделайте поддельную газету — Создание поддельной газеты позволяет вам создавать любой контент, который вы хотите, и превращает его в притворную газету.Вы можете поиграть с датой или вставить текст, необходимый для решения кода.

В головоломке ниже представлен текст о пищевой сети, который будет использоваться для заполнения неполной графической пищевой сети.

Сетка с несколькими вариантами ответов — Простая головоломка с квестом включает вопросы с несколькими вариантами ответов. Студенты должны будут ответить на ряд вопросов, а затем использовать свои ответы с сеткой, чтобы придумать код. Вы можете сделать целую квестовую комнату, если хотите, но это может быстро надоесть.

Сделайте выдуманные водительские права — Легко сделать выдуманные водительские права, которые будут использоваться в вашем повествовании. Есть много мест, где можно манипулировать информацией и кодами.

Use Scrabble Tiles — Еще одна из моих любимых идей головоломок с побегами — использовать скрабл-плитки для решения головоломок. На плитках уже есть номера, поэтому они идеально подходят для квеста.Вы можете сделать плитку самостоятельно или купить большую сумку на Amazon.

В головоломке ниже учащиеся заполняют пропущенные слова из стикера, а затем подсчитывают номера плиток для каждого слова, чтобы получить код.

Сортировка карточек — Сортировка карточек — это быстрый способ собрать головоломку. Возьмите имеющуюся информацию и попросите учащихся разместить ее в правильном порядке, чтобы раскрыть скрытый код на обратной стороне карточек. Вы можете вывести эту идею на новый уровень, написав коды УФ-ручкой.

Генератор поддельных билетов на концерт — Помимо поддельных удостоверений личности и поддельных квитанций, существует также генератор поддельных билетов на концерт. Каждое из полей можно изменять, чтобы включить в него любую информацию, которую вы можете добавить.

Собери все вместе — Ключ к любой увлекательной головоломке с квестом состоит в том, что она должна включать в себя 3 вещи. Должен быть рассказ, связанный с темой комнаты, он должен включать в себя контент из вашего класса, и он должен включать тип головоломки, чтобы разблокировать подсказку или код.

Я придумал простую формулу, по которой вы можете создать потрясающую головоломку: Повествование + Содержание класса + Головоломка или Действие = Код

У меня есть около 40 квестов, созданных для учителей естественных наук в средней школе, которые сводят на нет основную часть работы. Вы можете узнать о них больше здесь или в моем магазине TPT

Animas High делает математику и биологию увлекательными с помощью квеста — The Durango Herald

Интерактивная головоломка растягивает клетки мозга, коммуникативные навыки

Колин Хьюз, учитель средней школы Анимаса из колледжа Форт-Льюис (справа), и Скайлар Смит, ученица средней школы Анимас, находят подсказки, используя черный свет, выполняя головоломку, чтобы открыть дверь из комнаты побега геометрии анатомии в Анимас Средняя школа в четверг.

Шон Стэнли / Durango Herald

Улики, формы, замки и головоломки и даже несколько отвлекающих факторов окружают учеников средней школы Анимас, которые пытаются решить головоломку, чтобы найти ключ, чтобы открыть комнату квеста в средней школе Анимас в четверг.Часы отсчитывают 60 минут, пока они работают.

Шон Стэнли / Durango Herald

Слева направо: учитель средней школы Анимас Колин Хьюз и ученики средней школы Анимас Лирик Хилднер, Елена Ривера, Кейтлин Данн и Скайлар Смит ищут ключи, чтобы решить головоломку в комнате побега «Геометрия анатомии» в средней школе Анимас в четверг.

Шон Стэнли / Durango Herald

Ученики средней школы Анимаса ищут ключи для решения головоломок, чтобы найти ключ, чтобы открыть дверь из комнаты квеста в средней школе Анимас в четверг.Слева — Лирик Хилднер, Елена Ривера, Скайлар Смит и Матео Ибарра Демпси. Часы отсчитывают 60 минут, пока они работают. Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

В поисках побега (слева направо) учитель средней школы Анимас из колледжа Форт-Льюис, Колин Хьюз и ученики средней школы Анимас Рид Фрей, Скайлар Смит, стоя на коленях, Кейтлин Данн, Елена Ривера и Матео Ибарра Демпси ищут улики для завершения головоломка, чтобы найти ключ, чтобы открыть дверь квеста геометрии анатомии в средней школе Анимас в четверг.Квест — это относительно новая концепция развлечения в Соединенных Штатах, представляющая собой интерактивную охоту за головоломками в реальном времени, в которой участники должны находить подсказки и решать головоломки с конечной целью найти ключ для побега из комнаты. Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

В поисках побега (слева направо) ученики средней школы Анимас Матео Ибарра Демпси, Лирик Хилднер, Елена Ривера, Кейтлин Данн, Скайлар Смит и студент-учитель из колледжа Форт-Льюис Колин Хьюз ищут улики, чтобы решить головоломку, чтобы открыть дверь из комнаты квестов в средней школе Анимас в четверг.Квест — это относительно новая концепция развлечения в Соединенных Штатах, представляющая собой интерактивную охоту за головоломками в реальном времени, в которой участники должны находить подсказки и решать головоломки с конечной целью найти ключ для побега из комнаты. Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

В диспетчерской ученики 10-го класса средней школы Анимас наблюдают, как сокурсники ищут подсказки, чтобы решить головоломку в поисках ключа, чтобы выбраться из комнаты квестов в средней школе Анимас в четверг.Руководили проектом учитель математики Ализа Круз (стоит в центре слева) и учитель биологии Тина Хотт. Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

В поисках побега (слева направо) учитель средней школы Анимас Колин Хьюз и ученики средней школы Анимас Лирик Хилднер, Елена Ривера, Кейтлин Данн и Скайлар Смит ищут подсказки, чтобы решить головоломку, в поисках ключа к выходу из Квест в средней школе Анимас в четверг.Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

Улики, формы, замки и головоломки окружают учеников средней школы Анимас, пытающихся решить головоломку в поисках ключа от комнаты побега в средней школе Анимас в четверг. Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

В поисках побега учитель средней школы Анимас из колледжа Форт-Льюис Колин Хьюз (справа) и ученица средней школы Анимас Скайлар Смит находят подсказки, написанные в книге, используя черный свет, и ищут подсказки, чтобы решить серию головоломок. поиск ключа, чтобы открыть дверь квеста «Геометрия анатомии» в средней школе Анимас.Фото Шона Стэнли / Durango Herald.

Что вы получите, если совместите цифровые приключения «побег из комнаты», головоломки и поиск сокровищ, «Выживший» и «Удивительную гонку», дома с привидениями и интерактивный театр?

Комната квестов средней школы Анимас. И это может стать прекрасным развлечением для весеннего вечера.

«Шесть гениев могут войти в комнату, — сказала Ализа Круз, учитель математики в AHS, — но если они не смогут работать вместе, они, вероятно, не выберутся».

Происхождение квестов несколько оспаривается, но независимо от того, возникли ли они в Кремниевой долине в 2006 году или в Японии в 2007 году, они распространились по всему миру. Подобно физической версии видеоигр «побег из комнаты», их можно настроить так, чтобы они напоминали космическую станцию ​​или темницу.

Обычно они включают решение множества разнообразных головоломок, чтобы раскрыть тайну убийства, найти карту сокровищ или просто указать путь к ключам, которые позволят игрокам покинуть комнату.И все это должно происходить, пока часы отсчитывают отведенные 60 минут.

Круз, чьи студенты-геометры сотрудничали со студентами учителя биологии Тины Хотт над созданием квеста AHS, является допущенным наркоманом квестов.

«Я вообще люблю игры и головоломки, — сказал Круз. «Два года назад мой младший брат из Шарлотты (Северная Каролина) привел меня к одному, а теперь я побывал в пяти или шести разных городах».

Круз сразу же отмечает, что она ходит в города не только для того, чтобы посетить квесты, но когда она куда-то собирается, она всегда проверяет, есть ли она, и старается ехать.

Насколько студенты научились создавать квестовую комнату, они могут узнать еще больше, когда гейм-мастера наблюдают за группами, пытающимися найти решения, особенно о важности общения и внимании к деталям.

«Вчера (четверг) у нас была группа, которая не разговаривала друг с другом», — сказала второкурсница Виктория Рив. «Или они неправильно общались, поэтому они действительно расстроились и бросили курить до того, как истекло время».

Создание комнаты

Дизайн начался с поездки в Альбукерке, где студенты посетили квест-комнату в Нью-Мексико и в течение двух часов выбирали мозги владельцев.

«Затем, когда мы вернулись, студенты придумывали разные сценарии и рассказывали их друг другу», — сказал Круз. «Мы провели обзор идей, чтобы выбрать наиболее подходящие».

Версия AHS должна была включать темы геометрии и биологии. Он также включает искусство, созданное учащимися, сочетающее геометрию и анатомию. Каждый, кто проходит через комнату, должен подписать соглашение о неразглашении деталей — никаких предупреждений о спойлерах для будущих участников — но это не испортит впечатление, если будет сказать, что это искусство.

«На математическом факультете мы пытаемся продвигать идею о том, что есть идеи, которые являются привычкой математиков», — сказал Круз. «Критическое мышление, творческое мышление, аналитические способности, и студенты должны были использовать все это в этом проекте».

Квестовая комната также использовала «Привычки сердца и разума», которые являются ключевой частью общей философии средней школы Анимас, сказала она. Запоминаемые аббревиатурой БУМАГА, они олицетворяют настойчивость, защиту, перспективу, доказательства и уточнение.

«Это определенно потребовало много настойчивости и утонченности, — сказал Круз. «Студенты научились строить, вешать двери, пользоваться дрелью, рисовать, узнав, что кисти нужно чистить после покраски, иначе они высохнут. Мы хотели, чтобы это выглядело профессионально, поэтому построили и перестроили стену, покрасили и перекрасили ».

Большим подспорьем стал набор от Breakout EDU, в который входили несколько различных видов замков и другие предметы для создания головоломок.

Проект потребовал усилий от всех студентов, изучающих биологию и геометрию, и привлек других студентов государственной чартерной школы на основе обучения на проектах. Старший учитель изобразительного искусства и несколько ее учеников служили советниками, пара старших учеников разобрались с аудиовизуальной системой, а несколько учителей одолжили телевизоры, которые использовались в опыте, из своих комнат.

«Мы видели, как этот проект вдохновил учащихся, которые не обязательно участвуют в занятиях», — сказал Круз.«Вместе, как группа, они сформировали представление о том, каким может быть этот проект, и подтолкнули друг друга. Когда дети становятся старше, они забывают, как учиться, наблюдая, как другие люди совершают ошибки, но мы надеемся, что это вернуло их к жизни ».

По состоянию на последний игровой тест в пятницу, никто не завершил головоломку за отведенное время.

Круз не только научил студентов, но и многому научился.

«Я склонился к тому, чтобы отказаться от контроля, — сказал бывший учитель высоких технологий, — и я заново узнал, что могу доверять студентам принимать решения.Они вдохновляли, и они были вдохновлены ».

[email protected]

Привычки математика (PDF)

Квест «Геометрия анатомии» средней школы Анимас будет открыт для участников, чтобы попытаться сбежать в 17 и 18:30. С понедельника по пятницу на этой неделе и во время Общешкольной выставки с 16 до 20 часов. 12 мая. Комната оборудована в крыле Michael Ackerman Wing в школе, 20091 U.С. шоссе 160.

Посетите http://bit.ly/V9U0qb, чтобы зарегистрироваться, что можно сделать с помощью учетной записи Facebook или SignUpGenius. Учетную запись SignUpGenius можно создать при регистрации в квесте.

Escape ограничены восемью участниками для каждого временного раздела, а некоторые разделы уже заполнены. Хотя квестовая комната бесплатна, мы с благодарностью примем пожертвования в среднюю школу Анимас.

Для получения дополнительной информации звоните по телефону 247-2474.

Посетите

http://escaperoomdirectory.com/

онлайн, чтобы узнать о квестах по всему миру.

Сделайте любой рабочий лист в квестовой комнате в классе —

Использование квестов в классе — это очень увлекательный способ вовлечь ваших учеников в любую тему. Но вам не нужно тратить бесчисленные часы на его изготовление, также вам не нужно покупать замки и ящики.

Легко (почти) любой рабочий лист превратить в квест-комнату!

Если вы не знакомы с идеей квеста, позвольте мне объяснить.Представьте себя и своих ближайших друзей (добровольно) запертыми в комнате … Вам нужно разгадать тайну — и только шестьдесят минут, чтобы разгадать ее.

Вы обыскиваете комнату, находите подсказки и используете их, чтобы разблокировать новые подсказки — в конечном итоге завершая тайну и побег из комнаты.

компании Escape Room появляются повсюду — теперь есть даже одна в моем маленьком городке. И они дорогие! (по крайней мере, на зарплату этого учителя) Но люди готовы платить за опыт, потому что это очень весело.

Теперь новаторские и умные учителя по всей стране адаптировали идею создания квестов в классе.

В прошлом году я сделал квест-комнату для своих школьников-биологов для отделения экологии. Мне потребовалось больше месяца, чтобы все уладить. Это было очень сложно: просить, брать взаймы и умолять достать комплект замков и ящиков.

Но это было круто! Детям понравилось! Итак, я был полон решимости сделать еще хотя бы один в этом году.

Нет. Это было так сложно! Я струсил.

Однако я недавно видел, как другая учительница раскачивала супер-простую в изготовлении квест-комнату в классе, на установку которой у нее ушло всего пятнадцать минут — и даже не потребовались замки и ящики.

• цель — какая-то загадка, которую нужно разгадать, или цель, которую нужно достичь
• подсказок — серия головоломок или вопросов, которые нужно решить, по одной головоломке за раз, которые в конечном итоге приводят к цели
• что-то, что нужно разблокировать — кодовый замок или код доступа — ответы предоставлены подсказками, которые учащиеся решают по пути
• ограничение по времени (необязательно, но полезно) — учащиеся должны решить головоломки, открыть замки и достичь цели за установленный промежуток времени.Выбор использования таймера зависит от вашей группы студентов. Ограничение по времени может стимулировать мотивацию и сосредоточиться или может добавить слишком много стресса.

Я сделал квест-комнату для примера! Вам понадобится этот пятизначный код, чтобы пройти первую блокировку: 22331.

Ссылка на вашу квест-комнату находится внизу сообщения. Не стесняйтесь прыгать туда сейчас или читайте дальше, чтобы узнать, как сделать его первым!

Цель квеста в классе — это как предыстория для загадки или головоломки, которые ваши ученики пытаются разгадать. Он может быть настолько сложным или простым, насколько вы хотите.

Для моей «Экологической квест-комнаты» целью было найти топливную добавку, которая была спрятана для безопасного хранения ученым, создавшим ее.

Замечательно, если цель соответствует теме, которую изучают ваши ученики, но это не обязательно. Вопросы и головоломки, которые они решают, будут наполнены содержанием.

Может быть, ваши ученики находят потерянных сокровищ , спрятанных вымышленным (или историческим) персонажем.Возможно, они ищут детенышей исчезающих видов животных , разлученных со своей матерью.

Они могут найти разрушающую последовательность для искусственного интеллекта, пытающегося захватить класс, или лекарство от супервируса . Может быть, они стремятся победить плохих парней, чтобы найти амулет силы , который будет править миром!

Предыстория делает вещи более интересными, но это не обязательно. Цель может заключаться в том, чтобы просто дойти до конца и решить все головоломки.

Всегда весело найти и вернуть что-то осязаемое в конце комнаты побега. Спрятанное «сокровище» может быть конфетой или купоном на несколько дополнительных баллов.

Учащиеся могут найти фотографию потерянного детеныша животного или пластмассовое украшение. В конце может быть просто открытка с надписью «Поздравляю — у вас все получилось — отличная работа!».

Решение для каждой подсказки должно быть коротким словом (или серией случайных букв) или последовательностью чисел. Эти слова или числа откроют «замки», которые вы установили (подробнее о них чуть позже!), Что затем приведет учащихся к следующему замку.

Подсказки — это ваш контент — все, что вы хотите, чтобы ваши ученики изучали, анализировали или практиковали. Здесь мы берем этот старый, утомленный лист и превращаем его во что-то удивительное!

Найдите рабочий лист с вопросами с несколькими вариантами ответов, действительно ложными вопросами, соответствиями, диаграммами и / или заполните пустые поля. На листе сгруппируйте вопросы в наборы по четыре-пять вопросов в каждом.

Каждый набор вопросов становится подсказкой , которую ваши ученики должны расшифровать, чтобы получить код ключа, который откроет «замок».

Поскольку у вас уже есть рабочий лист и вопросы, вы можете создать квест-комнату менее чем за пятнадцать минут — легко!

Наборы вопросов с множественным выбором — самые простые в использовании для создания квестов в классе. Например, ваша первая подсказка может состоять из пяти вопросов с несколькими вариантами ответов.

Правильные ответы могут быть — A, C, D, A, B. Vola! Вы только что ввели ключевой код, который открывает первый замок — ACDAB!

Таким же образом можно использовать серию вопросов «верно / неверно» . При правильном ответе ученики получают код ключа от замка — TFTFF

Аналогично, вопросов на соответствие приводят к последовательности букв, которая может стать решением блокировки.

Другие типы вопросов:

Заполните поле или вопросы , которые содержат очень конкретный ответ из одного слова / фразы, также просты в использовании.Задайте четыре или пять вопросов и попросите учащихся заполнить ответы на каждый вопрос в квадратах, по одному квадрату на каждую букву, как в кроссворде.

Подчеркните или выделите определенное буквенное пространство. Когда учащиеся заполняют ответ, буква в подчеркнутом поле является частью ключевого кода . Учащиеся получат правильную подсказку, только если они правильно заполнили все поля для ответов.

Я использую этот тип подсказки, чтобы составить конкретное слово.Если вы хотите, чтобы ваши дети перемещались по комнате (или школьному кампусу), слово, которое они произносят, может быть местом, куда они могут отправиться за следующей подсказкой (комната миссис Сетзер! Фронт-офис! Компьютерная лаборатория!) по номерам можно отвести учеников в раздевалку или в классную комнату (комната № 224!).

вопросов по математике очень просто использовать в квесте в классе. Ответом на один-единственный сложный вопрос может быть ключевой код.

Или, для большей практики, попросите учащихся вводить ответы в квадраты, по одному числу в квадрате (как снова кроссворд), и подчеркивать конкретное поле для каждого ответа.Последовательность цифр становится ключевым кодом.

Диаграммы также могут быть преобразованы в коды ключей. Раздайте ученикам схему и попросите их пометить ее. Код клавиши может быть первой буквой каждой метки в порядке их нумерации.

Единственный тип вопроса, который нельзя использовать для создания ключевого кода, — это открытый вопрос. Они все еще могут быть частью квеста в классе, но по-другому. (Продолжайте читать, чтобы узнать, как!)

Хорошо, теперь, когда у нас есть куча подсказок и ключей от замков, нам нужны замки!

Конечно, вы можете использовать настоящие кодовые замки, которые открывают настоящие коробки, сумки или мусорные ведра.И они такие веселые! Но иногда средств на их покупку нет.

И иногда их слишком сложно обмануть и перенастроить между уроками! Они также иногда ненадежны. В прошлом году одна из моих групп застряла на последнем кодовом замке, который просто отказался открываться! Очень грустный.

Итак, мой лучший школьный друг, Google Forms, приходит на помощь. Google Forms — это то, что делает квест в классе! Вы собираетесь создать форму с серией блокировок, которая будет разблокирована только после того, как будет введен точный правильный ответ.

Связано: Использование технологий для обучения большему за меньшее время

Внизу этого поста приведен пример квеста, с которым вы можете поиграть! Не волнуйтесь, это легко сделать.

Вот как это настроить.

Сначала создайте вопрос и выберите «короткий абзац» в качестве типа вопроса. В приведенном здесь примере мой вопрос гласит: «Пятизначный замок»

Затем нажмите на три точки в правом нижнем углу вопроса и выберите «Response Validation» .Это предложит вам несколько вариантов для заполнения.

Первый вариант позволяет вам выбрать, какой тип ответа вы ищете. Так как мой вопрос — «Five Digit Lock», то выбор «числа» — это то, что мне нужно.

Если вы хотите, чтобы код комбинации был словом, вам нужно выбрать «текст».

Во втором разделе выберите «равно» в раскрывающемся меню. Это потребует от учащегося ввести именно ту серию цифр, чтобы «разблокировать» его.

В третьем поле введите последовательность цифр (или букв). Затем в последнем поле введите сообщение для ваших учеников, которое появится, если они ошибаются. «Попробуй еще раз!»

Убедитесь, что вы отметили кнопку «Обязательно» внизу вопроса. Это гарантирует, что учащиеся должны ответить правильно, прежде чем смогут перейти к следующему разделу!

Для следующего замка добавьте новый раздел , щелкнув параметр справа, который выглядит как две параллельные линии.Помещение каждой блокировки в отдельный раздел формы Google дает учащимся доступ только к одной блокировке за раз.

Студенты должны будут открыть каждой блокировки, прежде чем получить доступ к следующей . Так весело!

Что ж, это дает вам все, что вам действительно нужно, чтобы сделать квест в классе. Однако это еще не все, что вы можете делать с помощью Google Form!

Например,

• Добавьте вопросы по дополнительному содержанию. Это могут быть ваши краткие ответы на вопросы, которые нельзя использовать для кодов ключей. Студентам не нужно правильно их обучать, чтобы двигаться дальше, но он предоставит вам некоторые данные о том, насколько хорошо они учатся или запоминают.
• Вопросы для размышления или вопросы-мнения тоже подходят для этого.
• Может добавить что-нибудь совсем другое! Вызов! Отгадай загадку. Расшифруйте шифр (вот отличный список простых шифров!).
• Задайте вопрос другому учащемуся (какой у вас любимый вкус мороженого?) И запишите ответ в форме Google.
• Скажите им сделать что-нибудь глупое (или связанное с контентом) и сфотографируйте это!

Чтобы они могли загрузить изображение в форму Google, добавьте вопрос и выберите «загрузить файл» в качестве формата вопроса.

Опять же, ни одно из этих дополнений не является необходимым, но они могут сделать комнату побега более увлекательной и интерактивной!

** Совет для учителей! ** Всегда используйте кнопку «Просмотр», чтобы опробовать свою форму Google, ПРЕЖДЕ чем дать ее своим детям.Сделав это, я обнаружил СТОЛЬКО многих ошибок! Это особенно верно при создании сложных форм, таких как квест!

Когда вы отправляетесь в квест-комнату, ограничение по времени не является обязательным, но это делает жизнь более увлекательной! Необходимость разгадывать все подсказки за установленный промежуток времени является частью проблемы.

Ограничение по времени может быть очень полезным для ваших учеников, если вы чувствуете, что оно увеличит удовольствие и / или поможет им сосредоточиться.Это может помочь всему классу оставаться в одном темпе и предотвратить то, что все будут ждать, пока одна группа закончит.

Если у вас есть ограничение по времени, вам нужно подумать о наказании за то, что вы не финишируете. Может быть, они получают баллы в зависимости от процента выполненных задач. Или вы хотите, чтобы они закончили вне уроков?

Но вы должны знать своих учеников. Для некоторых ограничение по времени только добавит стресса и беспокойства.

Хотите увидеть пример того, как это будет выглядеть для ваших учеников? Вот квест-комната с обучением на каждый день, которую я сделал специально для вас! Вот как это будет выглядеть для ваших учеников.

Если вы хотите увидеть, как это выглядит на стороне учителя (и поиграться с ним), щелкните здесь. Вам будет предложено сделать копию, с которой вы можете поэкспериментировать и использовать по своему усмотрению!

Связанные : Вы влюблены в Google Формы? Создание квеста в классе — лишь один из семи новых способов использования Google Forms!

Хотите подписаться на этот блог и получать уведомления о публикации новых сообщений? Подпишитесь на Teach Every Day и получайте электронное письмо, когда будет опубликована следующая статья.

У вас есть отличные идеи для создания квестов? Вы когда-нибудь пробовали квест в классе? Что вы узнали из этого? Делитесь в комментариях!

Комната побега | Квесты для класса

Получите бесплатный квест для вашего класса.

Получите БЕСПЛАТНУЮ квест-комнату сейчас

Творчество и инновации * Критическое мышление и решение проблем * Общение и сотрудничество

Класс побега

Студенты соревнуются с другими командами, чтобы сбежать из класса до того, как часы обратятся к нулю.Один из наших суперзлодеев запер их в классе, но разместил в классе подсказки, чтобы они могли сбежать. Наши побеги разработаны в соответствии с конкретной учебной программой.

Да! Мы просто снова развлекали образование.

3 отличных продукта на выбор

Таинственный класс

Анонимный выбрал ваших учеников, чтобы помочь ему выяснить, кто из суперзлодеев «сделал это». Они должны ответить на ряд вопросов, основанных на конкретной учебной программе, чтобы получить подсказки и свидетельства.После того, как они откроют все улики и свидетельства, они должны разгадать тайну и выяснить, «кто это сделал».

Дружественное дистанционное обучение

Дружественное дистанционное обучение

The Hero Classroom

Студентов пополнили ряды Анонимных. Они будут участвовать в театральной истории, рассказанной с помощью текстов, видео, изображений, видеозвонков и телефонных звонков. Им придется придумать, как помочь нуждающемуся сбежать от одного из наших суперзлодеев.Студенты должны будут ответить на вопросы, основанные на конкретной учебной программе, чтобы успешно спасти положение и победить Суперзлодея…. или нет.

Узнайте для себя, почему The Escape Classroom — самый увлекательный обучающий ресурс, доступный сегодня.

Мастер побега — НОВАЯ ПОРОДА ПЕДАГОГОВ.

Мятежник. Законодатель моды. Лидер. Деятель другого.

Мастера побега слышали те же старые испытанные методы обучения, которым обучали в башнях из плюща от старых пыльных профессоров.

И ОНИ КРИЧАТ «МЕНЯТЬСЯ».

Escape Masters считают, что делать одно и то же из года в год и ожидать разных результатов — плохое руководство.

ПОЭТОМУ ОНИ ОТКАЗЫВАЮТСЯ СЛЕДОВАТЬ.

Мастера побега: скучный побег. Осмелиться быть другим. Откажитесь следовать за стадом. Бунтарь.

Присоединяйтесь к восстанию и делайте разные

Математика и естественные науки: цифровые математические квесты

Независимо от того, работают ли ваши ученики вместе или независимо, онлайн или лично, я хотел сделать несколько супер-увлекательных, не требующих подготовки цифровой математики занятия, которые доставляют удовольствие учащимся и избавляют от необходимости ставить оценки.Эти новые квесты с цифровыми математическими самопроверками созданы в Google Forms без внешних ссылок. Указания просты — введите 4-буквенный код, чтобы перейти к следующей загадке , — чтобы учащиеся могли сосредоточить всю свою энергию на математике.

«В прошлом мне очень нравилось использовать квест-комнаты со студентами, и я боролся с тем, как реализовать эти типы действий виртуально. Это упражнение отлично помогло объединить концепции и навыки параллельных и перпендикулярных линий с забавой. и интрига квеста! »- Элизабет Дж.

«Я использовал квесты от других авторов. Мне они нравятся, но были некоторые проблемы с цифровыми. Мои ученики не могли получить доступ к веб-сайту, чтобы узнать, был ли у них правильный код. Они этого не делают. Я не могу этого сделать с этим. Все в формах Google. Это была моя палочка-выручалочка. Я с нетерпением жду возможности приобрести еще больше таких квестов ». -Кэтлин С.

«Мне нравится оживлять свое обучение, предлагая своим ученикам различные задания по математике.Учащимся предлагается решать математические задачи, и они остаются вовлеченными. Я рассчитываю их увидеть, кто первым сможет разблокировать замки. Захватывающе! «- Лейнани К.

» Это используется, как мы говорим, в качестве урока удаленного обзора. Страницы анкеты были красочными, интересными и хорошо составленными. Мне нравится, что я тоже могу редактировать, это всегда плюс. Простота в использовании и такая экономия времени ». — Mamma Bear Math

Этот отзыв заставил меня с удовольствием прочитать, потому что это было именно то, на что я надеялся, эти цифровые математические квест-комнаты будут — привлекательными, легкими для всех и экономящими время для учителей.

Как работают эти цифровые математические квесты?

Каждая цифровая математическая квест-комната построена в Google Forms без внешних ссылок. Все размещено в форме Google. Таким образом, вам не придется беспокоиться о том, что ссылка будет заблокирована или сломана.

Каждая квест-комната состоит из 5 головоломок. В каждой головоломке нужно ответить по 4 вопроса. Как только учащиеся ответят на 4 вопроса, они найдут свои ответы в таблице вариантов ответов. Это сгенерирует 4-буквенный код. Если ввести этот код в поле для ответа на форме, замок будет разблокирован.В каждом квесте есть 5 замков, которые нужно разблокировать. Каждая квест-комната оснащена проверкой ответа , что дает учащимся мгновенную обратную связь, которую они любят, и избавляет вас от необходимости оценивать.

Учителя рассылают эти цифровые математические квесты учащимся, работающим в группах и в комнатах для обсуждения, а также учащимся, работающим независимо.

Вы можете просмотреть все 60+ цифровых математических квестов здесь:

ЦИФРОВЫЕ МАТЕМАТИЧЕСКИЕ Квесты

Важное примечание: Вы все равно можете назначить эти цифровые квесты, если вы не в школе Google. Если у ваших учеников нет логинов Google, но у вас есть доступ к вашему собственному Google Диску, вы все равно можете назначить эти цифровые математические квесты студентам. Студентам не нужно входить в Google или даже иметь учетные записи Google. Если вы можете разместить квест на своем собственном Google Диске и Google не заблокирован на устройствах учеников, вы можете отправлять его ученикам независимо от того, какую платформу обучения использует ваша школа. Инструкции по отправке квест-комнаты студентам находятся в PDF-файле квест-комнаты (ссылка на цифровую квест-комнату также встроена в PDF-файл).

На данный момент я сделал более 60 цифровых математических квестов, и их будет еще больше. Ниже приведены ссылки на некоторые из них. Вы можете просмотреть весь список здесь.

Сложение и вычитание целых чисел Digital Math Escape Room

Slope Digital Math Escape Room

Fraction Review Digital Math Escape Room

GCF и LCM Digital Math Escape Room

Квадратные задачи со словами и диапазон значений Digital Math Escape Room

Цифровая математическая квест-комната

Графические линейные уравнения Цифровая математическая квест-комната

Координатная плоскость Цифровая математическая квест-комната

Решение двухэтапных уравнений Цифровая математическая квест-комната

Теорема Пифагора Цифровая математическая квест-комната

День Пи Цифровая математическая квест-комната для Школа

> Просмотрите все квесты по цифровой математике здесь.

«Это одна из величайших покупок, которые я когда-либо покупал у TpT» — Kristi T

«ЛУЧШИЙ НАБОР КОГДА-ЛИБО. Мои ученики говорят, что им нравятся проблемы в этих побегах. В этом году я использовал множество побегов, и мне очень нравится, что они не могут отправить задание, пока не будут даны правильные ответы на все вопросы. Большое вам спасибо за создание этого ресурса! » -Лори М.

Связь между эндосомным выходом LNP-мРНК и загрузкой в ​​EV для транспортировки в другие клетки

Формулировка и характеристика LNP

DLin-MC3-DMA и DLin -DMA LNP, содержащие модифицированную hEPO-мРНК (858 нуклеотидов) (5meC,) (Trilink), получали путем осаждения мРНК четырьмя различными липидными компонентами, как описано ранее ⁶⁴ . Эти компоненты состоят из ионизируемого липида; DLin-MC3-DMA или DLin-DMA, которые являются ионизируемыми (катионными) при низком pH, два вспомогательных липида (DSPC и холестерин) и пегилированный липид (DMPE-PEG2000).Раствор hEPO-мРНК в воде получали смешиванием мРНК, растворенной в MilliQ-воде, 100 мМ цитратном буфере pH = 3 и MilliQ-воде, с получением раствора 50 мМ цитрата. Липидные растворы в этаноле (99,5%) были приготовлены с композицией из четырех липидных компонентов [ионизируемый липид: холестерин: DSPC: DMPE-PEG2000] = 50: 38,5: 10: 1,5 мол.% И общее содержание липидов 12,5 мМ. Растворы мРНК и липидов смешивали в микрофлюидной системе смешивания NanoAssemblr (Precision Nanosystems) при объемном соотношении смеси Aq: EtOH = 3: 1 и постоянной общей скорости потока 12 мл / мин.Во время смешивания соотношение между атомами азота ионизируемого липида и атомами фосфора в цепи мРНК составляло 3: 1. Если были приготовлены «пустые» LNP, то есть LNP без какой-либо мРНК, фаза этанола смешивалась только с 50 мМ цитратным буфером pH = 3. Первоначальные 0,35 мл и последние 0,05 мл приготовленного раствора LNP были выброшены, а остальная часть Объем собирали как фракцию образца.

В некоторых препаратах LNP, Cy5-EGFP-мРНК (996 нуклеотидов) (5meC,) (Trilink) загружали вместо мРНК hEPO для отдельных экспериментов.

Для характеристики сформулированных LNP после приготовления 25 мкл фракции образца вводили в 975 мкл 10 мМ фосфатного буфера (pH 7,4) и использовали для измерения среднего по интенсивности размера частиц (Z-среднее) на ZetaSizer (Malvern Instruments Inc.). Фракцию образца немедленно переносили в диализную кассету Slide-a-lyzer G2 (10000 MWCO, Thermo Fischer Scientific Inc.) и диализовали в течение ночи при 4 ° C против PBS (pH 7,4). Объем буфера PBS был в 650-800 раз больше объема фракции образца.Фракцию образца собирали и из этого объема вводили 25 мкл в 975 мкл 10 мМ фосфатного буфера (pH 7,4) и снова измеряли размер частиц (размер частиц после диализа). Конечную концентрацию мРНК и эффективность инкапсуляции (EE) измеряли с помощью набора Quant-it Ribogreen Assay Kit (Thermo Fischer Scientific).

Культура клеток

Линия эпителиальных клеток человека HTB-177 (NCI-h560), приобретенная в АТСС, культивировалась в соответствии с руководящими принципами АТСС. Среда для выращивания RPMI-1640 (Sigma Aldrich), содержащая бикарбонат натрия, без пирувата натрия и HEPES, была дополнена 10% -ной обедненной экзосомами фетальной бычьей сывороткой (FBS) (Sigma), 1% l-глутамином (Thermo Fisher Scientific) и 1% пенициллин-стрептомицин (Thermo Fisher Scientific) при 37 ° C в присутствии 5% CO ₂ .Инактивированный нагреванием FBS истощали экзосомами путем ультрацентрифугирования при 120000 × g в течение 2 часов при 4 ° C на ультрацентрифуге Optima L-100 XP с ротором 70Ti (Beckman Coulter), и обедненный экзосомами супернатант фильтровали через фильтры 0,2 мкм. Свежие лейкоциты от здоровых доноров получали из больницы Sahlgrenska University (Гетеборг, Швеция), а мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) выделяли центрифугированием в градиенте плотности. PBMC культивировали в полной ростовой среде RPMI-1640 с добавлением L-глутамина, заменимых аминокислот, пирувата натрия, 1% пенициллин-стрептомицина, β-меркаптоэтанола, 10% обедненного экзосомами FBS и стимулировали козьим антителом против человеческого IgA / Фрагменты IgG / IgM F (ab ‘) 2 2.5 мкг / мл (Jackson ImmunoResearch Laboratories) и ацетат форбола миристата (PMA) 1 мкг / мл (InvivoGen).

Доставка мРНК hEPO в эпителиальные клетки через LNP

Клетки HTB-177 высевали с плотностью 3 × 10 ⁶ клеток / 175 см ^{2 колбы} в 30 мл ростовой среды. После инкубации (адаптации) в течение 24 часов клетки обрабатывали 1 мл DD- или MC3-LNP, содержащих 100 мкг мРНК hEPO / флакон в присутствии 1% сыворотки крови человека (Sigma Aldrich), которые вводили тремя разными способами. дозы; День (1) 200 мкл LNP (20 мкг мРНК), день (2) 400 мкл LNP (40 мкг мРНК), день (3) 400 мкл LNP (40 мкг мРНК) и собирают через 96 часов.Клетки, обработанные равным объемом (200 мкл, 400 мкл, 400 мкл) соответствующих LNP с пустым DD или пустым MC3 (без мРНК), а также необработанные клетки использовали в качестве отрицательного контроля.

Обнаружение и количественная оценка мРНК hEPO в эпителиальных клетках

Общую РНК из клеток HTB-177 выделяли с использованием набора для выделения РНК miRCURY ^TM — Cell and Plant (Exiqon) в соответствии с инструкциями производителя. Суммарную РНК количественно определяли с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific), а качество РНК (соотношение 230/260) оценивали с помощью NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific).Исходя из выхода РНК, от 0,25 до 1 мкг общей клеточной РНК было преобразовано в кДНК с использованием набора кДНК высокой емкости (Thermo Fisher Scientific). 100 нг кДНК использовали для количественного определения мРНК hEPO с использованием анализа зонда TaqMan (Applied Biosystems; идентификатор анализа Hs01071097_m1) на приборе ViiA ™ 7 (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя. Для построения стандартной кривой 2 мкг чистой мРНК hEPO подвергали обратной транскрипции и полученную кДНК серийно разводили (в десять раз) для получения семи стандартов (наивысшая точка: 100 нг), которые обрабатывали в трех технических повторностях.Клеточную кДНК использовали для анализа мРНК hEPO, абсолютное количественное определение которого было интерполировано по стандартной кривой с минимальным значением R ² > 0,975. GAPDH (ID анализа Hs02758991_g1) использовали в качестве внутреннего контроля.

Выделение внеклеточных везикул

EV выделяли из кондиционированной культуральной среды клеток, обработанных LNP, и отрицательных контролей. Вкратце, для удаления клеточного дебриса культивированную среду центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут при 4 ° C на центрифуге 4K15 (Sigma), и полученный супернатант собирали и ультрацентрифугировали при 60000 × g в течение 35 минут при 4 ° C с последующей фильтрацией через 0 ° C.2 мкм фильтры для получения электромобилей диаметром менее 200 нм. Наконец, отфильтрованный супернатант ультрацентрифугировали с использованием ультрацентрифуги Optima L-100 XP с ротором 70 Ti (Beckman Coulter) при 120 000 × g в течение 70 мин при 4 ° C для осаждения EV. Осадки EV ресуспендировали в 50–80 мкл PBS. EV, секретируемые после эндоцитоза LNP, были определены как эндо-EV.

Характеристика EV по общей РНК и содержанию белка

EV были определены количественно на основе их общей концентрации белка и общей РНК.2 мкл суспензии EV, инкубированные вместе с 2 мкл реагента для экстракции белка млекопитающих M-PER (Thermo Fisher Scientific), обрабатывали ультразвуком на ультразвуковом очистителе (VWR) в течение 5 минут при 54 ° C для получения экстрактов EV. Белки EV были количественно определены с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с протоколом производителя.

Суммарную РНК из EV выделяли с использованием набора для выделения РНК miRCURY ^TM — Cell and Plant (Exiqon) в соответствии с инструкциями производителя. Общая РНК была определена количественно с помощью Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific) и качество РНК (соотношение 230/260) оценивали с помощью NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific).

Характеристика EV по размеру и концентрации

mc3-EV (т.е. эндо-EV, выделенные из клеток, обработанных MC3-LNP) и необработанные EV оценивались по их размеру (нм) и концентрации (частиц / мл) с помощью LM10 ( Malvern Panalytical), оборудованный камерой Hamamatsu C11440-50B / A11893-02. Перед анализом частицы разбавляли в 500 раз 0.1 мкМ отфильтрованный PBS (Sigma) для уменьшения количества частиц в поле зрения ниже 180 / кадр. Три независимых измерения (биологические повторы) были выполнены в режиме рассеяния. Показания измерений для каждой EV-выборки были сняты в пяти захватах по 60 с каждая со скоростью 25 кадров в секунду (fps), при настроенном уровне камеры (10–16) и пороге обнаружения (5–15) в зависимости от индивидуального образца и ручного мониторинга. температуры. Размытие и максимальная дистанция прыжка были установлены на авто. Считывание, сбор и анализ данных были выполнены с использованием программного обеспечения NanoSight Fluorescent NTA LM10 версии 3.3 (Малверн Паналитикал).

Обнаружение экзогенной hEPO-мРНК, полученной из LNP, в EV

МРНК hEPO в эндо-EV после введения LNP и в соответствующих отрицательных контролях количественно определяли с помощью qPCR. Исходя из выхода РНК, от 0,25 до 1 мкг общей EV-РНК было преобразовано в кДНК с использованием набора кДНК высокой емкости (Thermo Fisher Scientific). Сотни нанограммов кДНК использовали для количественного определения мРНК hEPO с использованием анализа зонда TaqMan (Applied Biosystems; идентификатор анализа Hs01071097_m1) на приборе ViiA ™ 7 (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя.Для построения стандартной кривой 2 мкг чистой мРНК hEPO подвергали обратной транскрипции и полученную кДНК серийно разводили (в десять раз) для получения семи стандартов (наивысшая точка: 100 нг), которые обрабатывали в трех технических повторностях. КДНК EV использовали для анализа мРНК hEPO, абсолютное количественное определение которого было интерполировано по стандартной кривой с минимальным значением R ² > 0,975. GAPDH (ID анализа Hs02758991_g1) использовали в качестве внутреннего контроля.

Обнаружение маркеров EV и мРНК в CD63 / CD9-положительных EV

Клетки HTB-177 обрабатывали MC3-LNP, содержащими 100 мкг мРНК Cy5 (Trilink), как описано выше.Необработанные клетки были включены в качестве контроля. Через 96 ч общие EV выделяли с помощью UC (предварительное обогащение) и количественно оценивали. После предварительного обогащения CD63 / CD9-положительные EV выделяли с использованием метода, основанного на аффинности, и оценивали на наличие мРНК Cy5 с помощью FACS. Во-первых, реагент для выделения / обнаружения экзосомы CD63 человека для среды для культивирования клеток (Thermo Fisher Scientific) был использован для иммобилизации EV CD63 ⁺ на магнитных бусинах в соответствии с инструкциями производителя. В реакции связывания 20 мкл шариков инкубировали с 25 мкг или 50 мкг общих mc3-EV или общих необработанных EV.В качестве отрицательного контроля 20 мкл гранул инкубировали с эквивалентным объемом PBS (без EV). После иммобилизации EV CD63 ⁺ эти EV окрашивали мышиным антителом против PE-CD9 человека (BD Pharmingen ™, номер по каталогу 555372), разведенным 1: 6 в соответствии с инструкциями производителя. EV были получены на системе BD FACSLyric (BD Biosciences), были обнаружены мРНК CD9 и Cy5, и данные были проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo (TreeStar Inc.). Эксперимент проводили в биологической дубликате.Стратегия стробирования для гранул с помощью анализа FACS представлена ​​на дополнительном рис. 11а.

Анализ прямого переноса мРНК из LNP в EV

EV, выделенных из необработанных клеток, инкубировали с MC3-LNP или DD-LNP, содержащими hEPO-мРНК (в PBS в отсутствие клеток) LNP и EV были непосредственно смешаны и инкубированы ( в отсутствие клеток) при 37 ° C с использованием различных пропорций LNP и EV. Две разные пропорции EV, не использованные в любом предыдущем лечении, инкубировали с 300 мкл DD-LNP или MC3-LNP (39 мкг мРНК hEPO) в течение 2 часов в 30 мл PBS при 37 ° C.В первой установке соотношение между EV и LNP составляло 200 мкг EV + 300 мкл LNP (39 мкг мРНК hEPO), тогда как во втором условии соотношение составляло 50 мкг EV + 300 мкл LNP (39 мкг мРНК hEPO). После 2 ч инкубации с LNP-hEPO-mRNA, EV были повторно выделены ультрацентрифугированием, общая РНК из EV была выделена, и присутствие мРНК hEPO было проанализировано с помощью qPCR, чтобы оценить, осуществляется ли прямой перенос мРНК hEPO из LNP в EV. произошло. В качестве отрицательного контроля эквивалентные объемы DD-LNP или MC3-LNP инкубировали в PBS без EV и ультрацентрифугировали.В качестве положительного контроля в клетки вводили mc3-LNP или DD-LNP, содержащие hEPO-мРНК, и выделяли EV (так называемые mc3-EV или dd-EV) и мРНК анализировали с помощью qPCR. Эксперимент проводили в трех биологических повторностях. Данные представлены в виде процента мРНК hEPO, обнаруженной в EV, относительно введенного количества hEPO-мРНК, доставленной LNP в клетки, или количества hEPO-мРНК, непосредственно смешанного с EV. Показаны средние значения со стандартным отклонением (SD) повторов.

Анализ защиты EV-мРНК

Клетки HTB-177 обрабатывали MC3-LNP, содержащими 100 мкг hEPO-мРНК, как описано выше.Необработанные клетки были включены в качестве контроля. Через 96 часов ЭВ были изолированы и количественно определены. Во-первых, чтобы оценить эффективность активности РНКазы A (Thermo Fisher Scientific), 280 нг чистой hEPO-мРНК (Trilink) инкубировали с РНКазой A (0,5 мкг / мкл) или с равным объемом PBS при 37 ° C. ° C в течение 20 мин. Затем 200 мкг mc3-EV обрабатывали РНКазой A в тех же условиях. В качестве отрицательного контроля 200 мкг mc3-EV и 150 мкг необработанных EV инкубировали в тех же условиях, за исключением того, что РНКаза A была заменена PBS.После инкубации общую РНК из EV выделяли с использованием набора для выделения РНК miRCURY ^TM Kit-Cell and Plant (Exiqon). HEPO-мРНК количественно определяли с помощью кПЦР для оценки влияния РНКазы A на содержание hEPO-мРНК, если она присутствует вне EV. Эксперименты проводили в трех биологических повторностях.

Градиентный UPLC для анализа ионизируемых липидов в EV

Фракцию EV использовали для исследования присутствия ионизируемых липидов, производных LNP, в EV. От пяти до десяти микролитров каждого образца EV i.е. mc3-EV и dd-EV (полученные из клеток, обработанных MC3 и DD-LNP, соответственно) разводили в 50 раз PBS и дополнительно разбавляли 1 + 1 смесью 2% мас. / об. Triton® X-100 в Буфер Трис / ЭДТА. Образцы инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут, а затем вводили в систему Acquity Ultra Performance LC, соединенную с детектором Single Quad, SQD (Waters, Milford). Аналитическая колонка представляла собой Waters Acquity UPLC® CSH C18, 1,7 мкм, 2,1 × 100 мм, выдерживаемая при 60 ° C. Скорость потока составляла 0,50 мл / мин при использовании подвижной фазы 0.1% муравьиной кислоты в воде (A) и 0,1% муравьиной кислоты в равной смеси ацетонитрила и изопропилового спирта (B). Был применен градиентный прогон, при котором 10% B через 0,0 мин увеличивалось до 85% B через 1,0–5,0 мин и поддерживалось на уровне 85% B до 7,5 мин. Стадия промывки 99% B при 7,6–9,5 мин была включена в градиентный прогон. Затем 10% B применяли для кондиционирования с 9,6 до 12,0 минут. Разделение между основным пиком Triton X-100 и катионными липидами было хорошим в этих условиях со временем удерживания Triton X-100, равным 5.1 мин, DLin-DMA 6,3 мин и DLin-MC3-DMA 6,5 мин. Количественный анализ проводили с использованием внешних стандартных растворов DLin-DMA и DLin-MC3-DMA, растворенных в этаноле 99,5%, по крайней мере для пяти различных концентраций, охватывающих ожидаемые концентрации образца с хорошей корреляцией каждой стандартной кривой. SQD запускали с использованием электрораспыления в позитивном режиме и настраивали с помощью автонастройки с раствором DLin-MC3-DMA. Регистрацию катионных липидов производили с использованием одноионной регистрации (SIR) при М + 1 для каждого катионного липида.

Наконец, молярное отношение ионизируемого липида к нуклеотидам мРНК hEPO (ионизируемый липид: мРНК) определяли как в EV, так и в LNP. Эксперименты проводились по крайней мере в шести биологических повторностях как для mc3- и dd-EV, так и для их соответствующих LNP.

Количественное определение белка hEPO

После обработки LNP кондиционированный клетками супернатант собирали и сохраняли для обнаружения белка hEPO. Суммарные клеточные белки экстрагировали из клеточного лизата с использованием 500 мкл реагента для экстракции белков млекопитающих M-PER (Thermo Fisher Scientific) в присутствии 1% смеси ингибиторов остановки протеазы (Thermo Fisher Scientific).Вкратце, клетки осторожно встряхивали на трехмерном био-качалке в течение 10 минут при 4 ° C и центрифугировали при 14000 × g в течение 10 минут для осаждения клеточного дебриса, а полученный супернатант (содержащий белки) переносили в новый трубка. Параллельно культивированный супернатант центрифугировали при 3000 × g в течение 15 минут при 4 ° C на центрифуге 4K15 (Sigma) для удаления клеточного дебриса и выделяли EV. Для создания экстрактов белка EV 2 мкл суспензии EV инкубировали вместе с 2 мкл реагента для экстракции белка млекопитающих M-PER и обрабатывали ультразвуком на ультразвуковом очистителе (VWR) в течение 5 минут при 54 ° C.Общие белки из всех образцов (кондиционированный супернатант, клеточный лизат и EV лизат) количественно определяли с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific). Для обнаружения белка hEPO использовали набор Erythropoietin ELISA Kit (STEMCELL Technologies, номер по каталогу 01630) в соответствии с инструкциями производителя. Было использовано пятьдесят микролитров общего раствора белков, и уровни белка hEPO были рассчитаны в соответствии с относительной стандартной кривой как мЕд / мл. Концентрация была преобразована в фг / мл с использованием преобразования (119mU = 1 нг) и нормализована к общему количеству клеток.

Влияние LNP на рост клеток, РНК и содержание белка

Чтобы определить влияние LNP на поведение клеток и их устойчивость к лечению LNP, оценивали время генерации клеток, общую клеточную РНК, общее количество внутриклеточных белков и секретируемых белков. рассчитано после 96-часового периода лечения DD- или MC3-LNP. Влияние LNP на EV также было исследовано путем количественной оценки EV, общей EV-РНК и количества белка EV против лечения LNP.

Время генерации клеток ((G), время (в часах) для удвоения популяции клеток) было рассчитано на основе разницы между количеством клеток в начале и в конце интервала обработки (delta #cells я.е. ΔN) по следующей формуле:

$$ \ begin {array} {l} G = t / n \\ t = {\ mathrm {LNPs}} \, {\ mathrm {administrator}} \, {\ mathrm { interval}} \, \ left (h \ right) \\ n = {\ mathrm {log}} \, \ left ({n. \, {\ mathrm {cells}} \, {\ mathrm {post — администрирование}) }} \ right) — {\ mathrm {log}} \, \ left ({n. \, {\ mathrm {cells}} \, {\ mathrm {до администрирования}}} \ right) / {\ mathrm { log2}} \ end {array} $$

Вариации общей РНК в клетках и в EV, а также общего белка в EV, общих белков в клетках и в культуральном супернатанте были нормализованы до соответствующего ΔN.

Доставка мРНК hEPO в эпителиальные клетки человека через EV

Клетки HTB-177 высевали с плотностью 5 × 10 ⁶ клеток / 175 см ^{2 колбы} и культивировали в полной среде RPMI-1640. Шестьсот микрограммов mc3-EV (700 нг мРНК hEPO), которые были выделены из клеток, обработанных MC3-LNP, и 600 мкг dd-EV (1100 нг мРНК hEPO), выделенных из клеток, обработанных DD-LNP, растворяли в RPMI-1640. среду и различные дозы этих ЭВ переносили в клетки-реципиенты в независимых экспериментах в течение 2 дней: 1-й день — 300 мкг и день 2 — 300 мкг (в двух разделенных на время дозах по 150 мкг каждая через 8 ч).Пустые EV (без мРНК hEPO) и EV из необработанных клеток доставляли в клетки-реципиенты в качестве контроля. Через 48 ч клетки и культивированный супернатант собирали; Была выделена общая РНК, и мРНК hEPO и белок hEPO были оценены с помощью количественной ПЦР и ELISA, соответственно. Эксперимент проводили в двух независимых биологических повторностях.

Доставка мРНК цианина 5 в клетки через эндо-ЭВ

Один мл DD-LNP, содержащих флуоресцентную мРНК Cy5, был доставлен в клетки HTB-177 в различных дозах (200, 400, 400 мкл), за исключением того, что 1 мл LNP содержал 76 мкг флуоресцентной мРНК Cy5 / флакон (что в случае мРНК hEPO составляло 100 мкг / мл).Через 96 часов после введения LNP кондиционированную среду (супернатант) собирали и использовали для выделения EV. Пустые DD-LNP и необработанные клетки использовали в качестве контроля. Клетки HTB-177 и иммунные клетки, такие как B-клетки, T-клетки и моноциты, очищенные от PBMC, высевали с плотностью 2 × 10 ⁵ клеток / лунку и культивировали в 200 мкл среды для культивирования в 96-луночном круглом дне. планшеты и инкубировали в течение ночи при 37 ° C, 5% CO ₂ . Через 24 часа стимуляции культивированных клеток 78 мкг dd-EV, содержащих мРНК Cy5, в 25 мкл раствора PBS были доставлены в клетки-реципиенты.В качестве контрольных анализов пустые dd-EV и EV из необработанных клеток доставляли в клетки или клетки, оставшиеся необработанными. После 5, 24 и 48 часов обработки EV клетки собирали и окрашивали для определения поверхности моноклональными антителами (mAb) BV421 против CD19 (B-клетки), CD3 (T-клетки) и CD14 (моноциты) (Becton-Dickinson Biosciences). ), которые были разбавлены 1:20. Клетки собирали на FACSVerse (BD Biosciences), мРНК Cy5 определяли на основе флуоресценции в каждом типе клеток, и данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar Inc.). Стратегия стробирования для клеток с помощью анализа FACS представлена ​​на дополнительном рис. 11b, c.

Влияние pH на высвобождение мРНК hEPO из LNP

MC3-LNP, содержащие мРНК hEPO с концентрацией 0,011 мг / мл, инкубировали в 10 мМ лимонной кислоте -Na ₂ HPO ₄ буферных растворах с 150 мМ NaCl различных Среда с pH (pH 7,4, 6,6 и 5,8) при 37 ° C в спокойных условиях. Общее количество мРНК измеряли в нулевой момент времени, используя 0,125 мМ TritonX-100 (VWR Proteomics Grade) и 0.125 мМ додецилсульфат натрия (Sigma) в тесте RiboGreen, чтобы можно было рассчитать фракцию высвобожденной мРНК. Для оценки доли мРНК, высвобождаемой из LNPs при различных значениях pH, свободное количество мРНК анализировали с помощью набора для анализа реагентов Quant-iT RiboGreen RNA Reagent Assay (Thermo Fisher Scientific) с использованием люминесцентного спектрометра Perkin Elmer LS55 (например: 480 нм, em: 525 нм).

Перенос мРНК hEPO через EV и MC3-LNP in vivo

Экспериментальные процедуры были одобрены (номер этической заявки 83-2015) Региональным комитетом по этике лабораторных животных Гетеборга, Швеция.Все процедуры соответствуют шведскому Закону о благополучии животных и нормативным актам SJVFS 2012: 26. Самки мышей C57BL6 / NCrl ( n = 36) в возрасте 9–10 недель были приобретены в лаборатории Charles River, Германия и размещены в помещении для животных. в Astra Zeneca, Mölndal, Швеция. Мышей содержали группами по четыре мыши в клетке в стандартных условиях (21 ° C RT, 12:12 ч цикл свет-темнота, влажность воздуха 45–55%) с доступом к обычной диете (R70, лактамин AB) и воде. вволю. Обеспечено обогащение окружающей среды (картонные коробки, деревянные шпатели для языка и хлопковые подушечки для гнезд).100 мкл EV, полученных из MC3-LNP, или MC3-LNP, содержащих равную дозу 1,5 мкг мРНК hEPO, вводили мышам внутривенно ( n = 4 на группу). Контрольным мышам вводили 100 мкл PBS. Образцы крови собирали у групп ( n = 4) мышей с помощью микроспробирования Vena Saphena через 2, 5 и 24 ч после инъекции EV и LNP. Образцы крови, собранные в капиллярные пробирки, предварительно обработанные ЭДТА, объемом 35 мкл, центрифугировали при 1700 × g для сбора плазмы, которую хранили замороженной при -86 ° C до времени проведения анализа.После 5, 24 и 96 часов инъекции группы мышей были прекращены для сбора органов. Мышам вводили седативную терапию изофлурановой анестезией и производили кровотечение из орбитального синуса с последующим разрезанием сердца. Затем собирали целые органы (печень, почки, селезенку, поджелудочную железу, сердце, тимус, легкие и мозг), мгновенно замораживали в жидком азоте и хранили при -86 ° C до времени проведения анализа.

Обнаружение белка ЕРО человека в плазме мыши

Для анализа белка hEPO в плазме после доставки мРНК hEPO через MC3-LNP и mc3-EV на платформе Gyros был разработан анализ hEPO.Улавливающее антитело (3F6, диагностика MAIIA) биотинилировали согласно вкладышу набора с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin (Thermo Scientific). Детектирующее антитело (7D3, диагностика MAIIA) было помечено Alexa 647 с использованием набора для маркировки моноклональных антител (Thermo Scientific). Белок hEPO (собственный) использовали для построения стандартной кривой в буфере Rexxip A (Gyros Protein Technologies) в диапазоне от 12,2 пг / мл до 50 нг / мл. Перед анализом образцы плазмы мышей разбавляли 1: 1 (об: об) в буфере Rexxip A-max (Gyros Protein Technologies).Образцы анализировали на Gyrolab Bioaffy 1000 CD (Gyros Protein Technologies) с прибором Gyrolab (рабочая станция Gyrolab xP, Gyros Protein Technologies). Для стандартной кривой использовалась 5-параметрическая аппроксимация кривой. Все стандарты и образцы имели CV ниже 10%.

Обнаружение человеческого белка ЭПО в тканях мыши

Общий белок из органов экстрагировали с помощью реагента для экстракции белка млекопитающих M-PER (Thermo Fisher Scientific) в присутствии 1% коктейля ингибиторов протеазы остановки (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя .Вкратце, 20–70 мг ткани лизировали в 200–350 мкл буфера для лизиса (в зависимости от веса ткани) с добавлением ингибиторов протеаз (Thermo Fisher Scientific) в Tissue LyserII (Qiagen) в течение 3-5 минут на максимальной скорости. (30 Гц) и центрифугировали при 10000 × g в течение 15 минут при 4 ° C для удаления остатков ткани. Полученный супернатант использовали для количественного определения белка с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific). Пятьдесят микролитров общего белка анализировали для обнаружения белка hEPO с использованием набора Erythropoietin ELISA (STEMCELL Technologies, cat.нет. 01630) в соответствии с инструкциями производителя. Количество белка hEPO (нг) в каждом органе нормализовали по относительной массе органа (г).

Анализ цитокинов в плазме мышей

После внутривенного введения MC3-LNP и mc3-EV концентрации цитокинов мыши в плазме измеряли с помощью набора магнитных шариков MILLIPLEX® MAP Mouse Cytokine компании EMD Millipore (# MCYTOMAG-70K, Merck KGat, Darmst ) для одновременного количественного определения IL-6, KC, MCP-1, RANTES, TNFα, IFNγ, IL-1β и IP-10.Образцы сначала разбавляли 1: 2 буфером для анализа, а затем вместе со стандартами и QC помещали в 96-луночный планшет. Добавляли раствор, содержащий шарики. Гранулы представляли собой магнитные микросферы, каждая из которых была покрыта специфическим антителом. Смесь инкубировали в течение ночи при 4 ° C, а затем реакционную смесь инкубировали с конъюгатом стрептавидин-PE для завершения реакции на поверхности каждой микросферы. Планшет считывали на анализаторе Bio Rad Luminex 200®. Каждая отдельная микросфера была идентифицирована, и результат ее биоанализа был количественно оценен на основе флуоресцентных репортерных сигналов.Концентрация была измерена с использованием данных средней интенсивности флуоресценции с использованием 5-параметрического метода аппроксимации логистической кривой.

Обнаружение мРНК человеческого ЭПО в органах мыши

Полную РНК из органов выделяли с помощью набора RNeasy (Qiagen) в соответствии с рекомендациями производителя. 10-50 мг ткани лизировали в буфере RLT (600 мкл) в Tissue LyserII (Qiagen) в течение 3-4 минут при максимальной скорости (30 Гц) и центрифугировали при 10 000 × g в течение 3 минут при 20 ° C. для истощения остатков тканей.Впоследствии супернатант переносили в колонки и подвергали дальнейшей обработке. РНК количественно определяли с помощью флуорометра Qubit 2.0 (Thermo Fisher Scientific), а качество оценивали с помощью NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific) путем измерения отношения 260/230. Исходя из выхода РНК, от 0,5 до 1 мкг общей РНК было преобразовано в кДНК. 100 нг кДНК использовали для количественного определения мРНК hEPO с использованием анализа зонда TaqMan, как описано выше. Количество мРНК hEPO в каждом органе (нг) нормализовали по относительной массе органа (г).

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с помощью GraphPad Prism v.7 (программное обеспечение Graphpad). Данные in vitro были проанализированы с помощью непарного двустороннего теста Стьюдента t , за исключением эффектов введения LNP на рост HTB-177, РНК и общее количество белка в клетках, которые были проанализированы с помощью однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с последующим множественным анализом Тьюки.